01 Заблуждение 1: Чем больше магнитных шариков, тем лучше эффект извлечения.
Многие учителя склонны увеличивать количество магнитных шариков, когда эффект экстракции неудовлетворителен, полагая, что большее количество магнитных шариков сможет поглотить больше нуклеиновых кислот. Однако надо сказать, что эта идея нежелательна.
Основная особенность магнитных шариков заключается в том, что они могут как диспергироваться в жидкости, так и отделяться от жидкой фазы твердым образом под действием приложенного магнитного поля, любой системы реагентов, соотношение магнитных шариков и жидкости должно быть определенным порогом , при определенном соотношении слишком много магнитных шариков не смогут равномерно диспергироваться в жидкости из-за потери ее дисперсионных свойств, но также процесс промывки не может быть достаточным для повышения эффективности контакта шариков нуклеиновой кислоты и контакта с жидкостью.
Чрезмерное количество магнитных шариков также будет адсорбировать больше примесей , что оказывает большое влияние на эффект удаления примесей. Бывают даже случаи, когда слишком много магнитных шариков адсорбируют протеазу, лизоцим и другие функциональные компоненты, которые играют важную роль в жидкостной системе, что приводит к неэффективности всего набора. Во многих случаях эффект экстракции плохой, уменьшите количество используемых магнитных шариков, но это оптимальный способ улучшить эффект экстракции.
Обычно эталонная дозировка шариков, указанная в наборе для метода магнитных шариков, немного завышена , поэтому не так уж много случаев, когда дозировку шариков необходимо увеличить для повышения эффективности адсорбции. Однако если установлено, что эффект экстракции плохой из-за недостаточной дозировки гранул, можно улучшить эффект экстракции путем увеличения дозировки гранул в определенном диапазоне.
02 Заблуждение 2: Чем больше реагентов используется, тем лучше эффект экстракции.
Эффект лизиса нехороший? Добавьте еще раствор для лизиса. Эффект стирки плохой? Добавьте еще моющего раствора. Это привычное мышление многих клиентов при использовании наборов реагентов.
Однако для метода магнитных шариков каждое увеличение объема жидкости снижает вероятность столкновения магнитных шариков , а уменьшение вероятности столкновения магнитных шариков приведет к значительному снижению скорости адсорбции. Поэтому очень часто, хотя увеличение количества лизирующего раствора и промывочного раствора действительно может играть роль в повышении роли лизиса и промывки, но сутью метода экстракции магнитных шариков является эффективность адсорбции нуклеиновых кислот магнитными шариками, что не может гарантировать эффективность эффективности столкновения магнитных шариков не может гарантировать эффективность экстракции нуклеиновых кислот, поэтому простое увеличение использования реагентов для улучшения эффекта экстракции не обязательно является полностью эффективным.
03 Заблуждение 3: Чем больше раз вы моетесь, тем лучше эффект экстракции.
Если экстрагированная нуклеиновая кислота содержит слишком много примесей, пользователю придется промывать ее несколько раз, чтобы получить более чистую нуклеиновую кислоту. Увеличение количества промывок действительно способствует очистке нуклеиновых кислот, но принимая во внимание, что каждая промывка приводит к потере определенного количества нуклеиновых кислот и увеличивает возможность гидролиза разрушения нуклеиновых кислот, поэтому, вообще говоря, количество промывок контролируется в 2-4 раза.
04 Заблуждение 4: Чем больше образцов взято, тем лучше эффект экстракции
Если образец недостаточно свежий или содержание нуклеиновой кислоты само по себе очень мало, эффект экстракции нуклеиновой кислоты часто бывает плохим, многие преподаватели будут использовать больше образцов, чтобы увеличить объем экстракции нуклеиновой кислоты.
Однако простое увеличение количества взятой пробы иногда приводит к появлению слишком большого количества примесей, превышающих способность лизата к лизату, а также снижает эффективность экстракции, поэтому не рекомендуется достигать цели увеличения объема экстракции путем простого увеличения количества взятой пробы.
Если объем экстракции действительно слишком мал из-за недостаточного объема пробы, перед началом экстракции рекомендуется пройти этап обогащения или концентрирования в рамках предварительной обработки. Или увеличение полноты лизиса для выявления большего количества нуклеиновых кислот также является решением.
05 Заблуждение 5: Если один тип бусинок хорош, он должен хорошо работать во всех экспериментах.
Существуют различные типы магнитных шариков, разный размер частиц, разная дисперсность, разное время магнитного отклика, разная базовая матрица инкапсуляции, разные функциональные группы модификации внешнего слоя, разная плотность инкапсуляции, разная длина плеч функциональной группы, что приводит к широкому диапазону характеристик магнитных шариков.
Поэтому разные магнитные шарики адаптируются к разным экспериментам и системам. Точно так же, как одни и те же реагенты для экстракции нуклеиновых кислот имеют разную формулу, одни и те же магнитные шарики, применяемые для экстракции нуклеиновых кислот, не совсем одинаковы по своей природе.
Некоторые магнитные шарики демонстрируют более высокую эффективность адсорбции при экстракции макронуклеиновых кислот, тогда как другие более подходят для экстракции следовых количеств нуклеиновых кислот. Некоторые магнитные шарики подходят для кислого ряда систем реагентов, а некоторые магнитные шарики подходят для щелочного ряда систем реагентов. Некоторые магнитные шарики имеют хороший магнитный отклик, но высокую скорость стабилизации, что больше подходит для автоматического экстрактора с магнитным стержнем; некоторые магнитные шарики имеют медленную скорость стабилизации, но длительное время магнитного отклика, что больше подходит для автоматического экстрактора пипеточного типа.
Редко магнитные шарики могут подойти для всех экспериментов, помимо фиксированного набора с магнитными шариками и системами реагентов в большинстве случаев приходится уделять определенное время настройке.
06 Заблуждение 6: Сравнение с определенным комплектом нехорошо, то есть магнитные бусины нехорошие.
Многие клиенты в процессе скрининга магнитных шариков в уже зрелой системе реагентов просто заменяют равное количество магнитных шариков, используемых для сравнения эффекта магнитных шариков.
Из этого легко сделать вывод, что определенные магнитные шарики неэффективны, но на самом деле из-за того, что разные магнитные шарики подходят для разных систем и дозировка различна, их часто необходимо корректировать, чтобы получить лучшие результаты экстракции.
