01 Misvatting 1: Hoe meer magnetische kralen, hoe beter het extractie-effect.
Veel leraren hebben de neiging om de hoeveelheid magnetische kralen te verhogen als het extractie-effect niet goed is, omdat ze denken dat meer magnetische kralen meer nucleïnezuren zullen kunnen absorberen. Het moet echter gezegd worden dat dit idee niet wenselijk is.
Het belangrijkste kenmerk van magnetische kralen is dat ze zowel in vloeistof kunnen worden gedispergeerd als op een vaste manier van de vloeibare fase kunnen worden gescheiden onder invloed van een aangelegd magnetisch veld. Elk reagenssysteem moet de verhouding tussen magnetische kralen en vloeistof een bepaalde drempelwaarde hebben . Boven een bepaalde verhouding zullen te veel magnetische kralen niet gelijkmatig in de vloeistof kunnen worden gedispergeerd vanwege het verlies van de dispersie-eigenschappen, maar kunnen ze er ook voor zorgen dat het wasproces niet voldoende is om de efficiëntie van de nucleïnezuurkralen en het vloeistofcontact te vergroten.
En overmatige magnetische kralen zullen ook meer onzuiverheden adsorberen , wat een grote invloed heeft op het effect van het verwijderen van onzuiverheden. Er zijn zelfs momenten waarop te veel magnetische kralen protease, lysozym en andere functionele componenten adsorberen die een belangrijke rol spelen in het vloeistofsysteem, wat leidt tot de inefficiëntie van de hele kit. Er zijn veel momenten waarop het extractie-effect slecht is. Verminder de hoeveelheid gebruikte magnetische kralen, maar dit is de optimale manier om het extractie-effect te verbeteren.
Meestal is de referentiedosering van de parels die wordt gegeven door de magnetische parelmethodekit enigszins overdreven , dus er zijn niet veel gevallen waarin de dosering van de parels moet worden verhoogd om de adsorptie-efficiëntie te verbeteren. Als echter wordt vastgesteld dat het extractie-effect slecht is als gevolg van onvoldoende dosering van de parels, is het mogelijk het extractie-effect te verbeteren door de dosering van de parels binnen een bepaald bereik te verhogen.
02 Misvatting 2: Hoe meer reagentia er worden gebruikt, hoe beter het extractie-effect.
Het lysiseffect is niet goed? Voeg meer lysisoplossing toe. Het waseffect is niet goed? Voeg meer wasoplossing toe. Dit is de gebruikelijke gedachte van veel klanten bij het gebruik van reagenskits.
Bij de magnetische kralenmethode verkleint echter elke toename van het volume van de vloeistof de kans op botsingen van de magnetische kralen , en zal het verkleinen van de kans op botsingen van de magnetische kralen leiden tot een aanzienlijke afname van de adsorptiesnelheid. Dus heel vaak, hoewel de toename van de lysisoplossing en de wasoplossing inderdaad een rol kan spelen bij het verbeteren van de rol van lysis en wassen, maar de kern van de extractiemethode met magnetische kralen de efficiëntie van de adsorptie van nucleïnezuren door magnetische kralen is, kan de efficiëntie van de botsingsefficiëntie van de magnetische kralen niet garanderen. kan de efficiëntie van de extractie van nucleïnezuren niet garanderen, dus de eenvoudige toename van het gebruik van reagentia om het extractie-effect te verbeteren is niet noodzakelijkerwijs volledig effectief.
03 Misvatting 3: Hoe vaker je wast, hoe beter het extractie-effect.
Wanneer het geëxtraheerde nucleïnezuur te veel onzuiverheden bevat, zal de gebruiker overwegen om vaker te wassen om meer zuiver nucleïnezuur te verkrijgen. Het verhogen van het aantal wasbeurten is inderdaad bevorderlijk voor de zuivering van nucleïnezuren, maar als we er rekening mee houden dat bij elke wasbeurt een bepaalde hoeveelheid nucleïnezuren verloren gaat en de kans op hydrolyse van nucleïnezuurfracturen toeneemt, is het in het algemeen gesproken passend om het aantal wasbeurten in de 2 tot 4 keer te controleren.
04 Misvatting 4: Hoe meer monsters worden genomen, hoe beter het extractie-effect
In het geval dat het monster niet vers genoeg is of het nucleïnezuurgehalte zelf erg klein is, is het nucleïnezuurextractie-effect vaak niet goed. Veel leraren zullen meer monsters gebruiken om de hoeveelheid nucleïnezuurextractie te vergroten.
Het eenvoudigweg verhogen van de hoeveelheid genomen monster zal echter soms te veel onzuiverheden introduceren die verder gaan dan het vermogen van het lysaat om te lyseren, en zal ook de extractie-efficiëntie verminderen. Het wordt dus niet aanbevolen om het doel van het verhogen van de extractiehoeveelheid te bereiken door eenvoudigweg de hoeveelheid genomen monster te vergroten.
Indien het extractievolume inderdaad te laag is door onvoldoende monstervolume, verdient het aanbeveling om in de voorbehandeling een verrijkings- of concentratiestap te doorlopen alvorens met de extractie te beginnen. Of het vergroten van de volledigheid van de lyse om meer nucleïnezuren bloot te leggen is ook een oplossing.
05 Misvatting 5: Als één type kraal goed is, zou deze in alle experimenten goed moeten werken
Er zijn verschillende soorten magnetische kralen, verschillende deeltjesgroottes, verschillende dispergeerbaarheid, verschillende magnetische responstijd, verschillende inkapselingsbasismatrix, verschillende functionele groepen voor modificatie van de buitenlaag, verschillende inkapselingsdichtheid, verschillende armlengtes van functionele groepen, wat zal leiden tot een breed scala aan magnetische kraalkarakteristieken.
Daarom zijn verschillende magnetische kralen aangepast aan verschillende experimenten en systemen. Net zoals dezelfde reagentia voor nucleïnezuurextractie niet precies dezelfde formule hebben, zijn dezelfde magnetische kralen die worden toegepast voor nucleïnezuurextractie niet precies hetzelfde van aard.
Sommige magnetische kralen vertonen een hogere adsorptie-efficiëntie bij de extractie van macronucleïnezuren, terwijl andere geschikter zijn voor de extractie van sporennucleïnezuren. Sommige magnetische kralen zijn geschikt voor zure reeksen reagenssystemen, en sommige magnetische kralen zijn geschikt voor alkalische reeksen reagenssystemen. Sommige magnetische kralen hebben een goede magnetische respons maar een snelle bezinkingssnelheid, wat geschikter is voor automatische extractor van het magnetische staaftype; sommige magnetische kralen hebben een lage bezinkingssnelheid maar een lange magnetische responstijd, wat geschikter is voor automatische extractor van het pipettype.
Zelden kunnen magnetische kralen geschikt zijn voor alle experimenten, naast de vaste kit met, in de meeste gevallen, magnetische kralen en reagenssystemen moeten ze een bepaalde hoeveelheid tijd met de aanpassing doen.
06 Misvatting6: Vergelijking met een bepaalde kit is niet goed, dat wil zeggen dat de magnetische kralen niet goed zijn.
Veel klanten in het proces van screening van magnetische kralen in het reeds volwassen reagenssysteem, eenvoudigweg een gelijke hoeveelheid vervanging van magnetische kralen, gebruikt om het effect van magnetische kralen te vergelijken.
Hieruit kan gemakkelijk worden geconcludeerd dat een bepaalde magnetische korrel niet effectief is, maar in feite, vanwege de verschillende magnetische korrels die geschikt zijn voor verschillende systemen en de dosering verschillend is, vaak moet worden aangepast om betere extractieresultaten te verkrijgen.
