01 Yanılgı 1: Ne kadar çok manyetik boncuk olursa, çıkarma etkisi o kadar iyi olur.
Pek çok öğretmen, ekstraksiyon etkisi iyi olmadığında, daha fazla manyetik boncukun daha fazla nükleik asit absorbe edebileceğini düşünerek manyetik boncuk miktarını artırma eğilimindedir. Ancak bu fikrin pek de arzu edilen bir şey olmadığını söylemek gerekir.
Manyetik boncukların ana özelliği, uygulanan bir manyetik alanın etkisi altında hem sıvı içinde dağılabilmeleri hem de sıvı fazdan katı bir şekilde ayrılabilmeleridir, herhangi bir reaktif sistemi, manyetik boncukların ve sıvının oranının belirli bir eşik olması gerekir , belirli bir oranın üzerinde çok fazla manyetik boncuk, dispersiyon özelliklerinin kaybı nedeniyle sıvı içinde eşit şekilde dağılamaz, ancak aynı zamanda yıkama işleminin nükleik asit boncuklarının verimliliğini ve sıvı temasını arttırmak için yeterli olamamasına neden olur.
Ve aşırı manyetik boncuklar aynı zamanda daha fazla yabancı maddeyi adsorbe edecektir , bu da yabancı maddelerin giderilmesinin etkisi üzerinde büyük bir etkiye sahiptir. Hatta çok fazla manyetik küreciğin sıvı sistemde önemli bir rol oynayan proteaz, lizozim ve diğer fonksiyonel bileşenleri adsorbe edeceği ve tüm kitin verimsiz olmasına yol açacağı zamanlar bile vardır. Ekstraksiyon etkisinin zayıf olduğu birçok durum vardır; kullanılan manyetik boncukların miktarını azaltın, ancak ekstraksiyon etkisini iyileştirmenin en iyi yolu budur.
Genellikle, manyetik boncuk yöntemi kiti tarafından verilen referans boncuk dozajı biraz fazladır , bu nedenle adsorpsiyon verimliliğini artırmak için boncuk dozajının arttırılmasının gerekli olduğu pek fazla durum yoktur. Ancak boncuk dozajının yetersiz olması nedeniyle ekstraksiyon etkisinin zayıf olduğu tespit edilirse boncuk dozajını belirli bir aralıkta artırarak ekstraksiyon etkisini iyileştirmek mümkündür.
02 Yanılgı 2: Ne kadar çok reaktif kullanılırsa ekstraksiyon etkisi o kadar iyi olur.
Lizis etkisi iyi değil mi? Daha fazla lizis solüsyonu ekleyin. Yıkama etkisi iyi değil mi? Daha fazla yıkama solüsyonu ekleyin. Bu, reaktif kitlerinin kullanımında birçok müşterinin alışılmış düşüncesidir.
Ancak manyetik boncuk yöntemi için sıvının hacmindeki her artış, manyetik boncukların çarpışma olasılığını azaltır ve manyetik boncukların çarpışma şansının azalması, adsorpsiyon oranında önemli bir azalmaya yol açacaktır. Çoğu zaman, liziz çözeltisi ve yıkama çözeltisindeki artış, liziz ve yıkama rolünün arttırılmasında gerçekten bir rol oynayabilse de, manyetik boncuk ekstraksiyon yönteminin özü, nükleik asitlerin manyetik boncuk adsorpsiyonunun verimliliğidir, manyetik boncuk çarpışma verimliliğinin verimliliğini garanti edemez, nükleik asit ekstraksiyonunun verimliliğini garanti edemez, bu nedenle ekstraksiyon etkisini iyileştirmek için reaktiflerin kullanımındaki basit artış mutlaka tamamen etkili değildir.
03 Yanılgı 3: Ne kadar çok yıkarsanız, ekstraksiyon etkisi o kadar iyi olur.
Ekstrakte edilen nükleik asitte çok fazla yabancı madde bulunduğunda, kullanıcı daha fazla saf nükleik asit elde etmek için daha fazla yıkamayı düşünecektir. Yıkama sayısının arttırılması aslında nükleik asitlerin saflaştırılmasına yardımcı olur, ancak her yıkamanın belirli miktarda nükleik asit kaybedeceği ve nükleik asit kırılmasının hidroliz olasılığını artıracağı dikkate alındığında, genel olarak konuşursak, yıkama sayısının 2 ~ 4 kez kontrol edilmesi uygundur.
04 Yanılgı 4: Ne kadar çok örnek alınırsa ekstraksiyon etkisi o kadar iyi olur
Numunenin yeterince taze olmaması veya nükleik asit içeriğinin kendisinin çok küçük olması durumunda, genellikle nükleik asit ekstraksiyon etkisi iyi değildir; birçok öğretmen, nükleik asit ekstraksiyon miktarını artırmak için daha fazla numune kullanacaktır.
Bununla birlikte, alınan numune miktarının basit bir şekilde arttırılması, bazen lizatın parçalama yeteneğinin ötesinde çok fazla safsızlığın ortaya çıkmasına neden olur ve aynı zamanda ekstraksiyon verimliliğini de azaltır; bu nedenle, yalnızca alınan numune miktarını artırarak ekstraksiyon miktarını artırma hedefine ulaşılması önerilmez.
Yetersiz numune hacmi nedeniyle ekstraksiyon hacmi gerçekten çok düşükse, ekstraksiyona başlamadan önce ön arıtmada bir zenginleştirme veya konsantrasyon adımından geçilmesi önerilir. Veya daha fazla nükleik asit ortaya çıkarmak için lizis işleminin tamlığını arttırmak da bir çözümdür.
05 Kavram Yanılgısı 5: Eğer bir boncuk türü iyiyse, tüm deneylerde iyi sonuç vermelidir.
Çeşitli manyetik boncuk türleri, farklı parçacık boyutu, farklı dağılabilirlik, farklı manyetik tepki süresi, farklı kapsülleme taban matrisi, farklı dış katman modifikasyon fonksiyonel grupları, farklı kapsülleme yoğunluğu, farklı fonksiyonel grup kol uzunlukları vardır ve bu da çok çeşitli manyetik boncuk özelliklerine yol açacaktır.
Bu nedenle farklı manyetik boncuklar farklı deneylere ve sistemlere uyarlanmıştır. Tıpkı nükleik asit ekstraksiyonu için kullanılan aynı reaktiflerin tamamen aynı formül olmaması gibi, nükleik asit ekstraksiyonuna uygulanan aynı manyetik boncuklar da doğası gereği tamamen aynı değildir.
Bazı manyetik boncuklar makronükleik asit ekstraksiyonunda daha yüksek adsorpsiyon verimliliği gösterirken diğerleri eser nükleik asit ekstraksiyonu için daha uygundur. Bazı manyetik boncuklar asidik seri reaktif sistemleri için uygundur ve bazı manyetik boncuklar alkalin seri reaktif sistemleri için uygundur. Bazı manyetik boncuklar iyi bir manyetik tepkiye sahiptir ancak manyetik çubuk tipi otomatik çıkarıcı için daha uygun olan hızlı yerleşme hızına sahiptir; bazı manyetik boncuklar yavaş yerleşme hızına sahiptir ancak uzun manyetik tepki süresine sahiptir; bu, pipet tipi otomatik çıkarıcı için daha uygundur.
Nadiren manyetik boncuklar tüm deneyler için uygun olabilir, çoğu durumda manyetik boncuklar ve reaktif sistemlerinin sabit kitlere ek olarak ayarlanması için belirli bir süre yapması gerekir.
06 Yanılgı6: Belirli bir kit ile karşılaştırma iyi değildir, yani manyetik boncuklar iyi değildir.
Zaten olgunlaşmış reaktif sisteminde manyetik boncukların taranması sürecindeki birçok müşteri, manyetik boncukların etkisini karşılaştırmak için kullanılan manyetik boncukların eşit miktarda değiştirilmesi yeterlidir.
Bu, belirli bir manyetik küreciğin etkili olmadığı, ancak aslında farklı sistemlere uygun farklı manyetik boncuklar ve dozajın farklı olması nedeniyle, daha iyi ekstraksiyon sonuçları elde etmek için sıklıkla ayarlanması gerektiği sonucuna varacaktır.
