01 ग़लतफ़हमी 1: जितने अधिक चुंबकीय मोती होंगे, निष्कर्षण प्रभाव उतना ही बेहतर होगा।
कई शिक्षक निष्कर्षण प्रभाव अच्छा नहीं होने पर चुंबकीय मोतियों की मात्रा बढ़ा देते हैं, यह सोचकर कि अधिक चुंबकीय मोती अधिक न्यूक्लिक एसिड को अवशोषित करने में सक्षम होंगे। हालाँकि, यह कहा जाना चाहिए कि यह विचार वांछनीय नहीं है।
चुंबकीय मोतियों की मुख्य विशेषता यह है कि उन्हें लागू चुंबकीय क्षेत्र, किसी भी अभिकर्मक प्रणाली की कार्रवाई के तहत तरल में फैलाया जा सकता है और ठोस तरीके से तरल चरण से अलग किया जा सकता है, चुंबकीय मोतियों और तरल का अनुपात एक निश्चित सीमा होना चाहिए , एक निश्चित अनुपात से अधिक, बहुत सारे चुंबकीय मोती अपने फैलाव गुणों के नुकसान के कारण तरल में समान रूप से फैलाने में सक्षम नहीं होंगे, लेकिन न्यूक्लिक एसिड मोतियों और तरल संपर्क की दक्षता बढ़ाने के लिए धोने की प्रक्रिया भी पर्याप्त नहीं हो सकती है।
और अत्यधिक चुंबकीय मोती भी अधिक अशुद्धियों को सोख लेंगे , जिसका अशुद्धियों को दूर करने के प्रभाव पर बहुत प्रभाव पड़ता है। ऐसे भी समय होते हैं जब बहुत सारे चुंबकीय मोती प्रोटीज, लाइसोजाइम और अन्य कार्यात्मक घटकों को सोख लेते हैं जो तरल प्रणाली में प्रमुख भूमिका निभाते हैं, जिससे पूरी किट अक्षम हो जाती है। कई बार ऐसा होता है जब निष्कर्षण प्रभाव खराब होता है, तो उपयोग किए जाने वाले चुंबकीय मोतियों की मात्रा कम कर दें, लेकिन निष्कर्षण प्रभाव को सुधारने का यह सबसे अच्छा तरीका है।
आमतौर पर, चुंबकीय मनका विधि किट द्वारा दी गई संदर्भ मनका खुराक थोड़ी अधिक होती है , इसलिए ऐसे कई मामले नहीं होते हैं जहां सोखना दक्षता में सुधार के लिए मनका खुराक बढ़ाने की आवश्यकता होती है। हालाँकि, यदि यह निर्धारित किया जाता है कि अपर्याप्त मनका खुराक के कारण निष्कर्षण प्रभाव खराब है, तो एक निश्चित सीमा के भीतर मनका खुराक बढ़ाकर निष्कर्षण प्रभाव में सुधार करना संभव है।
02 ग़लतफ़हमी 2: जितने अधिक अभिकर्मकों का उपयोग किया जाएगा, निष्कर्षण प्रभाव उतना ही बेहतर होगा।
लसीका प्रभाव अच्छा नहीं है? अधिक लाइसिस समाधान जोड़ें. धुलाई का प्रभाव अच्छा नहीं है? अधिक धुलाई समाधान जोड़ें. अभिकर्मक किटों के उपयोग में कई ग्राहकों की यह आदतन सोच है।
हालाँकि, चुंबकीय मनका विधि के लिए, तरल की मात्रा में प्रत्येक वृद्धि से चुंबकीय मोतियों के टकराने की संभावना कम हो जाती है , और चुंबकीय मोतियों के टकराने की संभावना कम होने से सोखने की दर में उल्लेखनीय कमी आ जाएगी। बहुत बार, हालांकि लिसीस समाधान और धुलाई समाधान में वृद्धि वास्तव में लिसीस और धुलाई की भूमिका को बढ़ाने में भूमिका निभा सकती है, लेकिन निष्कर्षण की चुंबकीय मनका विधि का मूल न्यूक्लिक एसिड के चुंबकीय मोतियों के सोखने की दक्षता है, चुंबकीय मोतियों की टक्कर दक्षता की गारंटी नहीं दे सकती है, न्यूक्लिक एसिड निष्कर्षण की दक्षता की गारंटी नहीं दे सकती है, इसलिए निष्कर्षण प्रभाव में सुधार करने के लिए अभिकर्मकों के उपयोग में साधारण वृद्धि आवश्यक रूप से पूरी तरह से प्रभावी नहीं है।
03 ग़लतफ़हमी 3: जितनी अधिक बार आप धोएंगे, निष्कर्षण प्रभाव उतना ही बेहतर होगा।
जब निकाले गए न्यूक्लिक एसिड में बहुत अधिक अशुद्धियाँ होती हैं, तो उपयोगकर्ता अधिक शुद्ध न्यूक्लिक एसिड प्राप्त करने के लिए अधिक बार धोने पर विचार करेगा। धोने की संख्या बढ़ाना वास्तव में न्यूक्लिक एसिड के शुद्धिकरण के लिए अनुकूल है, लेकिन यह ध्यान में रखते हुए कि प्रत्येक धोने से न्यूक्लिक एसिड की एक निश्चित मात्रा खो जाएगी, और न्यूक्लिक एसिड फ्रैक्चर के हाइड्रोलिसिस की संभावना बढ़ जाएगी, इसलिए आम तौर पर बोलते हुए, धोने की संख्या को 2 ~ 4 बार नियंत्रित करना उचित है।
04 ग़लतफ़हमी 4: जितने अधिक नमूने लिए जाएंगे, निष्कर्षण प्रभाव उतना ही बेहतर होगा
यदि नमूना पर्याप्त ताज़ा नहीं है या न्यूक्लिक एसिड सामग्री स्वयं बहुत छोटी है, तो अक्सर न्यूक्लिक एसिड निष्कर्षण प्रभाव अच्छा नहीं होता है, कई शिक्षक न्यूक्लिक एसिड निष्कर्षण की मात्रा बढ़ाने के लिए अधिक नमूनों का उपयोग करेंगे।
हालाँकि, केवल लिए गए नमूने की मात्रा बढ़ाने से कभी-कभी लाइसेट की लाइज़ करने की क्षमता से परे बहुत अधिक अशुद्धियाँ आ जाएंगी, और निष्कर्षण दक्षता भी कम हो जाएगी, इसलिए केवल लिए गए नमूने की मात्रा बढ़ाकर निष्कर्षण मात्रा बढ़ाने के लक्ष्य को प्राप्त करने की अनुशंसा नहीं की जाती है।
यदि अपर्याप्त नमूना मात्रा के कारण निष्कर्षण की मात्रा वास्तव में बहुत कम है, तो निष्कर्षण शुरू करने से पहले पूर्व-उपचार में संवर्धन या एकाग्रता चरण से गुजरने की सिफारिश की जाती है। या अधिक न्यूक्लिक एसिड को उजागर करने के लिए लसीका की पूर्णता को बढ़ाना भी एक समाधान है।
05 ग़लतफ़हमी 5: यदि एक प्रकार का मनका अच्छा है, तो उसे सभी प्रयोगों में अच्छा काम करना चाहिए
चुंबकीय मोती विभिन्न प्रकार के होते हैं, अलग-अलग कण आकार, अलग-अलग फैलाव, अलग-अलग चुंबकीय प्रतिक्रिया समय, अलग-अलग एनकैप्सुलेशन बेस मैट्रिक्स, अलग-अलग बाहरी परत संशोधन कार्यात्मक समूह, अलग-अलग एनकैप्सुलेशन घनत्व, अलग-अलग कार्यात्मक समूह बांह की लंबाई, जो चुंबकीय मनका विशेषताओं की एक विस्तृत श्रृंखला को जन्म देगी।
इसलिए, विभिन्न चुंबकीय मोतियों को विभिन्न प्रयोगों और प्रणालियों के लिए अनुकूलित किया जाता है। जैसे न्यूक्लिक एसिड निष्कर्षण के लिए समान अभिकर्मक बिल्कुल समान सूत्र नहीं होते हैं, वैसे ही न्यूक्लिक एसिड निष्कर्षण पर लगाए गए समान चुंबकीय मोती प्रकृति में बिल्कुल समान नहीं होते हैं।
कुछ चुंबकीय मोती मैक्रोन्यूक्लिक एसिड निष्कर्षण में उच्च सोखना दक्षता दिखाते हैं, जबकि अन्य ट्रेस न्यूक्लिक एसिड निष्कर्षण के लिए अधिक उपयुक्त होते हैं। कुछ चुंबकीय मोती अभिकर्मक प्रणालियों की अम्लीय श्रृंखला के लिए उपयुक्त होते हैं, और कुछ चुंबकीय मोती अभिकर्मक प्रणालियों की क्षारीय श्रृंखला के लिए उपयुक्त होते हैं। कुछ चुंबकीय मोतियों में अच्छी चुंबकीय प्रतिक्रिया होती है लेकिन तेजी से बसने की गति होती है, जो चुंबकीय रॉड प्रकार के स्वचालित एक्सट्रैक्टर के लिए अधिक उपयुक्त है; कुछ चुंबकीय मोतियों में स्थिरीकरण की गति धीमी होती है लेकिन चुंबकीय प्रतिक्रिया समय लंबा होता है, जो पिपेट प्रकार के स्वचालित चिमटा के लिए अधिक उपयुक्त है।
निश्चित किट के अलावा, शायद ही कोई चुंबकीय मोती सभी प्रयोगों के लिए उपयुक्त हो सकता है, ज्यादातर मामलों में, चुंबकीय मोती और अभिकर्मक प्रणालियों को समायोजन के साथ एक निश्चित समय करना पड़ता है।
06 ग़लतफ़हमी6: किसी निश्चित किट से तुलना अच्छी नहीं है, यानी चुंबकीय मोती अच्छे नहीं हैं।
कई ग्राहक पहले से ही परिपक्व अभिकर्मक प्रणाली में चुंबकीय मोतियों की स्क्रीनिंग की प्रक्रिया में, चुंबकीय मोतियों के प्रतिस्थापन की समान मात्रा का उपयोग चुंबकीय मोतियों के प्रभाव की तुलना करने के लिए करते हैं।
इससे आसानी से यह निष्कर्ष निकाला जा सकेगा कि एक निश्चित चुंबकीय मनका प्रभावी नहीं है, लेकिन वास्तव में, विभिन्न प्रणालियों के लिए उपयुक्त अलग-अलग चुंबकीय मनकों और खुराक के अलग-अलग होने के कारण, बेहतर निष्कर्षण परिणाम प्राप्त करने के लिए अक्सर इसे समायोजित करने की आवश्यकता होती है।
