01 1. tévhit: Minél több mágneses gyöngy, annál jobb az extrakciós hatás.
Sok tanár hajlamos növelni a mágneses gyöngyök mennyiségét, ha az extrakciós hatás nem jó, azt gondolva, hogy több mágneses gyöngy több nukleinsavat képes elnyelni. Meg kell azonban mondani, hogy ez az ötlet nem kívánatos.
A mágneses gyöngyök fő jellemzője, hogy alkalmazott mágneses tér hatására mind folyadékban diszpergálhatók, mind a folyékony fázistól szilárd módon elválaszthatók, bármilyen reagensrendszer, a mágneses gyöngyök és a folyadék aránya egy bizonyos küszöbérték kell, hogy legyen , bizonyos arány felett túl sok mágnesgyöngy nem tud egyenletesen eloszlani, de a mosási folyamat elvesztése miatt nem tud elegendő mértékben diszpergálódni a folyadékban. a nukleinsavgyöngyök és a folyadékkontaktus hatékonysága.
A túl sok mágneses gyöngy több szennyeződést is adszorbeál , ami nagyban befolyásolja a szennyeződések eltávolításának hatását. Vannak olyan esetek is, amikor túl sok mágneses gyöngy adszorbeálja a proteázt, lizozimot és más funkcionális komponenseket, amelyek fontos szerepet játszanak a folyadékrendszerben, ami a teljes készlet hatástalanságához vezet. Sokszor gyenge az extrakciós hatás, csökkenti a felhasznált mágneses gyöngyök mennyiségét, de ez az optimális módja az extrakciós hatás javításának.
Általában a mágneses gyöngy módszer készlet által megadott referencia gyöngyadag kissé túlzott , így nem sok olyan eset van, amikor a gyöngy adagját kell növelni az adszorpciós hatékonyság javítása érdekében. Ha azonban megállapítják, hogy az extrakciós hatás gyenge az elégtelen gyöngydózis miatt, lehetséges az extrakciós hatás javítása a gyöngy adagjának egy bizonyos tartományon belüli növelésével.
02 2. tévhit: Minél több reagenst használunk, annál jobb az extrakciós hatás.
A lízis hatása nem jó? Adjon hozzá több lízisoldatot. A mosóhatás nem jó? Adjon hozzá több mosóoldatot. Sok ügyfél szokásos gondolkodása ez a reagenskészletek használatakor.
A mágneses gyöngyök módszerénél azonban a folyadék térfogatának minden növelése csökkenti a mágneses gyöngyök ütközésének esélyét , és a mágneses gyöngyök ütközési esélyének csökkentése az adszorpciós sebesség jelentős csökkenéséhez vezet. Tehát nagyon gyakran, bár a lízisoldat és a mosóoldat növekedése valóban szerepet játszhat a lízis és mosás szerepének fokozásában, de a mágneses gyöngyök extrakciós módszerének lényege a mágneses gyöngyök nukleinsavak adszorpciójának hatékonysága, nem tudja garantálni a mágneses gyöngyök ütközési hatékonyságát, így az egyszerű sav extrakciója nem tudja javítani a nukleáris extrakció hatékonyságát. Az extrakciós hatás nem feltétlenül teljesen hatékony.
03 3. tévhit: Minél többször mosol, annál jobb az extrakciós hatás.
Ha az extrahált nukleinsav túl sok szennyeződést tartalmaz, a felhasználó többszöri mosást is fontolóra vesz, hogy több tiszta nukleinsavat kapjon. A mosások számának növelése valóban elősegíti a nukleinsavak tisztítását, de figyelembe véve, hogy minden mosás bizonyos mennyiségű nukleinsavat veszít, és növeli a nukleinsavtörés hidrolízisének lehetőségét, így általánosságban elmondható, hogy a mosások számát 2-4 alkalommal szabályozzuk.
04 4. tévhit: Minél több mintát vesznek, annál jobb az extrakciós hatás
Abban az esetben, ha a minta nem elég friss, vagy maga a nukleinsavtartalom nagyon kicsi, gyakran nem jó a nukleinsav extrakciós hatása, sok tanár több mintát használ a nukleinsav extrakció mennyiségének növelésére.
A vett minta mennyiségének pusztán növelése azonban olykor túl sok szennyeződést visz be a lizátum lizálódási képességén túl, és az extrakció hatékonyságát is csökkenti, ezért az extrakciós mennyiség növelésének célját nem ajánlatos a vett minta mennyiségének pusztán növelésével elérni.
Ha az extrakciós térfogat valóban túl alacsony az elégtelen mintatérfogat miatt, akkor az extrakció megkezdése előtt ajánlatos az előkezelés során egy dúsítási vagy koncentrálási lépésen átesni. Vagy a lízis teljességének növelése több nukleinsav feltárása érdekében szintén megoldás.
05 5. tévhit: Ha egyfajta gyöngy jó, akkor minden kísérletben jól kell működnie
Különböző típusú mágneses gyöngyök, különböző részecskeméretek, eltérő diszpergálhatóság, eltérő mágneses válaszidő, különböző kapszulázási alapmátrix, különböző külső réteg módosítási funkcionális csoportok, különböző kapszulázási sűrűség, különböző funkcionális csoportok karhosszúságai vannak, amelyek a mágneses gyöngy jellemzőinek széles skálájához vezetnek.
Ezért a különböző mágneses gyöngyöket különböző kísérletekhez és rendszerekhez igazítják. Ahogyan a nukleinsav-extrakcióhoz használt ugyanazon reagensek nem pontosan ugyanazt a képletet tartalmazzák, a nukleinsav-extrakcióhoz használt mágneses gyöngyök természetükben nem teljesen azonosak.
Egyes mágneses gyöngyök nagyobb adszorpciós hatékonyságot mutatnak a makronukleinsav extrakció során, míg mások alkalmasabbak nyomnyi nukleinsav extrakcióra. Egyes mágneses gyöngyök savas sorozatú reagensrendszerekhez, míg egyes mágneses gyöngyök lúgos reagensrendszerekhez alkalmasak. Egyes mágneses gyöngyök jó mágneses reakcióval rendelkeznek, de gyors ülepedési sebességgel rendelkeznek, ami jobban megfelel a mágnesrúd típusú automatikus elszívóhoz; egyes mágneses gyöngyök lassú ülepedési sebességgel, de hosszú mágneses válaszidővel rendelkeznek, ami alkalmasabb pipetta típusú automata elszívóhoz.
A mágneses gyöngyök ritkán alkalmasak minden kísérletre, a rögzített készleten túlmenően a legtöbb esetben a mágneses gyöngyökkel és a reagensrendszerekkel bizonyos időt kell végezni a beállítással.
06 Tévhit6: Egy bizonyos készlettel való összehasonlítás nem jó, vagyis a mágneses gyöngyök nem jók.
Sok ügyfél a folyamat szűrése mágneses gyöngyök a már érett reagens rendszer, egyszerűen azonos mennyiségű csere mágneses gyöngyök, használt összehasonlítani a hatását a mágneses gyöngyök.
Ez könnyen arra a következtetésre jut, hogy egy bizonyos mágneses gyöngy nem hatékony, de valójában a különböző rendszerekhez alkalmas különböző mágneses gyöngyök és az adagolás eltérő, ezért gyakran módosítani kell a jobb extrakciós eredmények elérése érdekében.
