01 Concepție greșită 1: cu cât mai multe margele magnetice, cu atât efectul de extracție este mai bun.
Mulți profesori au tendința de a crește cantitatea de margele magnetice atunci când efectul de extracție nu este bun, gândindu-se că mai multe margele magnetice vor putea absorbi mai mulți acizi nucleici. Cu toate acestea, trebuie spus că această idee nu este de dorit.
Caracteristica principală a margelelor magnetice este că pot fi atât dispersate în lichid, cât și separate de faza lichidă într-o manieră solidă sub acțiunea unui câmp magnetic aplicat, orice sistem de reactiv, raportul dintre margele magnetice și lichid ar trebui să fie un anumit prag , peste un anumit raport, prea multe margele magnetice nu se vor putea dispersa uniform în lichid din cauza proprietăților sale de spălare, dar nu pot crește suficient, dar pierderea proprietăților sale de spălare poate crește. eficiența bilelor de acid nucleic și contactul cu lichidul.
Și margele magnetice excesive vor absorbi și mai multe impurități , ceea ce are o mare influență asupra efectului de îndepărtare a impurităților. Există chiar și momente în care prea multe margele magnetice vor adsorbi protează, lizozimă și alte componente funcționale care joacă un rol major în sistemul lichid, ceea ce duce la ineficiența întregului kit. Sunt de multe ori când efectul de extracție este slab, reduceți cantitatea de margele magnetice utilizate, dar este modalitatea optimă de îmbunătățire a efectului de extracție.
De obicei, doza de sferă de referință dată de kitul metodei sferelor magnetice este ușor excesivă , așa că nu sunt multe cazuri în care doza de sferele trebuie crescută pentru a îmbunătăți eficiența adsorbției. Cu toate acestea, dacă se determină că efectul de extracție este slab din cauza dozării insuficiente a sferelor, este posibil să se îmbunătățească efectul de extracție prin creșterea dozei sferelor într-un anumit interval.
02 Concepție greșită 2: Cu cât se folosesc mai mulți reactivi, cu atât efectul de extracție este mai bun.
Efectul de liză nu este bun? Adăugați mai multă soluție de liză. Efectul de spălare nu este bun? Adăugați mai multă soluție de spălare. Aceasta este gândirea obișnuită a multor clienți în utilizarea truselor de reactivi.
Cu toate acestea, pentru metoda margelelor magnetice, fiecare creștere a volumului lichidului reduce șansa de coliziune a margelelor magnetice , iar reducerea șansei de ciocnire a margelelor magnetice va duce la o scădere semnificativă a ratei de adsorbție. Așadar, foarte adesea, deși creșterea soluției de liză și a soluției de spălare poate juca într-adevăr un rol în îmbunătățirea rolului lizei și spălării, dar nucleul metodei de extracție a granulelor magnetice este eficiența absorbției granulelor magnetice a acizilor nucleici, nu poate garanta eficiența coliziunii granulelor magnetice eficiența coliziunii nu poate garanta eficiența extracției de acid nucleic, astfel încât efectul de extracție simplă a reactivului este îmbunătățit în utilizarea extragerii. nu neapărat complet eficient.
03 Concepție greșită 3: Cu cât vă spălați de mai multe ori, cu atât efectul de extracție este mai bun.
Când acidul nucleic extras are prea multe impurități, utilizatorul va lua în considerare spălarea de mai multe ori pentru a obține mai mult acid nucleic pur. Creșterea numărului de spălări este într-adevăr propice pentru purificarea acizilor nucleici, dar ținând cont de faptul că fiecare spălare va pierde o anumită cantitate de acizi nucleici și va crește posibilitatea de hidroliză a fracturii acidului nucleic, deci, în general, numărul de spălări este controlat în 2 ~ 4 ori este adecvat.
04 Concepție greșită 4: cu cât sunt luate mai multe probe, cu atât efectul de extracție este mai bun
În cazul în care proba nu este suficient de proaspătă sau conținutul de acid nucleic în sine este foarte mic, adesea efectul de extracție a acidului nucleic nu este bun, mulți profesori vor folosi mai multe probe pentru a crește cantitatea de extracție a acidului nucleic.
Cu toate acestea, pur și simplu creșterea cantității de probă prelevată va introduce uneori prea multe impurități dincolo de capacitatea lizatului de a liza și va reduce, de asemenea, eficiența extracției, așa că nu se recomandă atingerea obiectivului de creștere a cantității de extracție prin simpla creștere a cantității de probă prelevată.
Dacă volumul de extracție este într-adevăr prea mic din cauza volumului insuficient de probă, se recomandă să treacă printr-o etapă de îmbogățire sau de concentrare în pretratament înainte de a începe extracția. Sau creșterea completității lizei pentru a expune mai mulți acizi nucleici este, de asemenea, o soluție.
05 Concepție greșită 5: Dacă un tip de mărgele este bun, ar trebui să funcționeze bine în toate experimentele
Există diferite tipuri de margele magnetice, dimensiuni diferite ale particulelor, dispersibilitate diferită, timp de răspuns magnetic diferit, matrice de bază de încapsulare diferită, grupuri funcționale diferite de modificare a stratului exterior, densitate de încapsulare diferită, lungimi diferite ale brațului grupului funcțional, ceea ce va duce la o gamă largă de caracteristici ale margelelor magnetice.
Prin urmare, diferitele margele magnetice sunt adaptate la diferite experimente și sisteme. La fel cum aceiași reactivi pentru extracția acidului nucleic nu sunt exact aceeași formulă, aceleași margele magnetice aplicate extracției acidului nucleic nu sunt exact aceleași în natură.
Unele margele magnetice prezintă o eficiență de adsorbție mai mare în extracția acidului macronucleic, în timp ce altele sunt mai potrivite pentru extracția urmelor de acid nucleic. Unele margele magnetice sunt potrivite pentru serii acide de sisteme de reactivi, iar unele margele magnetice sunt potrivite pentru seria alcaline de sisteme de reactivi. Unele margele magnetice au un răspuns magnetic bun, dar o viteză rapidă de așezare, ceea ce este mai potrivit pentru extractorul automat de tip tijă magnetică; unele margele magnetice au viteză lentă de decantare, dar timp de răspuns magnetic lung, ceea ce este mai potrivit pentru extractorul automat de tip pipetă.
Rareori o perle magnetice poate fi potrivită pentru toate experimentele, în plus față de trusa fixă cu, în cele mai multe cazuri, margele magnetice și sistemele de reactivi trebuie să facă o anumită perioadă de timp cu ajustarea.
06 Concepție greșită6: Comparația cu un anumit kit nu este bună, adică margelele magnetice nu sunt bune.
Mulți clienți în procesul de filtrare a margelelor magnetice în sistemul de reactiv deja matur, pur și simplu o cantitate egală de înlocuire a margelelor magnetice, utilizate pentru a compara efectul margelelor magnetice.
Acest lucru va concluziona cu ușurință că o anumită sferă magnetică nu este eficientă, dar, de fapt, datorită diferitelor bile magnetice potrivite pentru diferite sisteme și dozajul este diferit, adesea trebuie ajustată pentru a obține rezultate de extracție mai bune.
