01 Mylná představa 1: Čím více magnetických kuliček, tím lepší extrakční efekt.
Mnoho učitelů má tendenci zvyšovat množství magnetických kuliček, když efekt extrakce není dobrý, protože si myslí, že více magnetických kuliček bude schopno absorbovat více nukleových kyselin. Nutno však říci, že tato představa není žádoucí.
Hlavním rysem magnetických kuliček je, že mohou být jak dispergovány v kapalině, tak odděleny od kapalné fáze pevným způsobem působením aplikovaného magnetického pole, jakýkoli reagenční systém, poměr magnetických kuliček a kapaliny by měl být určitý práh , nad určitým poměrem se příliš mnoho magnetických kuliček nebude schopno rovnoměrně rozptýlit v kapalině kvůli ztrátě jejích disperzních vlastností, ale také postačuje ke zvýšení promývacího procesu kapaliny.
A nadměrné magnetické kuličky také absorbují více nečistot , což má velký vliv na efekt odstranění nečistot. Jsou dokonce chvíle, kdy příliš mnoho magnetických kuliček adsorbuje proteázu, lysozym a další funkční složky, které hrají hlavní roli v kapalném systému, což vede k neúčinnosti celé soupravy. Existuje mnoho případů, kdy je účinek extrakce špatný, snižte množství použitých magnetických kuliček, ale je to optimální způsob, jak zlepšit účinek extrakce.
Obvykle je dávka referenčních kuliček daná soupravou pro metodu magnetických kuliček mírně nadměrná , takže není mnoho případů, kdy je třeba zvýšit dávku kuliček, aby se zlepšila účinnost adsorpce. Pokud se však zjistí, že extrakční účinek je špatný kvůli nedostatečnému dávkování kuliček, je možné zlepšit extrakční účinek zvýšením dávky kuliček v určitém rozmezí.
02 Mylná představa 2: Čím více činidel se použije, tím lepší bude extrakční účinek.
Účinek lýzy není dobrý? Přidejte další lyzační roztok. Mycí efekt není dobrý? Přidejte více mycího roztoku. Toto je obvyklé myšlení mnoha zákazníků při používání reagenčních souprav.
U metody magnetických kuliček však každé zvýšení objemu kapaliny snižuje možnost kolize magnetických kuliček a snížení možnosti kolize magnetických kuliček povede k výraznému snížení rychlosti adsorpce. Takže velmi často, ačkoli zvýšení lyzačního roztoku a promývacího roztoku může skutečně hrát roli při posílení role lýzy a promývání, ale jádrem metody extrakce magnetických kuliček je účinnost adsorpce nukleových kyselin magnetickými kuličkami, nemůže zaručit účinnost kolizní účinnosti magnetických kuliček nemůže zaručit účinnost extrakce nukleových kyselin, takže prosté zvýšení využití účinného extrakčního účinku není nutně úplně.
03 Mylná představa 3: Čím vícekrát perete, tím lepší je extrakční efekt.
Když má extrahovaná nukleová kyselina příliš mnoho nečistot, uživatel zváží promývání vícekrát, aby získal více čisté nukleové kyseliny. Zvýšení počtu promytí skutečně vede k čištění nukleových kyselin, ale vezmeme-li v úvahu, že každé promytí ztratí určité množství nukleových kyselin a zvýší se možnost hydrolýzy zlomeniny nukleových kyselin, takže obecně řečeno, počet promytí je řízen 2 až 4krát, je vhodné.
04 Mylná představa 4: Čím více odebraných vzorků, tím lepší extrakční efekt
V případě, že vzorek není dostatečně čerstvý nebo samotný obsah nukleových kyselin je velmi malý, často není efekt extrakce nukleových kyselin dobrý, mnoho učitelů použije více vzorků ke zvýšení množství extrakce nukleových kyselin.
Pouhé zvýšení množství odebraného vzorku však někdy vnese příliš mnoho nečistot, které přesahují schopnost lyzátu lyzovat, a také sníží účinnost extrakce, proto se nedoporučuje dosáhnout cíle zvýšení extrakčního množství pouhým zvýšením množství odebraného vzorku.
Pokud je extrakční objem skutečně příliš nízký kvůli nedostatečnému objemu vzorku, doporučuje se před zahájením extrakce projít krokem obohacování nebo koncentrace v předúpravě. Nebo zvýšení úplnosti lýzy pro vystavení více nukleových kyselin je také řešením.
05 Mylná představa 5: Pokud je jeden typ korálků dobrý, měl by dobře fungovat ve všech experimentech
Existují různé typy magnetických kuliček, různé velikosti částic, různá disperzibilita, různá doba magnetické odezvy, různá základní matrice zapouzdření, různé funkční skupiny modifikace vnější vrstvy, různá hustota zapouzdření, různé délky ramen funkčních skupin, což povede k široké škále charakteristik magnetických perliček.
Proto jsou různé magnetické kuličky přizpůsobeny různým experimentům a systémům. Stejně jako stejná činidla pro extrakci nukleové kyseliny nemají přesně stejný vzorec, stejné magnetické kuličky aplikované na extrakci nukleové kyseliny nejsou ve své podstatě úplně stejné.
Některé magnetické kuličky vykazují vyšší adsorpční účinnost při extrakci makronukleových kyselin, jiné jsou vhodnější pro extrakci stopových množství nukleových kyselin. Některé magnetické kuličky jsou vhodné pro kyselé řady systémů činidel a některé magnetické kuličky jsou vhodné pro alkalické řady systémů činidel. Některé magnetické kuličky mají dobrou magnetickou odezvu, ale vysokou rychlost usazování, což je vhodnější pro automatický extraktor magnetického typu; některé magnetické kuličky mají pomalou rychlost usazování, ale dlouhou dobu magnetické odezvy, což je vhodnější pro automatický extraktor pipetového typu.
Zřídka mohou být magnetické kuličky vhodné pro všechny experimenty, navíc k fixní soupravě s magnetickými kuličkami a reagenčními systémy ve většině případů musí s nastavením pracovat určitý čas.
06 Mylná představa6: Srovnání s určitou sadou není dobré, to znamená, že magnetické kuličky nejsou dobré.
Mnoho zákazníků v procesu screeningu magnetických kuliček v již vyzrálém systému reagencií, jednoduše stejné množství nahrazení magnetických kuliček, používá k porovnání účinku magnetických kuliček.
Snadno tak dojde k závěru, že určitá magnetická kulička není účinná, ale ve skutečnosti je kvůli různým magnetickým kuličkám vhodným pro různé systémy a rozdílnému dávkování často nutné upravit, aby se dosáhlo lepších výsledků extrakce.
