6 مفاهيم خاطئة شائعة في عملية استخلاص الحمض النووي بطريقة الخرزة المغناطيسية

01 الاعتقاد الخاطئ 1: كلما زاد عدد الخرز المغناطيسي، كان تأثير الاستخراج أفضل.

يميل العديد من المعلمين إلى زيادة كمية الخرز المغناطيسي عندما لا يكون تأثير الاستخلاص جيدًا، معتقدين أن المزيد من الخرز المغناطيسي سيكون قادرًا على امتصاص المزيد من الأحماض النووية. ومع ذلك، لا بد من القول أن هذه الفكرة غير مرغوب فيها.

السمة الرئيسية للخرزات المغناطيسية هي أنه يمكن تشتيتها في السائل وفصلها عن الطور السائل بطريقة صلبة تحت تأثير المجال المغناطيسي المطبق، أي نظام كاشف، يجب أن تكون نسبة الخرز المغناطيسي والسائل عتبة معينة ، على نسبة معينة، لن يتمكن عدد كبير جدًا من الخرز المغناطيسي من التفريق بالتساوي في السائل بسبب فقدان خصائص التشتت، ولكنه أيضًا يجعل عملية الغسيل لا يمكن أن تكون كافية لزيادة كفاءة خرزات الحمض النووي والاتصال السائل.

كما أن الخرز المغناطيسي المفرط سوف يمتص المزيد من الشوائب ، مما له تأثير كبير على تأثير إزالة الشوائب. حتى أن هناك أوقاتًا يمتص فيها عدد كبير جدًا من الخرز المغناطيسي البروتياز والليزوزيم والمكونات الوظيفية الأخرى التي تلعب دورًا رئيسيًا في النظام السائل، مما يؤدي إلى عدم كفاءة المجموعة بأكملها. في كثير من الأحيان يكون تأثير الاستخلاص ضعيفًا، قم بتقليل كمية الخرز المغناطيسي المستخدم، ولكنها الطريقة المثلى لتحسين تأثير الاستخلاص.

عادةً ما تكون جرعة الخرزة المرجعية التي تقدمها مجموعة طريقة الخرزة المغناطيسية مفرطة قليلاً ، لذلك لا توجد حالات كثيرة تحتاج فيها جرعة الخرزة إلى زيادة لتحسين كفاءة الامتزاز. ومع ذلك، إذا تقرر أن تأثير الاستخراج ضعيف بسبب عدم كفاية جرعة الحبة، فمن الممكن تحسين تأثير الاستخراج عن طريق زيادة جرعة الحبة ضمن نطاق معين.

02 المفهوم الخاطئ 2: كلما زاد عدد الكواشف المستخدمة، كان تأثير الاستخلاص أفضل.

تأثير التحلل ليس جيدًا؟ إضافة المزيد من الحل تحلل. تأثير الغسيل ليس جيدا؟ أضف المزيد من محلول الغسيل. هذا هو التفكير المعتاد للعديد من العملاء في استخدام مجموعات الكواشف.

أما بالنسبة لطريقة الخرز المغناطيسي فإن كل زيادة في حجم السائل تقلل من فرصة تصادم الخرزات المغناطيسية ، كما أن تقليل فرصة تصادم الخرزات المغناطيسية سيؤدي إلى انخفاض كبير في معدل الامتصاص. في كثير من الأحيان، على الرغم من أن الزيادة في محلول التحلل ومحلول الغسيل يمكن أن تلعب بالفعل دورًا في تعزيز دور التحلل والغسيل، إلا أن جوهر طريقة استخراج الخرز المغناطيسي هو كفاءة امتصاص الخرز المغناطيسي للأحماض النووية، لا يمكن ضمان كفاءة كفاءة تصادم الخرز المغناطيسي لا يمكن أن تضمن كفاءة استخراج الحمض النووي، وبالتالي فإن الزيادة البسيطة في استخدام الكواشف لتحسين تأثير الاستخراج ليست بالضرورة فعالة تمامًا.

03 الاعتقاد الخاطئ 3: كلما زاد عدد مرات الغسيل، كان تأثير الاستخلاص أفضل.

عندما يحتوي الحمض النووي المستخرج على الكثير من الشوائب، سيفكر المستخدم في غسل المزيد من المرات للحصول على المزيد من الحمض النووي النقي. إن زيادة عدد الغسلات يؤدي بالفعل إلى تنقية الأحماض النووية، ولكن مع الأخذ في الاعتبار أن كل غسلة ستفقد كمية معينة من الأحماض النووية، وتزيد من إمكانية التحلل المائي لكسر الحمض النووي، لذلك بشكل عام، يتم التحكم في عدد الغسلات في 2 ~ 4 مرات مناسب.

04 المفهوم الخاطئ 4: كلما زاد عدد العينات المأخوذة، كان تأثير الاستخراج أفضل

في حالة أن العينة ليست جديدة بما فيه الكفاية أو أن محتوى الحمض النووي نفسه صغير جدًا، فغالبًا ما يكون تأثير استخلاص الحمض النووي غير جيد، وسيستخدم العديد من المعلمين المزيد من العينات لزيادة كمية استخلاص الحمض النووي.

ومع ذلك، فإن مجرد زيادة كمية العينة المأخوذة سيؤدي في بعض الأحيان إلى إدخال الكثير من الشوائب بما يتجاوز قدرة المحللة على التحلل، وسيؤدي أيضًا إلى تقليل كفاءة الاستخراج، لذلك لا يوصى بتحقيق هدف زيادة كمية الاستخراج بمجرد زيادة كمية العينة المأخوذة.

إذا كان حجم الاستخراج منخفضًا جدًا بالفعل بسبب عدم كفاية حجم العينة، فمن المستحسن المرور بخطوة التخصيب أو التركيز في المعالجة المسبقة قبل البدء في الاستخراج. أو زيادة اكتمال التحلل لكشف المزيد من الأحماض النووية يعد أيضًا حلاً.

05 المفهوم الخاطئ 5: إذا كان أحد أنواع الخرزات جيدًا، فيجب أن يعمل بشكل جيد في جميع التجارب

هناك أنواع مختلفة من الخرز المغناطيسي، وحجم جسيمات مختلف، وتشتت مختلف، وزمن استجابة مغناطيسي مختلف، ومصفوفة قاعدة تغليف مختلفة، ومجموعات وظيفية مختلفة لتعديل الطبقة الخارجية، وكثافة تغليف مختلفة، وأطوال أذرع مجموعة وظيفية مختلفة، مما سيؤدي إلى مجموعة واسعة من خصائص الخرز المغناطيسي.

ولذلك، يتم تكييف الخرز المغناطيسي المختلفة مع تجارب وأنظمة مختلفة. تمامًا كما أن نفس الكواشف لاستخراج الحمض النووي ليست لها نفس الصيغة تمامًا، فإن نفس الخرزات المغناطيسية المطبقة على استخلاص الحمض النووي ليست هي نفسها تمامًا في الطبيعة.

تُظهر بعض الخرزات المغناطيسية كفاءة امتصاص أعلى في استخلاص الحمض النووي الكبير، في حين أن بعضها الآخر أكثر ملاءمة لاستخراج الحمض النووي النزر. بعض الخرز المغناطيسي مناسب للسلسلة الحمضية من أنظمة الكاشف، وبعض الخرز المغناطيسي مناسب للسلسلة القلوية من أنظمة الكاشف. تتمتع بعض الخرزات المغناطيسية باستجابة مغناطيسية جيدة ولكن سرعة ترسيب سريعة، وهي أكثر ملاءمة للمستخرج الأوتوماتيكي من نوع القضيب المغناطيسي؛ تتميز بعض الخرزات المغناطيسية بسرعة استقرار بطيئة ولكن وقت استجابة مغناطيسي طويل، وهو أكثر ملاءمة للمستخرج التلقائي من نوع الماصة.

نادرًا ما تكون الخرزات المغناطيسية مناسبة لجميع التجارب، بالإضافة إلى المجموعة الثابتة التي تحتوي، في معظم الحالات، على الخرز المغناطيسي وأنظمة الكاشف التي يتعين عليها إجراء قدر معين من الوقت مع التعديل.

06 المفهوم الخاطئ 6: المقارنة مع مجموعة معينة ليست جيدة، أي أن الخرز المغناطيسي ليس جيدًا.

العديد من العملاء في عملية فحص الخرز المغناطيسي في نظام الكاشف الناضج بالفعل، ببساطة كمية متساوية من استبدال الخرز المغناطيسي، تستخدم لمقارنة تأثير الخرز المغناطيسي.

سيستنتج هذا بسهولة أن خرزة مغناطيسية معينة ليست فعالة، ولكن في الواقع، نظرًا لاختلاف الخرزات المغناطيسية المناسبة للأنظمة المختلفة والجرعات المختلفة، فغالبًا ما تحتاج إلى تعديل للحصول على نتائج استخلاص أفضل.