Separazione di siero e plasma: quali sono le impostazioni della centrifuga e il tipo di rotore che contano?

È necessario selezionare una centrifuga per siero o plasma  in base alla provetta per sangue, all'additivo, al design del rotore, all'RCF e al tempo richiesti, nonché al carico di lavoro giornaliero del laboratorio. Sia il siero che il plasma provengono da campioni di sangue, ma le condizioni prima della centrifugazione sono diverse. Le provette per il siero normalmente richiedono la formazione di coaguli, mentre le provette per il plasma contengono un anticoagulante destinato a prevenire la coagulazione.

GlanLab consiglia di controllare il flusso di lavoro completo di preparazione del campione prima di selezionare l'attrezzatura. Una centrifuga adeguata deve supportare esattamente le provette, gli adattatori, i requisiti di separazione e i controlli operativi elencati nella SOP del laboratorio. Questo articolo si concentra sulla configurazione della centrifuga e sulla separazione degli strati del campione, non sulla diagnosi clinica o su un protocollo medico universale.

1. Differenze nella preparazione dei campioni di siero e plasma

I campioni di siero richiedono una fase di coagulazione

Il siero viene preparato dal sangue raccolto in una provetta per siero semplice, una provetta per l'attivatore della coagulazione o una provetta per il separatore di siero. Prima della centrifugazione, il campione normalmente rimane indisturbato fino al raggiungimento delle condizioni di coagulazione specificate dal produttore della provetta o dalla SOP del laboratorio.

Dal punto di vista dell'apparecchiatura, la centrifuga deve accettare la provetta esatta e fornire forza, tempo, accelerazione e frenata stabili. La centrifugazione prima del completamento della fase di preparazione del campione richiesta può ridurre la chiarezza della separazione finale.

I campioni di plasma utilizzano provette anticoagulanti

Il plasma viene preparato dal sangue raccolto in una provetta contenente un anticoagulante. I comuni sistemi di provette possono utilizzare additivi a base di EDTA, eparina o citrato, a seconda del flusso di lavoro del laboratorio.

La centrifuga non determina l'additivo corretto. Il suo ruolo è quello di elaborare il tubo selezionato nelle condizioni indicate nella SOP approvata. I laboratori che confrontano le apparecchiature possono rivedere un apposito centrifugare il sangue  dopo aver confermato il tipo di campione e i requisiti della provetta.

Gli strati finali non sono identici

Dopo la centrifugazione, le provette per siero normalmente mostrano uno strato liquido sopra la barriera del coagulo o del separatore. I tubi al plasma trattengono uno strato liquido anticoagulato sopra il materiale cellulare.

La netta separazione dipende da qualcosa di più della velocità massima. La preparazione del tubo, la geometria del rotore, l'RCF, il tempo e la decelerazione influiscono tutti sulla stabilità e visibilità degli strati dopo la corsa.

2. Tipo di tubo e considerazioni sugli additivi

Identificare la provetta esatta per il sangue

Il solo colore della provetta non è sufficiente per la scelta della centrifuga. I laboratori dovrebbero registrare il produttore, il numero del prodotto, il volume nominale, il diametro, la lunghezza totale, l'altezza del tappo e la forma del fondo.

Due provette con lo stesso volume indicato potrebbero richiedere adattatori diversi. Uno potrebbe trovarsi troppo in alto nel rotore, mentre un altro potrebbe spostarsi all'interno di un supporto sovradimensionato. Il supporto adeguato e la distanza della palpebra devono essere confermati prima dell'uso di routine.

Additivi e separatori influiscono sulla corrispondenza delle apparecchiature

Le provette semplici per siero, le provette per l'attivatore della coagulazione, le provette per il separatore di gel e le provette per l'anticoagulante possono avere istruzioni di centrifugazione diverse. Le barriere di gel e i separatori meccanici possono anche avere requisiti di rotore o di frenatura.

Il laboratorio deve seguire le istruzioni della provetta e la relativa SOP convalidata anziché applicare un'impostazione a ogni provetta di sangue.

Gli adattatori devono supportare il tubo

Un tubo inserito nell'apertura del rotore non conferma automaticamente la compatibilità. Il tubo deve rimanere supportato durante l'accelerazione, il funzionamento a piena velocità e la decelerazione.

Confermare se sono necessari cuscini in gomma, manicotti, secchi o adattatori dedicati. La scelta dell'adattatore influisce anche sul numero di provette utilizzabili per ciclo bilanciato.

 

3. Perché il tipo di rotore influisce sulla chiarezza dello strato

I rotori oscillanti producono una posizione orizzontale del tubo

Un rotore oscillante consente alle tazze di spostarsi verso l'esterno all'aumentare della velocità. Durante la corsa, le provette per il sangue si avvicinano alla posizione orizzontale. Ciò può creare un'interfaccia di separazione più piatta e rendere più facile l'osservazione dello strato superiore di siero o plasma in molti flussi di lavoro di routine.

Tuttavia, non è necessario un rotore oscillante per ogni provetta per sangue. Il laboratorio deve seguire le istruzioni del produttore della provetta e la SOP approvata.

I rotori ad angolo fisso mantengono i tubi ad angolo costante

Un rotore ad angolo fisso mantiene le provette inclinate durante tutta la centrifugazione. Il materiale separato segue un percorso angolato, quindi l'interfaccia finale potrebbe apparire più inclinata rispetto a quella di un secchio orizzontale.

Alcune provette per sangue consentono il trattamento ad angolo fisso, ma il tempo richiesto o il metodo di frenatura potrebbero differire. IL La guida del rotore ad angolo fisso e oscillante  fornisce un confronto più ampio tra la geometria del rotore e le applicazioni di routine.

La frenata può influenzare l'interfaccia finale

Una forte frenata arresta rapidamente il rotore e potrebbe disturbare gli strati separati o una barriera di gel. Alcuni flussi di lavoro consentono una frenata normale, mentre altri richiedono una frenata ridotta o un rallentamento più lungo.

Il freno non dovrebbe essere disattivato automaticamente. La sua impostazione deve seguire le istruzioni della provetta ematica e la SOP del laboratorio.

 

4. RCF/Tempo deve seguire la SOP del laboratorio

RCF è più utile del solo RPM

RPM descrive la velocità del rotore. RCF descrive la forza centrifuga generata con un raggio del rotore indicato. Due centrifughe funzionanti allo stesso numero di giri possono applicare forze diverse al campione.

Quando si sostituiscono le apparecchiature, i laboratori dovrebbero registrare il tipo di rotore, il raggio, l'RCF, il tempo e il metodo di frenatura esistenti. Il trasferimento del solo RPM potrebbe non riprodurre le stesse condizioni operative.

Il GlanLab la guida alla centrifuga clinica  offre informazioni aggiuntive sulla corrispondenza dei campioni clinici, delle provette, della capacità e delle configurazioni del rotore.

Il tempo dipende dal tubo e dal rotore

Un tempo di centrifugazione sviluppato per un rotore oscillante non dovrebbe essere trasferito automaticamente a un rotore ad angolo fisso. Il design della provetta, la geometria del rotore e l'obiettivo di separazione possono influenzare il tempo di esecuzione approvato.

Per questo motivo, questo articolo non fornisce un'impostazione fissa per siero o plasma. Le istruzioni delle provette, i requisiti del test e la SOP del laboratorio rimangono i riferimenti finali.

Anche l’accelerazione e la temperatura possono avere importanza

Alcuni flussi di lavoro specificano l'accelerazione, la decelerazione o la temperatura controllate. Una centrifuga dovrebbe fornire questi controlli quando sono richiesti dal processo di laboratorio.

La refrigerazione non dovrebbe essere scelta solo perché appare più avanzata. Il laboratorio deve confermare se è necessario il controllo della temperatura per i suoi campioni e le procedure di analisi.

5. Pianificazione della capacità per il flusso di lavoro quotidiano

Calcolare le provette utilizzabili per corsa

La capacità massima del rotore può differire dalla capacità pratica. Le dimensioni dei tubi, gli adattatori, le posizioni di bilanciamento e i formati misti dei tubi possono ridurre il numero di elaborati in un ciclo.

Un rotore pubblicizzato come avente 24 posizioni potrebbe non contenere 24 provette per sangue reali del laboratorio. La capacità deve essere confermata con la combinazione proposta di tubo e adattatore.

Pianificare la domanda nelle ore di punta

Il volume medio giornaliero non mostra se la centrifuga è in grado di gestire il periodo di maggior traffico. Un laboratorio può elaborare tutti i campioni entro la fine della giornata, ma subisce comunque ritardi quando arrivano più lotti insieme.

Un semplice calcolo è:

Picco tubi all'ora ÷ tubi utilizzabili per ciclo = cicli minimi durante l'ora di maggior traffico

Il tempo totale del ciclo dovrebbe includere carico, accelerazione, centrifugazione, frenata, scarico e pulizia.

I tubi misti necessitano di un caricamento flessibile

I laboratori che elaborano provette per siero e plasma di diverse dimensioni potrebbero necessitare di adattatori intercambiabili o di più di un set di cestelli. Il personale dovrebbe confermare se formati di provette diversi possono essere bilanciati e lavorati in modo sicuro nello stesso rotore.

Un rotore più grande è utile solo quando corrisponde alla miscela reale delle provette e mantiene il caricamento semplice.

 

6. Come discutere i requisiti con il fornitore

Prima di richiedere l'attrezzatura, preparare il campione principale e le informazioni operative in un'unica tabella.

Quando si sostituisce una centrifuga esistente, fornire il modello attuale e i dettagli del rotore. Ciò consente al fornitore di confrontare le configurazioni vecchie e proposte invece di consigliare una macchina solo in base alla velocità e alla capacità.

Laddove la compatibilità sia incerta, i laboratori possono inviare disegni di tubi, fotografie o campioni fisici. Prima dell'ordine è preferibile la conferma scritta della combinazione centrifuga, rotore, cestello e adattatore.

 

Conclusione

La scelta di una centrifuga per siero o plasma richiede molto più del semplice confronto degli RPM o della capacità massima della provetta. È necessario considerare insieme la progettazione delle provette ematiche, il flusso di lavoro della coagulazione o dell'anticoagulante, la posizione del rotore, l'RCF, il tempo, la frenatura, la trasparenza degli strati e la produttività giornaliera.

GlanLab consiglia di seguire la POS del laboratorio approvata e le istruzioni del produttore della provetta per sangue prima di finalizzare la configurazione della centrifuga. Per discutere del flusso di lavoro del siero o del plasma, contattaci  con le specifiche del tubo, la preferenza del rotore, l'RCF e l'ora richiesti, il volume giornaliero e la tensione locale.

 

Domande frequenti

Il siero viene centrifugato prima o dopo la coagulazione?

Le provette per siero vengono normalmente centrifugate dopo la condizione di coagulazione indicata nelle istruzioni delle provette o nella SOP di laboratorio.

Il plasma richiede una provetta anticoagulante?

SÌ. La preparazione del plasma utilizza la provetta anticoagulante specificata dal flusso di lavoro del laboratorio.

È sempre necessario un rotore oscillante?

No. La scelta del rotore deve seguire le istruzioni della provetta per il sangue e la SOP approvata.

Il siero e il plasma possono utilizzare la stessa centrifuga?

Sì, quando i controlli di tubi, rotore, RCF, tempo e frenatura supportano entrambi i flussi di lavoro.

Un laboratorio dovrebbe utilizzare RPM o RCF?

RCF è più utile per confrontare diverse dimensioni di rotori, ma la SOP di laboratorio rimane il riferimento finale.