01 Irrtum 1: Je mehr Magnetkügelchen, desto besser die Extraktionswirkung.
Viele Lehrer neigen dazu, die Menge an Magnetkügelchen zu erhöhen, wenn der Extraktionseffekt nicht gut ist, weil sie denken, dass mehr Magnetkügelchen mehr Nukleinsäuren absorbieren können. Es muss jedoch gesagt werden, dass diese Idee nicht wünschenswert ist.
Das Hauptmerkmal von Magnetkügelchen besteht darin, dass sie unter Einwirkung eines angelegten Magnetfelds sowohl in einer Flüssigkeit dispergiert als auch in fester Form von der flüssigen Phase getrennt werden können. Bei jedem Reagenzsystem sollte das Verhältnis von Magnetkügelchen und Flüssigkeit einen bestimmten Schwellenwert haben. Über einem bestimmten Verhältnis können sich zu viele Magnetkügelchen aufgrund des Verlusts ihrer Dispersionseigenschaften nicht gleichmäßig in der Flüssigkeit verteilen, aber auch der Waschprozess reicht möglicherweise nicht aus, um die Effizienz der Nukleinsäurekügelchen und den Flüssigkeitskontakt zu erhöhen.
Und zu viele Magnetkügelchen absorbieren auch mehr Verunreinigungen , was einen großen Einfluss auf die Wirkung der Entfernung von Verunreinigungen hat. Es kann sogar vorkommen, dass zu viele Magnetkügelchen Protease, Lysozym und andere funktionelle Komponenten adsorbieren, die im Flüssigkeitssystem eine wichtige Rolle spielen, was zur Ineffizienz des gesamten Kits führt. In vielen Fällen ist die Extraktionswirkung schlecht. Eine Reduzierung der Menge der verwendeten Magnetkügelchen ist jedoch der optimale Weg, um die Extraktionswirkung zu verbessern.
Normalerweise ist die im Kit für die Magnetkügelchen-Methode angegebene Referenzkügelchen-Dosierung etwas zu hoch , sodass es nicht viele Fälle gibt, in denen die Kügelchen-Dosierung erhöht werden muss, um die Adsorptionseffizienz zu verbessern. Wenn jedoch festgestellt wird, dass die Extraktionswirkung aufgrund einer unzureichenden Perlendosierung schlecht ist, ist es möglich, die Extraktionswirkung zu verbessern, indem die Perlendosierung innerhalb eines bestimmten Bereichs erhöht wird.
02 Irrtum 2: Je mehr Reagenzien verwendet werden, desto besser ist der Extraktionseffekt.
Der Lyseeffekt ist nicht gut? Fügen Sie mehr Lyselösung hinzu. Der Wascheffekt ist nicht gut? Fügen Sie mehr Waschlösung hinzu. Dies ist die gewohnheitsmäßige Denkweise vieler Kunden bei der Verwendung von Reagenzienkits.
Bei der Magnetkügelchen-Methode verringert jedoch jede Vergrößerung des Flüssigkeitsvolumens die Wahrscheinlichkeit einer Kollision der Magnetkügelchen , und die Verringerung der Wahrscheinlichkeit einer Kollision der Magnetkügelchen führt zu einer erheblichen Verringerung der Adsorptionsrate. Obwohl die Erhöhung der Lyselösung und der Waschlösung tatsächlich eine Rolle bei der Verbesserung der Rolle der Lyse und des Waschens spielen kann, liegt der Kern der Extraktionsmethode mit Magnetkügelchen in der Effizienz der Adsorption von Nukleinsäuren durch die Magnetkügelchen. Die Effizienz der Kollisionseffizienz der Magnetkügelchen kann nicht die Effizienz der Nukleinsäureextraktion garantieren, sodass die einfache Erhöhung des Einsatzes von Reagenzien zur Verbesserung des Extraktionseffekts nicht unbedingt vollständig wirksam ist.
03 Irrtum 3: Je öfter man wäscht, desto besser ist die Extraktionswirkung.
Wenn die extrahierte Nukleinsäure zu viele Verunreinigungen aufweist, wird der Benutzer erwägen, öfter zu waschen, um reinere Nukleinsäure zu erhalten. Eine Erhöhung der Anzahl der Wäschen ist zwar förderlich für die Reinigung von Nukleinsäuren, aber wenn man bedenkt, dass bei jeder Wäsche eine bestimmte Menge an Nukleinsäuren verloren geht und die Möglichkeit einer Hydrolyse des Nukleinsäurebruchs zunimmt, ist es im Allgemeinen angemessen, die Anzahl der Wäschen auf 2 bis 4 Mal zu kontrollieren.
04 Irrtum 4: Je mehr Proben entnommen werden, desto besser ist der Extraktionseffekt
Wenn die Probe nicht frisch genug ist oder der Nukleinsäuregehalt selbst sehr gering ist, ist der Effekt der Nukleinsäureextraktion oft nicht gut. Viele Lehrer verwenden mehr Proben, um die Menge der Nukleinsäureextraktion zu erhöhen.
Allerdings führt eine einfache Erhöhung der entnommenen Probenmenge manchmal zu vielen Verunreinigungen, die über die Fähigkeit des Lysats zur Lyse hinausgehen, und verringert auch die Extraktionseffizienz. Daher wird nicht empfohlen, das Ziel der Erhöhung der Extraktionsmenge einfach durch eine Erhöhung der entnommenen Probenmenge zu erreichen.
Sollte das Extraktionsvolumen aufgrund unzureichender Probenmenge tatsächlich zu gering sein, empfiehlt es sich, vor Beginn der Extraktion einen Anreicherungs- oder Konzentrationsschritt in der Vorbehandlung durchzuführen. Oder die Vollständigkeit der Lyse zu erhöhen, um mehr Nukleinsäuren freizulegen, ist ebenfalls eine Lösung.
05 Missverständnis 5: Wenn ein Perlentyp gut ist, sollte er in allen Experimenten gut funktionieren
Es gibt verschiedene Arten von Magnetkügelchen, unterschiedliche Partikelgrößen, unterschiedliche Dispergierbarkeit, unterschiedliche magnetische Reaktionszeiten, unterschiedliche Verkapselungsgrundmatrix, unterschiedliche Funktionsgruppen zur Modifikation der Außenschicht, unterschiedliche Verkapselungsdichten und unterschiedliche Armlängen der Funktionsgruppen, was zu einem breiten Spektrum an Eigenschaften magnetischer Kügelchen führt.
Daher werden unterschiedliche Magnetkügelchen an unterschiedliche Experimente und Systeme angepasst. So wie die gleichen Reagenzien für die Nukleinsäureextraktion nicht genau die gleiche Formel haben, sind auch die gleichen Magnetkügelchen, die für die Nukleinsäureextraktion verwendet werden, von Natur aus nicht genau gleich.
Einige Magnetkügelchen zeigen eine höhere Adsorptionseffizienz bei der Extraktion von Makronukleinsäuren, während andere besser für die Extraktion von Spurennukleinsäuren geeignet sind. Einige Magnetkügelchen eignen sich für saure Reagenziensysteme und einige Magnetkügelchen eignen sich für alkalische Reagenziensysteme. Einige Magnetperlen haben eine gute magnetische Reaktion, aber eine schnelle Absetzgeschwindigkeit, was besser für automatische Extraktoren vom Magnetstabtyp geeignet ist. Einige Magnetkügelchen haben eine langsame Absetzgeschwindigkeit, aber eine lange magnetische Reaktionszeit, was für automatische Extraktoren vom Pipettentyp besser geeignet ist.
Selten kann ein Magnetbead für alle Experimente geeignet sein, zusätzlich zum festen Kit mit, in den meisten Fällen müssen Magnetbeads und Reagenziensysteme eine gewisse Zeit mit der Anpassung verbringen.
06 Missverständnis6: Der Vergleich mit einem bestimmten Kit ist nicht gut, das heißt, die Magnetperlen sind nicht gut.
Viele Kunden verwenden beim Screening von Magnetkügelchen im bereits ausgereiften Reagenzsystem einfach die gleiche Menge an Magnetkügelchen, um die Wirkung von Magnetkügelchen zu vergleichen.
Daraus lässt sich leicht schließen, dass ein bestimmtes Magnetkügelchen nicht wirksam ist. Da die Magnetkügelchen jedoch für verschiedene Systeme geeignet sind und die Dosierung unterschiedlich ist, müssen sie oft angepasst werden, um bessere Extraktionsergebnisse zu erzielen.
