01 Błędne przekonanie 1: Im więcej kulek magnetycznych, tym lepszy efekt ekstrakcji.
Wielu nauczycieli ma tendencję do zwiększania ilości kulek magnetycznych, gdy efekt ekstrakcji nie jest dobry, myśląc, że więcej kulek magnetycznych będzie w stanie wchłonąć więcej kwasów nukleinowych. Trzeba jednak powiedzieć, że pomysł ten nie jest pożądany.
Główną cechą kulek magnetycznych jest to, że można je zarówno rozproszyć w cieczy, jak i oddzielić od fazy ciekłej w sposób stały pod wpływem przyłożonego pola magnetycznego. W przypadku dowolnego układu odczynników stosunek kulek magnetycznych do cieczy powinien wynosić określony próg , powyżej pewnego stosunku zbyt wiele kulek magnetycznych nie będzie w stanie równomiernie rozproszyć się w cieczy ze względu na utratę jej właściwości dyspersyjnych, ale także sprawi, że proces przemywania nie będzie wystarczający do zwiększenia wydajności kulek kwasu nukleinowego i kontaktu z cieczą.
Nadmierne kulki magnetyczne będą również adsorbować więcej zanieczyszczeń , co ma ogromny wpływ na efekt usuwania zanieczyszczeń. Zdarzają się nawet chwile, gdy zbyt wiele kulek magnetycznych będzie adsorbować proteazę, lizozym i inne składniki funkcjonalne, które odgrywają główną rolę w układzie płynnym, co prowadzi do nieefektywności całego zestawu. W wielu przypadkach efekt ekstrakcji jest słaby, należy zmniejszyć ilość używanych kulek magnetycznych, ale jest to optymalny sposób na poprawę efektu ekstrakcji.
Zwykle referencyjna dawka kulek podana w zestawie do metody kulek magnetycznych jest nieco zawyżona , więc nie ma wielu przypadków, w których należy zwiększyć dawkę kulek, aby poprawić skuteczność adsorpcji. Jeśli jednak okaże się, że efekt ekstrakcji jest słaby z powodu niewystarczającej dawki kulek, można poprawić efekt ekstrakcji poprzez zwiększenie dawki kulek w pewnym zakresie.
02 Błędne przekonanie 2: Im więcej użytych odczynników, tym lepszy efekt ekstrakcji.
Efekt lizy nie jest dobry? Dodać więcej roztworu lizującego. Efekt prania nie jest dobry? Dodaj więcej roztworu myjącego. Jest to zwyczajowe myślenie wielu klientów podczas korzystania z zestawów odczynników.
Jednakże w przypadku metody kulek magnetycznych każde zwiększenie objętości cieczy zmniejsza ryzyko zderzenia kulek magnetycznych , a zmniejszenie ryzyka kolizji kulek magnetycznych doprowadzi do znacznego zmniejszenia szybkości adsorpcji. Bardzo często, chociaż zwiększenie ilości roztworu do lizy i roztworu do płukania może rzeczywiście odgrywać rolę we wzmocnieniu roli lizy i przemywania, ale rdzeniem metody ekstrakcji za pomocą kulek magnetycznych jest skuteczność adsorpcji kwasów nukleinowych przez kulki magnetyczne, nie może to zagwarantować skuteczności skuteczności zderzenia kulek magnetycznych nie może zagwarantować skuteczności ekstrakcji kwasów nukleinowych, więc proste zwiększenie użycia odczynników w celu poprawy efektu ekstrakcji niekoniecznie jest całkowicie skuteczne.
03 Błędne przekonanie nr 3: Im więcej prań, tym lepszy efekt ekstrakcji.
Jeżeli wyekstrahowany kwas nukleinowy zawiera zbyt wiele zanieczyszczeń, użytkownik rozważy częstsze mycie, aby uzyskać czystszy kwas nukleinowy. Zwiększanie liczby przemyć rzeczywiście sprzyja oczyszczaniu kwasów nukleinowych, ale biorąc pod uwagę, że każde przemywanie powoduje utratę pewnej ilości kwasów nukleinowych i zwiększa możliwość hydrolizy złamania kwasu nukleinowego, więc ogólnie rzecz biorąc, liczba przemyć kontrolowana jest 2 ~ 4 razy.
04 Błędne przekonanie 4: Im więcej pobranych próbek, tym lepszy efekt ekstrakcji
W przypadku, gdy próbka nie jest wystarczająco świeża lub sama zawartość kwasu nukleinowego jest bardzo mała, często efekt ekstrakcji kwasu nukleinowego nie jest dobry, wielu nauczycieli użyje większej liczby próbek, aby zwiększyć ilość ekstrakcji kwasu nukleinowego.
Jednakże samo zwiększenie ilości pobieranej próbki czasami wprowadzi zbyt wiele zanieczyszczeń przekraczających zdolność lizatu do lizy, a także zmniejszy wydajność ekstrakcji, dlatego nie zaleca się osiągania celu, jakim jest zwiększenie ilości ekstrakcji poprzez proste zwiększenie ilości pobieranej próbki.
Jeżeli objętość ekstrakcji jest rzeczywiście zbyt niska ze względu na niewystarczającą objętość próbki, zaleca się przejście przez etap wzbogacania lub zagęszczania w obróbce wstępnej przed rozpoczęciem ekstrakcji. Rozwiązaniem jest również zwiększenie kompletności lizy w celu odsłonięcia większej liczby kwasów nukleinowych.
05 Błędne przekonanie 5: Jeśli jeden rodzaj koralików jest dobry, powinien działać dobrze we wszystkich eksperymentach
Istnieją różne rodzaje kulek magnetycznych, różna wielkość cząstek, różna dyspergowalność, inny czas odpowiedzi magnetycznej, różne podstawowe matryce kapsułkowania, różne grupy funkcyjne modyfikujące warstwę zewnętrzną, różną gęstość kapsułkowania, różne długości ramion grup funkcyjnych, co doprowadzi do szerokiego zakresu charakterystyk kulek magnetycznych.
Dlatego różne kulki magnetyczne są przystosowane do różnych eksperymentów i systemów. Tak jak te same odczynniki do ekstrakcji kwasów nukleinowych nie mają dokładnie tej samej formuły, tak te same kulki magnetyczne stosowane do ekstrakcji kwasów nukleinowych nie mają dokładnie tego samego charakteru.
Niektóre kulki magnetyczne wykazują wyższą skuteczność adsorpcji w ekstrakcji kwasów makronukleinowych, podczas gdy inne są bardziej odpowiednie do ekstrakcji śladowych kwasów nukleinowych. Niektóre kulki magnetyczne nadają się do kwaśnych serii odczynników, a niektóre kulki magnetyczne nadają się do alkalicznych serii odczynników. Niektóre kulki magnetyczne mają dobrą reakcję magnetyczną, ale dużą prędkość osadzania, co jest bardziej odpowiednie dla automatycznego ekstraktora z prętem magnetycznym; niektóre kulki magnetyczne mają powolną prędkość osadzania, ale długi czas reakcji magnetycznej, co jest bardziej odpowiednie dla automatycznego ekstraktora typu pipetowego.
Rzadko kiedy kulki magnetyczne nadają się do wszystkich eksperymentów, poza zestawem stałym, w większości przypadków kulki magnetyczne i systemy odczynników wymagają określonej ilości czasu na regulację.
06 Błędne przekonanie 6: Porównanie z pewnym zestawem nie jest dobre, to znaczy kulki magnetyczne nie są dobre.
Wielu klientów w procesie przesiewania kulek magnetycznych w już dojrzałym układzie odczynników, po prostu stosuje równą ilość zamienników kulek magnetycznych, aby porównać działanie kulek magnetycznych.
Można z tego łatwo wyciągnąć wniosek, że dana kulka magnetyczna nie jest skuteczna, ale w rzeczywistości ze względu na różne kulki magnetyczne odpowiednie dla różnych systemów i różne dawkowanie często należy je dostosować, aby uzyskać lepsze wyniki ekstrakcji.
