Průvodce centrifugací pro PCR destičky: Příprava destiček s 96 a 384 jamkami

PCR destičková centrifuga se používá pro krátké kroky spin-down v PCR, qPCR a vysoce výkonných pracovních postupech molekulární biologie. U 96-jamkových a 384-jamkových destiček obvykle není cílem těžká separace, ale shromažďování kapiček ze stěn jamek, snižování bublin a napomáhání usazování kapaliny na dně každé jamky před tepelným cyklováním, odečítáním, skladováním nebo následnou manipulací.

Společnost GlanLab poskytuje možnosti odstředivek pro destičky a odstředivky pro mikrodestičky pro laboratoře, které potřebují spolehlivou přípravu destiček. Při výběru a deskové odstředivky , měli by kupující zkontrolovat formát desky, metodu těsnění, metodu vyvážení, rozsah rychlosti / RCF, bezpečnostní prvky a denní průchodnost namísto výběru pouze podle rychlosti.

 

Proč PCR destičky potřebují centrifugaci

Sbírání kapiček ze stěn studny

Po pipetování, utěsnění nebo promíchání mohou na boční stěně každé jamky nebo na uzavírací fólii zůstat malé kapičky. Odstředivka na destičky PCR pomáhá přesunout tyto kapičky na dno jamek pomocí krátkého kroku odstřeďování, čímž je příprava destiček před dalším procesem konzistentnější.

Redukce bublin před PCR nebo qPCR

Po pipetování, míchání nebo utěsnění se mohou objevit bubliny. V pracovních tocích PCR a qPCR mohou ovlivnit umístění kapaliny, kvalitu těsnění nebo optické čtení. Krátký krok centrifugace pomáhá snížit běžné problémy s manipulací s kapalinou, ale neměl by být popisován jako záruka lepších výsledků PCR.

Krátké odstředění po smíchání nebo uzavření

Mnoho laboratoří provádí krátkou rotaci po přidání činidel, smíchání vzorků nebo nanesení těsnící fólie. Rychlost a čas by neměly být kopírovány z nesouvisejících online protokolů. Uživatelé by se měli řídit pokyny pro reagencie, pokyny výrobce destiček, manuál centrifugy a interní laboratorní SOP.

 

Rozdíly 96-jamkových vs 384-jamkových destiček

96jamkové destičky: běžné a snadnější manipulace

96jamková destička je jedním z nejběžnějších formátů v laboratořích PCR a qPCR. Ve srovnání s 384jamkovými destičkami má obvykle větší objem jamky, snazší pipetovací prostor a jednodušší vizuální kontrolu. Pro mnoho rutinních laboratoří stačí pro každodenní přípravu centrifuga s 96 jamkami.

384jamkové destičky: menší objem a vyšší citlivost při manipulaci

Pro vysoce výkonné pracovní postupy se často používá 384jamková destička. Protože každá jamka obsahuje menší objem kapaliny, kapičky, bubliny, kvalita těsnění a umístění destičky jsou důležitější. Centrifuga, která se hodí na 96jamkové destičky, nemusí automaticky pasovat na 384jamkové destičky.

Co by si měli kupující před výběrem zkontrolovat

Kupující by si měli ověřit, zda centrifuga podporuje 96jamkové destičky, 384jamkové destičky, destičky s obrubou, poloobrubové destičky, destičky bez obruby, stripy zkumavek PCR a uzavřené destičky. Směr plnění je také důležitý, protože některé mikrodeskové odstředivky používají vertikální plnění, zatímco jiné používají různé struktury rotoru.

 

PCR strip, obrubové a neobrubové destičky

PCR stripy a maloobjemové mikrodestičky

Některé laboratoře používají 0,2 ml PCR zkumavky, 8-zkumavkové stripy nebo formáty proužků s malým objemem namísto plných PCR destiček. V tomto případě by kupující měli zkontrolovat, zda centrifuga na mikrotitrační destičky podporuje přímo PCR stripy nebo vyžaduje adaptéry.

PCR destičky s obrubou, polosukněmi a bez obruby

Lišty s lištami, polosukněmi a bez lišt se liší konstrukcí rámu a mechanickou podporou. Tyto rozdíly ovlivňují, jak destička sedí uvnitř centrifugy, takže bezpečné usazení je důležitější než obecné tvrzení o 'kompatibilitě destiček s PCR'.

Talířové adaptéry a směr nakládání

Pro specifické typy destiček nebo PCR stripy mohou být potřeba adaptéry. Směr zatížení také ovlivňuje rychlost a pohodlí obsluhy. Vhodná PCR destičková centrifuga by měla odpovídat skutečnému formátu destičky používanému v laboratoři, nikoli pouze obecnému názvu kategorie.

 

Rychlá rotace vs separační centrifugace

PCR deskové centrifugy jsou hlavně pro rychlou rotaci

Odstředivka pro PCR destičky je určena především pro krátkou centrifugaci destiček. Jeho běžné použití je sběr kapiček, redukce bublin a usazování kapaliny. Liší se od centrifugy používané pro zkumavky s krví, velké lahve nebo separaci těžkých vzorků.

Rozdíl od standardních laboratorních centrifug

Standardní centrifugy mohou být navrženy pro zkumavky, kónické zkumavky, lahvičky, vzorky krve nebo větší nádoby na vzorky. Naproti tomu odstředivka na mikrotitrační destičky je navržena pro formát destičky a pohodlí při krátkém odstřeďování. Kupující srovnávají produkty laboratorních centrifug  by měly oddělovat potřeby přípravy destiček od potřeb separace zkumavek.

Proč rychlost není jediným faktorem

Rychlost je pouze jedna specifikace. Pro přípravu PCR destiček záleží také na zrychlení, brzdění, zámku víka, detekci nerovnováhy, usazení destičky, hladině hluku a stopě. Kompaktní model se správnou kompatibilitou desek může být užitečnější než rychlejší model, který se nevejde na laboratorní desky.

 

Vyvážení desky a problémy s těsnicí fólií

Proč na vyvážení desek záleží

Destičky PCR by měly být naplněny symetricky podle konstrukce centrifugy. Pokud je použita pouze jedna destička, mohou některé centrifugy vyžadovat vyvažovací destičku. Pro návod na Jak centrifugovat 96jamkovou destičku , vyvážení, utěsnění a způsob plnění je třeba před rutinním použitím zkontrolovat.

Těsnící fólie a obavy z úniku

Před odstřeďováním by měly být správně aplikovány uzavírací fólie, lepicí fólie, tepelné spoje a krycí proužky. Špatné utěsnění může vést k úniku nebo ztrátě vzorku během odstřeďování, takže uživatelé by měli zkontrolovat, zda je destička utěsněna rovnoměrně a zda sedí v komoře bez překážek.

Bezpečný provoz před a po centrifugaci

Dobrá centrifuga pro PCR destičky by měla zahrnovat bezpečnou kontrolu víka a stabilní provoz. Funkce, jako je zámek víka, varování před nevyvážeností a plynulé brzdění, pomáhají snížit provozní riziko. Uživatelé by neměli obcházet bezpečnostní ochranu.

Tabulka pro výběr centrifugy na mikrotitračních destičkách

Tabulka kompatibility desek

Kontrolní seznam kupujícího

Před objednávkou potvrďte formát desky, typ desky, metodu těsnění, maximální rychlost/RCF, výkon zrychlení a brzdění, metodu vyvážení, zámek víka, detekci nevyváženosti, hladinu hluku, stopu, napětí, požadavky na zástrčku a podporu dodavatele.

Směr závěrečného dotazu

Při kontaktování dodavatele uveďte formát desky, typ desky, metodu těsnění, denní průchodnost, očekávaný požadavek na rychlé odstřeďování, napětí a omezení pracovního prostoru. Můžete si vyžádat doporučení centrifugy  od GlanLab na základě vašich potřeb na přípravu destiček pro PCR.

 

Běžné manipulační chyby

Volba zkumavky místo deskové centrifugy

Odstředivky na zkumavky a odstředivky na destičky jsou navrženy pro různé nosiče vzorků. Pro destičky PCR by se neměla používat obecná zkumavka, pokud není jasně specifikován kompatibilní rotor destiček.

Ignorování kompatibility 384jamkových destiček nebo destiček s obrubou

Některé laboratoře začínají s 96-jamkovými destičkami, ale později přecházejí na 384-jamkové nebo obruby. Výběr modelu s širší kompatibilitou může snížit budoucí potřeby výměny.

Použití pevných hodnot protokolu z nesouvisejících zdrojů

Hodnoty rychlosti a času by měly pocházet z instrukcí pro reagencie, pokynů pro destičky, manuálů k centrifugám a laboratorních SOP. Univerzální nastavení centrifugace PCR by se nemělo kopírovat bez ověření.

 

Závěr

Odstředivka pro PCR destičky by měla být vybrána pro kompatibilitu destiček, výkon rychlého odstřeďování, metodu vyvážení, bezpečnost těsnění a denní efektivitu pracovního postupu. Pro přípravu 96jamkových a 384jamkových destiček by si kupující měli před výběrem modelu potvrdit formát destičky, typ destičky, metodu těsnění, rozsah rychlosti/RCF, bezpečnostní funkce a průchodnost.

GlanLab poskytuje roztoky pro odstředivky na plotny a mikrodestičkové odstředivky pro laboratoře PCR/qPCR, laboratoře molekulární biologie a vysoce výkonné pracovní postupy přípravy vzorků. Uživatelé mohou sdílet svůj formát destičky, metodu těsnění, napětí a denní požadavky na manipulaci s GlanLab za účelem výběru vhodné centrifugy,kontaktujte nás.

 

FAQ

K čemu slouží PCR destičková centrifuga?

Používá se hlavně pro rychlé odstředění PCR destiček, shromažďování kapiček ze stěn jamek, snižování bublin a napomáhání usazování kapaliny na dně jamek.

Může centrifuga pro PCR destičky pracovat s destičkami s 96 a 384 jamkami?

Některé modely podporují oba formáty, ale kupující musí potvrdit kompatibilitu s konkrétním typem desky, výškou desky a metodou těsnění.

Je mikrotitrační centrifuga stejná jako standardní centrifuga?

Ne. Mikrotitrační centrifuga je navržena pro formáty destiček, zatímco standardní centrifugy jsou často navrženy pro zkumavky, lahvičky nebo jiné nádoby na vzorky.

Potřebuji speciální centrifugu pro destičky PCR s obrubou?

Odstředivka musí zřetelně podepírat desky s obrubou, poloobrubou nebo bez obruby. Před nákupem je třeba zkontrolovat vůli a podpěru rámu.

Jak si mám vybrat 96jamkovou destičkovou centrifugu?

Zkontrolujte kompatibilitu desky, rychlost/rozsah RCF, metodu vyvážení, bezpečnost těsnění, zrychlení/brždění, stopu, hladinu hluku a podporu dodavatele.