01 Equívoco 1: Quanto mais contas magnéticas, melhor o efeito de extração.
Muitos professores tendem a aumentar a quantidade de contas magnéticas quando o efeito de extração não é bom, pensando que mais contas magnéticas poderão absorver mais ácidos nucleicos. No entanto, deve -se dizer que essa idéia não é desejável.
The main feature of magnetic beads is that they can be both dispersed in liquid and separated from the liquid phase in a solid manner under the action of an applied magnetic field, any reagent system, the ratio of magnetic beads and liquid should be a certain threshold , over a certain ratio, too many magnetic beads will not be able to evenly dispersed in the liquid because of the loss of its dispersion properties, but also make the washing process can not be sufficient to increase A eficiência das esferas de ácido nucleico e o contato líquido.
E as contas magnéticas excessivas também adsorverão mais impurezas , o que tem uma grande influência no efeito da remoção de impurezas. Há momentos em que muitas contas magnéticas adsorverão protease, lisozima e outros componentes funcionais que desempenham um papel importante no sistema líquido, levando à ineficiência de todo o kit. Há muitas vezes em que o efeito de extração é ruim, reduz a quantidade de contas magnéticas utilizadas, mas é a maneira ideal de melhorar o efeito de extração.
Geralmente, a dosagem de contas de referência dada pelo kit de método de contas magnéticas é um pouco excessiva ; portanto, não há muitos casos em que a dosagem de contas precisa ser aumentada para melhorar a eficiência da adsorção. No entanto, se estiver determinado que o efeito de extração é ruim devido à dosagem insuficiente de contas, é possível melhorar o efeito de extração aumentando a dosagem de esferas dentro de um determinado intervalo.
02 Equívoco 2: Quanto mais reagentes usados, melhor o efeito de extração.
O efeito de lise não é bom? Adicione mais solução de lise. O efeito de lavagem não é bom? Adicione mais solução de lavagem. Este é o pensamento habitual de muitos clientes no uso de kits de reagentes.
No entanto, para o método de esferas magnéticas, todo aumento no volume do líquido reduz a chance de colisão das contas magnéticas e a redução da chance de colisão das contas magnéticas levará a uma diminuição significativa na taxa de adsorção. So very often, although the increase in lysis solution and washing solution can indeed play a role in enhancing the role of lysis and washing, but the core of the magnetic bead method of extraction is the efficiency of the magnetic beads adsorption of nucleic acids, can not guarantee the efficiency of the magnetic beads collision efficiency can not guarantee the efficiency of nucleic acid extraction, so the simple increase in the use of reagents to improve the extraction effect is not necessariamente completamente eficaz.
03 Equívoco 3: Quanto mais vezes você lava, melhor o efeito de extração.
Quando o ácido nucleico extraído tem muitas impurezas, o usuário considerará lavar mais vezes para obter mais ácido nucleico puro. Aumentar o número de lavagens é de fato propício à purificação de ácidos nucleicos, mas levando em consideração que cada lavagem perderá uma certa quantidade de ácidos nucleicos e aumentará a possibilidade de hidrólise da fratura do ácido nucleico; portanto, em geral, o número de lavagens é controlado nas 2 ~ 4 vezes.
04 Equívoco 4: Quanto mais amostras coletadas, melhor o efeito de extração
No caso da amostra, não é fresco o suficiente ou o próprio teor de ácido nucleico é muito pequeno, geralmente o efeito de extração do ácido nucleico não é bom, muitos professores usarão mais amostras para aumentar a quantidade de extração de ácido nucleico.
No entanto, simplesmente aumentar a quantidade de amostra capturada às vezes introduz muitas impurezas além da capacidade do lisado de Lyse e também reduzirá a eficiência da extração, portanto, não é recomendável atingir o objetivo de aumentar o valor da extração, simplesmente aumentando a quantidade de amostra obtida.
Se o volume de extração for realmente muito baixo devido ao volume insuficiente da amostra, é recomendável passar por uma etapa de enriquecimento ou concentração no pré-tratamento antes de iniciar a extração. Ou aumentar a integridade da lise para expor mais ácidos nucleicos também é uma solução.
05 Equívoco 5: Se um tipo de cordão for bom, deve funcionar bem em todas as experiências
Existem vários tipos de contas magnéticas, tamanho de partícula diferente, dispersibilidade diferente, tempo de resposta magnética diferente, matriz de base de encapsulamento diferentes, diferentes grupos funcionais de modificação da camada externa, densidade de encapsulamento diferentes, diferentes comprimentos de braço do grupo funcional, que levarão a uma ampla gama de características de esferas magnéticas.
Portanto, diferentes contas magnéticas são adaptadas a diferentes experimentos e sistemas. Assim como os mesmos reagentes para a extração de ácido nucleico não são exatamente a mesma fórmula, as mesmas contas magnéticas aplicadas à extração de ácido nucleico não são exatamente as mesmas por natureza.
Algumas esferas magnéticas mostram maior eficiência de adsorção na extração do ácido macronucleico, enquanto outros são mais adequados para a extração de ácido nucleico de rastreamento. Algumas contas magnéticas são adequadas para séries ácidas de sistemas de reagentes, e algumas contas magnéticas são adequadas para a série alcalina de sistemas reagentes. Algumas contas magnéticas têm uma boa resposta magnética, mas a velocidade de sedimentação rápida, que é mais adequada para o extrator automático do tipo haste magnético; Algumas contas magnéticas têm velocidade de sedimentação lenta, mas o longo tempo de resposta magnética, o que é mais adequado para o extrator automático do tipo pipeta.
Raramente, um cordão magnético pode ser adequado para todas as experiências, além do kit fixo com, na maioria dos casos, contas magnéticas e sistemas de reagentes precisam fazer um certo tempo com o ajuste.
06 Equívoco6: A comparação com um certo kit não é bom, ou seja, as contas magnéticas não são boas.
Muitos clientes no processo de triagem de contas magnéticas no sistema de reagentes já maduras, simplesmente igual a substituição de contas magnéticas, usadas para comparar o efeito de contas magnéticas.
Isso concluirá facilmente que um certo cordão magnético não é eficaz, mas, de fato, devido às diferentes contas magnéticas adequadas para diferentes sistemas e a dosagem é diferente, geralmente é necessário ser ajustado para obter melhores resultados de extração.
