01 Concepto erróneo 1: cuanto más cuentas magnéticas, mejor será el efecto de extracción.
Muchos maestros tienden a aumentar la cantidad de cuentas magnéticas cuando el efecto de extracción no es bueno, pensando que más perlas magnéticas podrán absorber más ácidos nucleicos. Sin embargo, debe decirse que esta idea no es deseable.
The main feature of magnetic beads is that they can be both dispersed in liquid and separated from the liquid phase in a solid manner under the action of an applied magnetic field, any reagent system, the ratio of magnetic beads and liquid should be a certain threshold , over a certain ratio, too many magnetic beads will not be able to evenly dispersed in the liquid because of the loss of its dispersion properties, but also make the washing process can not be sufficient to increase the Eficiencia de las perlas de ácido nucleico y el contacto líquido.
Y las cuentas magnéticas excesivas también adsorben más impurezas , lo que tiene una gran influencia en el efecto de eliminar las impurezas. Incluso hay momentos en que demasiadas perlas magnéticas adsorben proteasa, lisozima y otros componentes funcionales que juegan un papel importante en el sistema líquido, lo que lleva a la ineficiencia de todo el kit. Hay muchas veces en que el efecto de extracción es pobre, reduce la cantidad de cuentas magnéticas utilizadas, pero es la forma óptima de mejorar el efecto de extracción.
Por lo general, la dosis de cuentas de referencia dada por el kit de métodos de cuentas magnéticas es ligeramente excesiva , por lo que no hay muchos casos en los que la dosis de perlas debe aumentarse para mejorar la eficiencia de la adsorción. Sin embargo, si se determina que el efecto de extracción es deficiente debido a la dosis insuficiente de cuentas, es posible mejorar el efecto de extracción al aumentar la dosis de las perlas dentro de un cierto rango.
02 Concepto erróneo 2: Cuantos más reactivos se usen, mejor será el efecto de extracción.
¿El efecto de lisis no es bueno? Agregue más solución de lisis. ¿El efecto de lavado no es bueno? Agregue más solución de lavado. Este es el pensamiento habitual de muchos clientes en el uso de kits de reactivos.
Sin embargo, para el método de cuentas magnéticas, cada aumento en el volumen del líquido reduce la posibilidad de colisión de las perlas magnéticas , y la reducción de la posibilidad de colisión de las perlas magnéticas conducirá a una disminución significativa en la tasa de adsorción. Muy a menudo, aunque el aumento en la solución de lisis y la solución de lavado puede desempeñar un papel en la mejora del papel de la lisis y el lavado, pero el núcleo del método de extracción magnética de la extracción es que la eficiencia de las perlas magnéticas es la adsorción de los ácidos nucleicos, por lo que no puede garantizar la eficiencia de la eficiencia de colisión magnética, la eficiencia de la colisión no puede garantizar la eficiencia de los ácidos nucleicos, por lo que el aumento simple de la extracción de reales no puede garantizar el uso de la extracción de rea. necesariamente completamente efectivo.
03 Concepto erróneo 3: Cuantas más veces se lave, mejor será el efecto de extracción.
Cuando el ácido nucleico extraído tiene demasiadas impurezas, el usuario considerará lavar más veces para obtener más ácido nucleico puro. El aumento del número de lavados es propicio para la purificación de los ácidos nucleicos, pero tener en cuenta que cada lavado perderá una cierta cantidad de ácidos nucleicos, y aumentará la posibilidad de hidrólisis de fractura de ácido nucleico, por lo que en general, la cantidad de lavados se controla en las 2 ~ 4 veces es apropiada.
04 Concepto erróneo 4: Cuantas más muestras tomen, mejor será el efecto de extracción
En el caso de la muestra, no es lo suficientemente fresco o el contenido de ácido nucleico en sí es muy pequeño, a menudo el efecto de extracción de ácido nucleico no es bueno, muchos maestros usarán más muestras para aumentar la cantidad de extracción de ácido nucleico.
Sin embargo, simplemente aumentar la cantidad de muestra tomada a veces introducirá demasiadas impurezas más allá de la capacidad del lisado para lisarse, y también reducirá la eficiencia de extracción, por lo que no se recomienda alcanzar el objetivo de aumentar la cantidad de extracción simplemente aumentando la cantidad de muestra tomada.
Si el volumen de extracción es demasiado bajo debido al volumen de muestra insuficiente, se recomienda pasar por un paso de enriquecimiento o concentración en el pretratamiento antes de comenzar la extracción. O aumentar la integridad de la lisis para exponer más ácidos nucleicos también es una solución.
05 Concepto erróneo 5: Si un tipo de cuenta es bueno, debería funcionar bien en todos los experimentos
Existen varios tipos de perlas magnéticas, diferentes tamaños de partícula, diferente dispersión, diferente tiempo de respuesta magnética, diferente matriz base de encapsulación, diferentes grupos funcionales de modificación de la capa externa, diferente densidad de encapsulación, diferentes longitudes de brazo de grupo funcional, lo que conducirá a una amplia gama de características de cuentas magnéticas.
Por lo tanto, diferentes cuentas magnéticas se adaptan a diferentes experimentos y sistemas. Al igual que los mismos reactivos para la extracción de ácido nucleico no son exactamente la misma fórmula, las mismas cuentas magnéticas aplicadas a la extracción de ácido nucleico no son exactamente lo mismo en la naturaleza.
Algunas perlas magnéticas muestran una mayor eficiencia de adsorción en la extracción de ácido macronucleico, mientras que otros son más adecuados para la extracción de ácido nucleico traza. Algunas perlas magnéticas son adecuadas para series ácidas de sistemas de reactivos, y algunas perlas magnéticas son adecuadas para la serie alcalina de sistemas de reactivos. Algunas cuentas magnéticas tienen una buena respuesta magnética pero una velocidad de asentamiento rápida, que es más adecuada para el extractor automático tipo varilla magnética; Algunas cuentas magnéticas tienen una velocidad de asentamiento lenta pero un largo tiempo de respuesta magnética, que es más adecuada para el extractor automático tipo pipeta.
Raramente, un cuentas magnéticas puede ser adecuada para todos los experimentos, además del kit fijo con, en la mayoría de los casos, las perlas magnéticas y los sistemas de reactivos tienen que hacer una cierta cantidad de tiempo con el ajuste.
06 Concección errónea6: La comparación con cierto kit no es buena, es decir, las cuentas magnéticas no son buenas.
Muchos clientes en el proceso de detección de perlas magnéticas en el sistema de reactivos ya maduros, simplemente la misma cantidad de reemplazo de perlas magnéticas, utilizadas para comparar el efecto de las perlas magnéticas.
Esto concluirá fácilmente que un cierto cordón magnético no es efectivo, pero de hecho, debido a las diferentes cuentas magnéticas adecuadas para diferentes sistemas y la dosis es diferente, a menudo debe ajustarse para obtener mejores resultados de extracción.
