01 Concepto erróneo 1: cuantas más cuentas magnéticas, mejor será el efecto de extracción.
Muchos profesores tienden a aumentar la cantidad de perlas magnéticas cuando el efecto de extracción no es bueno, pensando que más perlas magnéticas podrán absorber más ácidos nucleicos. Sin embargo, hay que decir que esta idea no es deseable.
La característica principal de las perlas magnéticas es que pueden dispersarse en líquido y separarse de la fase líquida de manera sólida bajo la acción de un campo magnético aplicado. En cualquier sistema reactivo, la proporción de perlas magnéticas y líquido debe ser un cierto umbral ; sobre una cierta proporción, demasiadas perlas magnéticas no podrán dispersarse uniformemente en el líquido debido a la pérdida de sus propiedades de dispersión, pero también hacen que el proceso de lavado no sea suficiente para aumentar la eficiencia de las perlas de ácido nucleico y el contacto con el líquido.
Y el exceso de perlas magnéticas también absorberá más impurezas , lo que tiene una gran influencia en el efecto de eliminación de impurezas. Incluso hay ocasiones en las que demasiadas perlas magnéticas adsorberán proteasas, lisozimas y otros componentes funcionales que desempeñan un papel importante en el sistema líquido, lo que provocará la ineficiencia de todo el kit. Hay muchas ocasiones en las que el efecto de extracción es deficiente, reduzca la cantidad de perlas magnéticas utilizadas, pero es la forma óptima de mejorar el efecto de extracción.
Por lo general, la dosis de referencia de perlas proporcionada por el kit del método de perlas magnéticas es ligeramente excesiva , por lo que no hay muchos casos en los que sea necesario aumentar la dosis de perlas para mejorar la eficiencia de adsorción. Sin embargo, si se determina que el efecto de extracción es deficiente debido a una dosis insuficiente de perlas, es posible mejorar el efecto de extracción aumentando la dosis de perlas dentro de un cierto rango.
02 Concepto erróneo 2: cuantos más reactivos se utilicen, mejor será el efecto de extracción.
¿El efecto de lisis no es bueno? Agregue más solución de lisis. ¿El efecto de lavado no es bueno? Agregue más solución de lavado. Este es el pensamiento habitual de muchos clientes en el uso de kits de reactivos.
Sin embargo, para el método de las perlas magnéticas, cada aumento en el volumen del líquido reduce la posibilidad de colisión de las perlas magnéticas , y la reducción de la posibilidad de colisión de las perlas magnéticas conducirá a una disminución significativa en la tasa de adsorción. Muy a menudo, aunque el aumento de la solución de lisis y la solución de lavado puede desempeñar un papel en la mejora de la función de lisis y lavado, pero el núcleo del método de extracción de perlas magnéticas es la eficiencia de la adsorción de ácidos nucleicos de las perlas magnéticas, no puede garantizar la eficiencia de la colisión de las perlas magnéticas no puede garantizar la eficiencia de la extracción de ácidos nucleicos, por lo que el simple aumento en el uso de reactivos para mejorar el efecto de extracción no es necesariamente completamente efectivo.
03 Concepto erróneo 3: cuantas más veces te laves, mejor será el efecto de extracción.
Cuando el ácido nucleico extraído tiene demasiadas impurezas, el usuario considerará lavar más veces para obtener ácido nucleico más puro. De hecho, aumentar el número de lavados favorece la purificación de los ácidos nucleicos, pero teniendo en cuenta que cada lavado perderá una cierta cantidad de ácidos nucleicos y aumentará la posibilidad de hidrólisis o fractura del ácido nucleico, por lo que, en términos generales, es apropiado controlar el número de lavados entre 2 y 4 veces.
04 Concepto erróneo 4: cuantas más muestras se tomen, mejor será el efecto de extracción
En el caso de que la muestra no sea lo suficientemente fresca o el contenido de ácido nucleico en sí sea muy pequeño, a menudo el efecto de extracción de ácido nucleico no es bueno, muchos profesores usarán más muestras para aumentar la cantidad de extracción de ácido nucleico.
Sin embargo, simplemente aumentar la cantidad de muestra tomada a veces introducirá demasiadas impurezas más allá de la capacidad del lisado para lisarse y también reducirá la eficiencia de la extracción, por lo que no se recomienda lograr el objetivo de aumentar la cantidad de extracción simplemente aumentando la cantidad de muestra tomada.
Si el volumen de extracción es realmente demasiado bajo debido a un volumen de muestra insuficiente, se recomienda realizar un paso de enriquecimiento o concentración en el pretratamiento antes de comenzar la extracción. O aumentar la integridad de la lisis para exponer más ácidos nucleicos también es una solución.
05 Concepto erróneo 5: si un tipo de cuenta es buena, debería funcionar bien en todos los experimentos
Hay varios tipos de perlas magnéticas, diferentes tamaños de partículas, diferente dispersabilidad, diferentes tiempos de respuesta magnética, diferentes matrices base de encapsulación, diferentes grupos funcionales de modificación de la capa externa, diferentes densidades de encapsulación, diferentes longitudes de brazos de grupos funcionales, lo que conducirá a una amplia gama de características de las perlas magnéticas.
Por tanto, se adaptan diferentes perlas magnéticas a diferentes experimentos y sistemas. Así como los mismos reactivos para la extracción de ácidos nucleicos no tienen exactamente la misma fórmula, las mismas perlas magnéticas aplicadas a la extracción de ácidos nucleicos no son exactamente iguales por naturaleza.
Algunas perlas magnéticas muestran una mayor eficiencia de adsorción en la extracción de ácidos macronucleicos, mientras que otras son más adecuadas para la extracción de trazas de ácidos nucleicos. Algunas perlas magnéticas son adecuadas para series ácidas de sistemas de reactivos y algunas perlas magnéticas son adecuadas para series alcalinas de sistemas de reactivos. Algunas perlas magnéticas tienen una buena respuesta magnética pero una velocidad de asentamiento rápida, lo que es más adecuado para extractores automáticos de varilla magnética; Algunas perlas magnéticas tienen una velocidad de sedimentación lenta pero un tiempo de respuesta magnético prolongado, lo que es más adecuado para extractores automáticos tipo pipeta.
En raras ocasiones, las perlas magnéticas pueden ser adecuadas para todos los experimentos; además del kit fijo, en la mayoría de los casos las perlas magnéticas y los sistemas de reactivos requieren un cierto tiempo de ajuste.
06 Concepto erróneo6: La comparación con un determinado kit no es buena, es decir, las cuentas magnéticas no son buenas.
Muchos clientes en el proceso de detección de perlas magnéticas en el sistema de reactivos ya maduro, simplemente reemplazan una cantidad igual de perlas magnéticas, para comparar el efecto de las perlas magnéticas.
Esto fácilmente concluirá que una determinada perla magnética no es efectiva, pero de hecho, debido a las diferentes perlas magnéticas adecuadas para diferentes sistemas y la dosis es diferente, a menudo es necesario ajustarla para obtener mejores resultados de extracción.
