01 Mylná predstava 1: Čím viac magnetických guľôčok, tým lepší extrakčný efekt.
Mnohí učitelia majú tendenciu zvyšovať množstvo magnetických guľôčok, keď extrakčný efekt nie je dobrý, mysliac si, že viac magnetických guľôčok bude schopných absorbovať viac nukleových kyselín. Treba však povedať, že táto predstava nie je žiaduca.
Hlavnou črtou magnetických guľôčok je, že môžu byť dispergované v kvapaline a oddelené od kvapalnej fázy pevným spôsobom pôsobením aplikovaného magnetického poľa, akéhokoľvek reagenčného systému, pomer magnetických guľôčok a kvapaliny by mal byť určitý prah , pri určitom pomere sa príliš veľa magnetických guľôčok nebude môcť rovnomerne rozptýliť v kvapaline z dôvodu straty jej disperzných vlastností, ale tiež postačuje na zvýšenie účinnosti premývania kvapaliny a nedostatočný premývací proces.
A prebytočné magnetické guľôčky tiež absorbujú viac nečistôt , čo má veľký vplyv na efekt odstránenia nečistôt. Sú dokonca prípady, keď príliš veľa magnetických guľôčok bude adsorbovať proteázu, lyzozým a ďalšie funkčné zložky, ktoré hrajú hlavnú úlohu v kvapalnom systéme, čo vedie k neefektívnosti celej súpravy. Mnohokrát je extrakčný efekt slabý, znížte množstvo použitých magnetických guľôčok, ale je to optimálny spôsob, ako zlepšiť extrakčný efekt.
Zvyčajne je dávka referenčných guľôčok daná súpravou metódy magnetických guľôčok mierne prehnaná , takže nie je veľa prípadov, kedy je potrebné zvýšiť dávku guľôčok, aby sa zlepšila účinnosť adsorpcie. Ak sa však zistí, že extrakčný účinok je slabý v dôsledku nedostatočného dávkovania guľôčok, je možné zlepšiť extrakčný účinok zvýšením dávky guľôčok v určitom rozsahu.
02 Mylná predstava 2: Čím viac činidiel sa použije, tým lepší je extrakčný efekt.
Účinok lýzy nie je dobrý? Pridajte ďalší lyzačný roztok. Umývací efekt nie je dobrý? Pridajte viac umývacieho roztoku. Toto je zvyčajné myslenie mnohých zákazníkov pri používaní reagenčných súprav.
Pri metóde magnetických guľôčok však každé zvýšenie objemu kvapaliny znižuje možnosť kolízie magnetických guľôčok a zníženie pravdepodobnosti kolízie magnetických guľôčok povedie k výraznému zníženiu rýchlosti adsorpcie. Takže veľmi často, aj keď zvýšenie lyzačného roztoku a premývacieho roztoku môže skutočne zohrávať úlohu pri zvyšovaní úlohy lýzy a premývania, ale jadrom metódy extrakcie magnetických guľôčok je účinnosť adsorpcie nukleových kyselín magnetickými guľôčkami, nemôže zaručiť účinnosť kolízie magnetických guľôčok, nemôže zaručiť účinnosť extrakcie nukleových kyselín, takže jednoduché zvýšenie využitia extrakčného účinku nie je nevyhnutne úplne účinné.
03 Mylná predstava 3: Čím viackrát umývate, tým lepší je extrakčný efekt.
Keď má extrahovaná nukleová kyselina príliš veľa nečistôt, používateľ zváži viackrát premytie, aby získal viac čistej nukleovej kyseliny. Zvýšenie počtu premytí skutočne prispieva k čisteniu nukleových kyselín, ale ak vezmeme do úvahy, že každé premytie stratí určité množstvo nukleových kyselín a zvýši možnosť hydrolýzy lomu nukleovej kyseliny, takže vo všeobecnosti je počet premytí riadený 2 až 4 krát, je vhodné.
04 Mylná predstava 4: Čím viac vzoriek sa odoberie, tým lepší je extrakčný efekt
V prípade, že vzorka nie je dostatočne čerstvá alebo samotný obsah nukleovej kyseliny je veľmi malý, často nie je efekt extrakcie nukleovej kyseliny dobrý, veľa učiteľov použije viac vzoriek na zvýšenie množstva extrakcie nukleových kyselín.
Jednoduché zvýšenie množstva odobratej vzorky však niekedy zavedie príliš veľa nečistôt, ktoré presahujú schopnosť lyzátu lyzovať, a tiež zníži účinnosť extrakcie, preto sa neodporúča dosiahnuť cieľ zvýšiť extrakčné množstvo jednoduchým zvýšením množstva odobratej vzorky.
Ak je extrakčný objem skutočne príliš nízky v dôsledku nedostatočného objemu vzorky, odporúča sa pred začatím extrakcie prejsť krokom obohacovania alebo koncentrácie v predbežnej úprave. Riešením je tiež zvýšenie úplnosti lýzy, aby sa obnažilo viac nukleových kyselín.
05 Mylná predstava 5: Ak je jeden typ guľôčky dobrý, mal by dobre fungovať vo všetkých experimentoch
Existujú rôzne typy magnetických guľôčok, rôzna veľkosť častíc, rôzna disperzibilita, rôzny čas magnetickej odozvy, rôzna základná matrica enkapsulácie, rôzne funkčné skupiny modifikácie vonkajšej vrstvy, rôzna hustota enkapsulácie, rôzne dĺžky ramien funkčných skupín, čo povedie k širokému rozsahu charakteristík magnetických guľôčok.
Preto sú rôzne magnetické guľôčky prispôsobené rôznym experimentom a systémom. Rovnako ako rovnaké činidlá na extrakciu nukleových kyselín nemajú presne rovnaký vzorec, rovnaké magnetické guľôčky aplikované na extrakciu nukleových kyselín nie sú vo svojej podstate úplne rovnaké.
Niektoré magnetické guľôčky vykazujú vyššiu adsorpčnú účinnosť pri extrakcii makronukleových kyselín, zatiaľ čo iné sú vhodnejšie na extrakciu stopových nukleových kyselín. Niektoré magnetické guľôčky sú vhodné pre kyslé série systémov činidiel a niektoré magnetické guľôčky sú vhodné pre alkalické série systémov činidiel. Niektoré magnetické guľôčky majú dobrú magnetickú odozvu, ale rýchlu rýchlosť usadzovania, ktorá je vhodnejšia pre automatický extraktor typu magnetickej tyče; niektoré magnetické guľôčky majú pomalú rýchlosť usadzovania, ale dlhú dobu magnetickej odozvy, čo je vhodnejšie pre automatický extraktor pipetového typu.
Zriedkavo môžu byť magnetické guľôčky vhodné pre všetky experimenty, navyše k pevnej súprave s magnetickými guľôčkami a reagenčnými systémami vo väčšine prípadov musia stráviť určitý čas s úpravou.
06 Mylná predstava6: Porovnanie s určitou súpravou nie je dobré, to znamená, že magnetické guľôčky nie sú dobré.
Mnoho zákazníkov v procese skríningu magnetických guľôčok v už zrelom systéme reagencií, jednoducho rovnaké množstvo náhrady magnetických guľôčok, ktoré sa používa na porovnanie účinku magnetických guľôčok.
Z toho sa dá ľahko vyvodiť záver, že určitá magnetická guľôčka nie je účinná, ale v skutočnosti je v dôsledku rôznych magnetických guľôčok vhodných pre rôzne systémy a rozdielne dávkovanie často potrebné upraviť, aby sa dosiahli lepšie výsledky extrakcie.
