Návod na centrifúgovanie doštičiek PCR: Príprava 96-jamkových a 384-jamkových platničiek

Doštičková centrifúga PCR sa používa na krátke kroky odstreďovania v PCR, qPCR a vysokovýkonných pracovných postupoch molekulárnej biológie. V prípade 96-jamkových a 384-jamkových platní nie je cieľom zvyčajne ťažké oddelenie, ale zhromažďovanie kvapiek zo stien jamiek, zníženie bublín a pomoc pri usadzovaní kvapaliny na dne každej jamky pred tepelným cyklovaním, čítaním, skladovaním alebo následnou manipuláciou.

GlanLab poskytuje možnosti centrifúgy doštičiek a centrifúg na mikrodoštičky pre laboratóriá, ktoré potrebujú spoľahlivú prípravu platní. Pri výbere a dosková odstredivka , kupujúci by si namiesto výberu podľa rýchlosti mali skontrolovať formát platne, metódu tesnenia, metódu vyváženia, rozsah rýchlosti/RCF, bezpečnostné prvky a dennú kapacitu.

 

Prečo doštičky PCR potrebujú centrifugáciu

Zber kvapiek zo stien studne

Po pipetovaní, utesnení alebo zmiešaní môžu na bočnej stene každej jamky alebo na tesniacej fólii zostať malé kvapôčky. Doštičková centrifúga PCR pomáha presunúť tieto kvapôčky na dno jamiek krátkym krokom odstreďovania, čím sa príprava doštičiek pred ďalším procesom stáva konzistentnejšou.

Zníženie bublín pred PCR alebo qPCR

Po pipetovaní, zmiešaní alebo utesnení sa môžu objaviť bubliny. V pracovných tokoch PCR a qPCR môžu ovplyvniť umiestnenie kvapaliny, kvalitu tesnenia alebo optické čítanie. Krátky krok odstreďovania pomáha znižovať bežné problémy s manipuláciou s kvapalinou, ale nemal by byť popisovaný ako záruka lepších výsledkov PCR.

Krátke odstreďovanie po zmiešaní alebo uzavretí

Mnoho laboratórií vykonáva krátke odstreďovanie po pridaní činidiel, zmiešaní vzoriek alebo nanesení tesniacej fólie. Rýchlosť a čas by sa nemali kopírovať z nesúvisiacich online protokolov. Používatelia by sa mali riadiť pokynmi pre činidlá, pokynmi výrobcu platne, manuálom centrifúgy a internými laboratórnymi SOP.

 

96-jamkové vs. 384-jamkové platne rozdiely

96-jamkové platne: bežné a ľahšie sa s nimi manipuluje

96-jamková platňa je jedným z najbežnejších formátov v laboratóriách PCR a qPCR. V porovnaní s 384-jamkovými doštičkami má zvyčajne väčší objem jamky, jednoduchší priestor na pipetovanie a jednoduchšiu vizuálnu kontrolu. Pre mnohé rutinné laboratóriá stačí na dennú prípravu 96-jamková doštičková centrifúga.

384-jamkové platne: menší objem a vyššia citlivosť pri manipulácii

384-jamková platňa sa často používa na pracovné postupy s vyššou priepustnosťou. Pretože každá jamka obsahuje menší objem kvapaliny, kvapôčky, bubliny, kvalita tesnenia a umiestnenie platne sú dôležitejšie. Centrifúga, ktorá sa hodí na 96-jamkové platne, nemusí automaticky vyhovovať 384-jamkovým platniam.

Čo by si mal kupujúci skontrolovať pred výberom

Kupujúci by si mali overiť, či centrifúga podporuje 96-jamkové platne, 384-jamkové platne, platne s obrubou, doštičky s polovičnou obrubou, platne bez obruby, prúžky skúmaviek PCR a zatavené platne. Smer plnenia je tiež dôležitý, pretože niektoré mikrodoskové odstredivky používajú vertikálne zaťaženie, zatiaľ čo iné používajú rôzne štruktúry rotora.

 

PCR pásik, doštičky s obrubou a bez obruby

PCR prúžky a maloobjemové mikrodoštičky

Niektoré laboratóriá používajú 0,2 ml PCR skúmavky, 8-skúmavkové prúžky alebo formáty prúžkov s malým objemom namiesto plných PCR platničiek. V tomto prípade by si kupujúci mali skontrolovať, či centrifúga na mikrodoštičkách podporuje priamo PCR prúžky alebo či vyžaduje adaptéry.

PCR platne s obrubou, polosukňou a bez obruby

Obrubové, pololemové a bezlemové dosky sa líšia štruktúrou rámu a mechanickou podporou. Tieto rozdiely ovplyvňujú, ako doštička sedí vo vnútri centrifúgy, takže bezpečné uloženie je dôležitejšie ako všeobecné tvrdenie o 'kompatibilite doštičiek PCR'.

Doskové adaptéry a smer nakladania

Adaptéry môžu byť potrebné pre špecifické typy doštičiek alebo PCR stripy. Smer nakladania tiež ovplyvňuje rýchlosť a pohodlie. Vhodná doštičková centrifúga PCR by mala zodpovedať skutočnému formátu platne používanej v laboratóriu, nielen všeobecnému názvu kategórie.

 

Rýchle odstreďovanie verzus separačná centrifugácia

Doskové centrifúgy PCR sú určené hlavne na rýchle odstreďovanie

Doštičková centrifúga PCR je určená hlavne na krátku centrifugáciu platní. Bežne sa používa na zachytávanie kvapiek, redukciu bublín a usadzovanie tekutín. Líši sa od centrifúgy používanej na skúmavky s krvou, veľké fľaše alebo oddeľovanie ťažkých vzoriek.

Rozdiel od štandardných laboratórnych centrifúg

Štandardné centrifúgy môžu byť navrhnuté pre skúmavky, kónické skúmavky, fľaše, vzorky krvi alebo väčšie nádoby na vzorky. Naproti tomu odstredivka na mikrodoštičky je navrhnutá pre formát platne a pohodlie pri krátkom odstreďovaní. Kupujúci porovnávajú produkty laboratórnych centrifúg  by mali oddeľovať potreby prípravy platní od potrieb separácie skúmaviek.

Prečo rýchlosť nie je jediným faktorom

Rýchlosť je len jedna špecifikácia. Pri príprave platne PCR záleží aj na zrýchlení, brzdení, uzamknutí veka, detekcii nerovnováhy, prispôsobení platne, hladine hluku a stope. Kompaktný model so správnou kompatibilitou platní môže byť užitočnejší ako rýchlejší model, ktorý sa nehodí na laboratórne platne.

 

Problémy s vyvážením platní a tesniacou fóliou

Prečo na rovnováhe platní záleží

Doštičky PCR by sa mali vkladať symetricky podľa konštrukcie centrifúgy. Ak sa používa iba jedna platňa, niektoré centrifúgy môžu vyžadovať vyvažovaciu platňu. Pre usmernenie ako centrifugovať 96-jamkovú doštičku , vyváženie, utesnenie a spôsob vkladania by ste mali pred bežným použitím skontrolovať.

Tesniaci film a obavy z úniku

Pred centrifugáciou by sa mala správne aplikovať tesniaca fólia, lepiaca fólia, tepelné tesnenia a pásiky uzáveru. Nedostatočné utesnenie môže viesť k úniku alebo strate vzorky počas odstreďovania, takže používatelia by mali skontrolovať, či je platňa utesnená rovnomerne a či sedí v komore bez prekážok.

Bezpečná prevádzka pred a po centrifugácii

Dobrá doštičková centrifúga PCR by mala zahŕňať bezpečnú kontrolu veka a stabilnú prevádzku. Funkcie ako zámok veka, varovanie pred nevyváženosťou a plynulé brzdenie pomáhajú znižovať prevádzkové riziko. Používatelia by nemali obchádzať bezpečnostnú ochranu.

Tabuľka na výber centrifúgy na mikrodoštičkách

Tabuľka kompatibility platní

Kontrolný zoznam kupujúceho

Pred objednávkou potvrďte formát dosky, typ dosky, metódu tesnenia, maximálnu rýchlosť/RCF, výkon zrýchlenia a brzdenia, metódu vyváženia, zámok veka, detekciu nerovnováhy, hladinu hluku, stopu, napätie, požiadavku na zástrčku a podporu dodávateľa.

Smer konečného dopytu

Pri kontaktovaní dodávateľa uveďte formát dosky, typ dosky, metódu tesnenia, dennú kapacitu, očakávanú požiadavku na rýchle odstreďovanie, napätie a obmedzenia pracovného priestoru. Od GlanLab si môžete vyžiadať odporúčanie centrifúgy  na základe vašich potrieb na prípravu platne PCR.

 

Bežné chyby pri manipulácii

Výber skúmavky namiesto doskovej odstredivky

Skúmavky a doštičkové centrifúgy sú navrhnuté pre rôzne nosiče vzoriek. Pre PCR platne by sa nemala používať všeobecná skúmavková centrifúga, pokiaľ nie je jasne špecifikovaný kompatibilný rotor platní.

Ignorovanie kompatibility 384-jamkovej alebo obrubenej platne

Niektoré laboratóriá začínajú s 96-jamkovými platňami, ale neskôr prechádzajú na 384-jamkové alebo obrúbené formáty. Výber modelu so širšou kompatibilitou môže znížiť budúce potreby výmeny.

Použitie pevných hodnôt protokolu z nesúvisiacich zdrojov

Hodnoty rýchlosti a času by mali pochádzať z inštrukcií pre činidlá, vedenia platní, príručiek k centrifúge a laboratórnych SOP. Nastavenia univerzálnej centrifugácie PCR by sa nemali kopírovať bez overenia.

 

Záver

Doštičková centrifúga PCR by sa mala vybrať z hľadiska kompatibility platničiek, rýchleho odstreďovania, metódy vyváženia, bezpečnosti tesnenia a dennej efektívnosti pracovného toku. Pri príprave 96-jamkových a 384-jamkových platní by si kupujúci mali pred výberom modelu potvrdiť formát platne, typ platne, metódu tesnenia, rozsah rýchlosti/RCF, bezpečnostné prvky a priepustnosť.

GlanLab poskytuje doštičkové centrifúgy a mikrotitračné centrifúgy pre laboratóriá PCR/qPCR, molekulárne biologické laboratóriá a vysokovýkonné pracovné postupy prípravy vzoriek. Používatelia môžu zdieľať svoj formát platne, spôsob tesnenia, napätie a denné požiadavky na manipuláciu s GlanLab, aby si vybrali vhodnú odstredivku,kontaktujte nás.

 

FAQ

Na čo sa používa doštičková centrifúga PCR?

Používa sa hlavne na rýchle odstreďovanie PCR platní, zbieranie kvapiek zo stien jamiek, redukciu bublín a pomoc pri usadzovaní kvapaliny na dne jamiek.

Dokáže doštičková centrifúga PCR zvládnuť 96-jamkové a 384-jamkové platne?

Niektoré modely podporujú oba formáty, ale kupujúci musia potvrdiť kompatibilitu s konkrétnym typom dosky, výškou dosky a metódou tesnenia.

Je mikrotitračná centrifúga rovnaká ako štandardná centrifúga?

Nie. Mikrotitračná centrifúga je navrhnutá pre doštičkové formáty, zatiaľ čo štandardné centrifúgy sú často navrhnuté pre skúmavky, fľaše alebo iné nádoby na vzorky.

Potrebujem špeciálnu centrifúgu na doštičky PCR s okrajom?

Odstredivka musí zreteľne podopierať platne s obrubou, polosrubou alebo bez obruby. Pred nákupom by sa mala skontrolovať vôľa a podpora rámu.

Ako si mám vybrať doštičkovú centrifúgu s 96 jamkami?

Skontrolujte kompatibilitu dosky, rýchlosť/rozsah RCF, metódu vyváženia, bezpečnosť tesnenia, zrýchlenie/brzdenie, stopu, hladinu hluku a podporu dodávateľa.