01 Equívoco 1: Quanto mais esferas magnéticas, melhor será o efeito de extração.
Muitos professores tendem a aumentar a quantidade de esferas magnéticas quando o efeito de extração não é bom, pensando que mais esferas magnéticas serão capazes de absorver mais ácidos nucléicos. No entanto, deve ser dito que esta ideia não é desejável.
A principal característica dos grânulos magnéticos é que eles podem ser dispersos em líquido e separados da fase líquida de maneira sólida sob a ação de um campo magnético aplicado, qualquer sistema de reagente, a proporção de grânulos magnéticos e líquido deve ser um certo limite , acima de uma certa proporção, muitos grânulos magnéticos não serão capazes de se dispersar uniformemente no líquido devido à perda de suas propriedades de dispersão, mas também fazem com que o processo de lavagem não seja suficiente para aumentar a eficiência dos grânulos de ácido nucleico e o contato com o líquido.
E o excesso de esferas magnéticas também adsorverá mais impurezas , o que tem grande influência no efeito de remoção de impurezas. Há até momentos em que muitas esferas magnéticas adsorvem protease, lisozima e outros componentes funcionais que desempenham um papel importante no sistema líquido, levando à ineficiência de todo o kit. Muitas vezes o efeito de extração é ruim, reduza a quantidade de esferas magnéticas usadas, mas é a maneira ideal de melhorar o efeito de extração.
Normalmente, a dosagem de referência do grânulo fornecida pelo kit do método do grânulo magnético é ligeiramente excessiva , portanto não há muitos casos em que a dosagem do grânulo precise ser aumentada para melhorar a eficiência de adsorção. No entanto, se for determinado que o efeito de extração é fraco devido à dosagem insuficiente de esferas, é possível melhorar o efeito de extração aumentando a dosagem de esferas dentro de uma determinada faixa.
02 Equívoco 2: Quanto mais reagentes forem utilizados, melhor será o efeito de extração.
O efeito de lise não é bom? Adicione mais solução de lise. O efeito de lavagem não é bom? Adicione mais solução de lavagem. Este é o pensamento habitual de muitos clientes na utilização de kits de reagentes.
Porém, para o método do cordão magnético, cada aumento no volume do líquido reduz a chance de colisão dos grânulos magnéticos , e a redução da chance de colisão dos grânulos magnéticos levará a uma diminuição significativa na taxa de adsorção. Muitas vezes, embora o aumento na solução de lise e na solução de lavagem possa de fato desempenhar um papel no aumento do papel da lise e da lavagem, mas o núcleo do método de extração de esferas magnéticas é a eficiência da adsorção de ácidos nucleicos de esferas magnéticas, não pode garantir a eficiência da eficiência de colisão de esferas magnéticas não pode garantir a eficiência da extração de ácido nucleico, portanto, o simples aumento no uso de reagentes para melhorar o efeito de extração não é necessariamente completamente eficaz.
03 Equívoco 3: Quanto mais vezes você lavar, melhor será o efeito de extração.
Quando o ácido nucleico extraído contém muitas impurezas, o usuário considerará lavar mais vezes para obter ácido nucleico mais puro. Aumentar o número de lavagens é de fato favorável à purificação de ácidos nucleicos, mas levando em consideração que cada lavagem perderá uma certa quantidade de ácidos nucleicos e aumentará a possibilidade de hidrólise de fratura de ácido nucleico, então, de modo geral, o número de lavagens é controlado em 2 ~ 4 vezes é apropriado.
04 Equívoco 4: Quanto mais amostras forem colhidas, melhor será o efeito de extração
No caso da amostra não ser suficientemente fresca ou o conteúdo de ácido nucleico em si ser muito pequeno, muitas vezes o efeito de extracção de ácido nucleico não é bom, muitos professores utilizarão mais amostras para aumentar a quantidade de extracção de ácido nucleico.
No entanto, o simples aumento da quantidade de amostra colhida irá, por vezes, introduzir demasiadas impurezas para além da capacidade de lisação do lisado, e também reduzirá a eficiência de extração, pelo que não é recomendado atingir o objetivo de aumentar a quantidade de extração simplesmente aumentando a quantidade de amostra colhida.
Se o volume de extração for realmente muito baixo devido ao volume insuficiente da amostra, recomenda-se passar por uma etapa de enriquecimento ou concentração no pré-tratamento antes de iniciar a extração. Ou aumentar a completude da lise para expor mais ácidos nucleicos também é uma solução.
05 Equívoco 5: Se um tipo de conta for bom, deverá funcionar bem em todos os experimentos
Existem vários tipos de esferas magnéticas, diferentes tamanhos de partículas, diferentes dispersibilidades, diferentes tempos de resposta magnética, diferentes matrizes de base de encapsulamento, diferentes grupos funcionais de modificação da camada externa, diferentes densidades de encapsulamento, diferentes comprimentos de braços de grupos funcionais, o que levará a uma ampla gama de características de esferas magnéticas.
Portanto, diferentes esferas magnéticas são adaptadas a diferentes experimentos e sistemas. Assim como os mesmos reagentes para extração de ácidos nucleicos não têm exatamente a mesma fórmula, as mesmas esferas magnéticas aplicadas à extração de ácidos nucleicos não são exatamente da mesma natureza.
Algumas esferas magnéticas apresentam maior eficiência de adsorção na extração de ácidos macronucleicos, enquanto outras são mais adequadas para extração de vestígios de ácidos nucleicos. Algumas esferas magnéticas são adequadas para séries ácidas de sistemas reagentes e algumas esferas magnéticas são adequadas para séries alcalinas de sistemas reagentes. Algumas esferas magnéticas têm boa resposta magnética, mas rápida velocidade de sedimentação, o que é mais adequado para extrator automático do tipo haste magnética; algumas esferas magnéticas têm velocidade de sedimentação lenta, mas longo tempo de resposta magnética, o que é mais adequado para extrator automático do tipo pipeta.
Raramente uma esfera magnética pode ser adequada para todos os experimentos, além do kit fixo com, na maioria dos casos, esferas magnéticas e sistemas reagentes têm que passar um certo tempo com o ajuste.
06 Equívoco6: A comparação com um determinado kit não é boa, ou seja, as esferas magnéticas não são boas.
Muitos clientes no processo de triagem de esferas magnéticas no sistema de reagentes já maduros, simplesmente equivalem à quantidade de substituição de esferas magnéticas, usadas para comparar o efeito das esferas magnéticas.
Isto concluirá facilmente que uma determinada esfera magnética não é eficaz, mas na verdade, devido às diferentes esferas magnéticas adequadas para diferentes sistemas e à dosagem ser diferente, muitas vezes precisam ser ajustadas para obter melhores resultados de extração.
