01 Misforståelse 1: Jo flere magnetiske perler, jo bedre ekstraksjonseffekt.
Mange lærere har en tendens til å øke mengden magnetiske perler når ekstraksjonseffekten ikke er god, og tenker at flere magnetiske perler vil kunne absorbere flere nukleinsyrer. Det må imidlertid sies at denne ideen ikke er ønskelig.
Hovedtrekket til magnetiske perler er at de både kan spres i væske og separeres fra væskefasen på en fast måte under påvirkning av et påført magnetfelt, et hvilket som helst reagenssystem, forholdet mellom magnetiske perler og væske bør være en viss terskel , over et visst forhold vil for mange magnetiske perler ikke være i stand til å spres jevnt i væsken på grunn av tapet av spredningsprosessen, men kan ikke øke effektiviteten til å øke effektiviteten. nukleinsyrekulene og væskekontakten.
Og overdreven magnetiske perler vil også adsorbere flere urenheter , noe som har stor innflytelse på effekten av å fjerne urenheter. Det er til og med tider når for mange magnetiske perler vil adsorbere protease, lysozym og andre funksjonelle komponenter som spiller en stor rolle i væskesystemet, noe som fører til ineffektiviteten til hele settet. Det er mange ganger når ekstraksjonseffekten er dårlig, redusere mengden magnetiske perler som brukes, men er den optimale måten å forbedre ekstraksjonseffekten på.
Vanligvis er referansekuledoseringen gitt av det magnetiske perlemetodesettet litt overdreven , så det er ikke mange tilfeller der perledosen må økes for å forbedre adsorpsjonseffektiviteten. Imidlertid, hvis det fastslås at ekstraksjonseffekten er dårlig på grunn av utilstrekkelig perledosering, er det mulig å forbedre ekstraksjonseffekten ved å øke perledosen innenfor et visst område.
02 Misforståelse 2: Jo flere reagenser som brukes, jo bedre ekstraksjonseffekt.
Lyseeffekten er ikke god? Tilsett mer lyseringsløsning. Er ikke vaskeeffekten god? Tilsett mer vaskeløsning. Dette er den vanemessige tenkningen til mange kunder ved bruk av reagenssett.
For den magnetiske perlemetoden reduserer imidlertid hver økning i væskevolumet sjansen for kollisjon av de magnetiske kulene , og reduksjonen av sjansen for kollisjon av de magnetiske perlene vil føre til en betydelig reduksjon i adsorpsjonshastigheten. Så veldig ofte, selv om økningen i lyseringsløsning og vaskeløsning faktisk kan spille en rolle i å styrke rollen til lysis og vasking, men kjernen i den magnetiske perlemetoden for ekstraksjon er effektiviteten til de magnetiske perlenes adsorpsjon av nukleinsyrer, kan ikke garantere effektiviteten til de magnetiske perlene kollisjonseffektiviteten kan ikke garantere er effektiviteten til bruk av reagens ekstraksjon for å forbedre effektiviteten av ekstraksjon av nukleinsyren, slik at reagens ekstraksjon øker effektiviteten. ikke nødvendigvis helt effektiv.
03 Misforståelse 3: Jo flere ganger du vasker, jo bedre ekstraksjonseffekt.
Når den ekstraherte nukleinsyren har for mange urenheter, vil brukeren vurdere å vaske flere ganger for å få mer ren nukleinsyre. Å øke antall vask er faktisk gunstig for rensing av nukleinsyrer, men å ta i betraktning at hver vask vil miste en viss mengde nukleinsyrer, og øke muligheten for hydrolyse av nukleinsyrefraktur, så generelt sett er antall vask kontrollert i de 2 ~ 4 ganger passende.
04 Misforståelse 4: Jo flere prøver som tas, jo bedre ekstraksjonseffekt
I tilfelle prøven ikke er frisk nok eller selve nukleinsyreinnholdet er veldig lite, ofte er nukleinsyreekstraksjonseffekten ikke god, mange lærere vil bruke flere prøver for å øke mengden nukleinsyreekstraksjon.
Men å bare øke mengden prøve som tas vil noen ganger introdusere for mange urenheter utover lysatets evne til å lysere, og vil også redusere ekstraksjonseffektiviteten, så det anbefales ikke å oppnå målet om å øke ekstraksjonsmengden ved å bare øke mengden prøve som tas.
Hvis ekstraksjonsvolumet faktisk er for lavt på grunn av utilstrekkelig prøvevolum, anbefales det å gå gjennom et anriknings- eller konsentrasjonstrinn i forbehandlingen før ekstraksjonen startes. Eller å øke fullstendigheten av lyseringen for å eksponere flere nukleinsyrer er også en løsning.
05 Misforståelse 5: Hvis en type perle er god, bør den fungere bra i alle forsøk
Det er forskjellige typer magnetiske perler, forskjellig partikkelstørrelse, forskjellig dispergerbarhet, forskjellig magnetisk responstid, forskjellig innkapslingsgrunnmatrise, forskjellige ytre lag modifikasjonsfunksjonelle grupper, forskjellig innkapslingstetthet, forskjellige funksjonelle gruppearmlengder, noe som vil føre til et bredt spekter av magnetiske perleegenskaper.
Derfor er forskjellige magnetiske perler tilpasset forskjellige eksperimenter og systemer. Akkurat som de samme reagensene for nukleinsyreekstraksjon ikke er nøyaktig den samme formelen, er de samme magnetiske kulene som brukes på nukleinsyreekstraksjon ikke nøyaktig de samme i naturen.
Noen magnetiske kuler viser høyere adsorpsjonseffektivitet i makronukleinsyreekstraksjon, mens andre er mer egnet for spornukleinsyreekstraksjon. Noen magnetiske perler er egnet for sure serier av reagenssystemer, og noen magnetiske perler er egnet for alkaliske serier av reagenssystemer. Noen magnetiske perler har god magnetisk respons, men rask utfellingshastighet, noe som er mer egnet for automatisk avtrekker av magnetisk stavtype; noen magnetiske kuler har lav sedimenteringshastighet, men lang magnetisk responstid, noe som er mer egnet for automatisk ekstraksjon av pipettetypen.
Sjelden en magnetisk perler kan være egnet for alle eksperimenter, i tillegg til det faste settet med, i de fleste tilfeller, magnetiske perler og reagenssystemer må gjøre en viss tid med justeringen.
06 Misforståelse6: Sammenligning med et bestemt sett er ikke bra, det vil si at de magnetiske perlene ikke er gode.
Mange kunder i ferd med å screene magnetiske perler i det allerede modne reagenssystemet, bare lik mengde erstatning av magnetiske perler, brukes til å sammenligne effekten av magnetiske perler.
Dette vil lett konkludere med at en viss magnetisk perle ikke er effektiv, men faktisk, på grunn av de forskjellige magnetiske perlene som er egnet for forskjellige systemer og doseringen er forskjellig, må de ofte justeres for å oppnå bedre ekstraksjonsresultater.
