01 Idea errata 1: maggiore è il numero di sfere magnetiche, migliore sarà l'effetto di estrazione.
Molti insegnanti tendono ad aumentare la quantità di sfere magnetiche quando l'effetto di estrazione non è buono, pensando che più sfere magnetiche saranno in grado di assorbire più acidi nucleici. Va però detto che questa idea non è auspicabile.
La caratteristica principale delle sfere magnetiche è che possono essere disperse nel liquido e separate dalla fase liquida in modo solido sotto l'azione di un campo magnetico applicato, qualsiasi sistema di reagenti, il rapporto tra sfere magnetiche e liquido dovrebbe essere una certa soglia , oltre un certo rapporto, troppe sfere magnetiche non saranno in grado di disperdersi uniformemente nel liquido a causa della perdita delle sue proprietà di dispersione, ma anche il processo di lavaggio non può essere sufficiente per aumentare l'efficienza delle sfere di acido nucleico e il contatto con il liquido.
Inoltre, un numero eccessivo di sfere magnetiche assorbirà più impurità , il che ha una grande influenza sull'effetto di rimozione delle impurità. Ci sono anche momenti in cui troppe sfere magnetiche adsorbono proteasi, lisozima e altri componenti funzionali che svolgono un ruolo importante nel sistema liquido, portando all'inefficienza dell'intero kit. In molti casi in cui l'effetto di estrazione è scarso, ridurre la quantità di sfere magnetiche utilizzate, ma è il modo ottimale per migliorare l'effetto di estrazione.
Di solito, il dosaggio di riferimento delle sfere fornito dal kit del metodo con sfere magnetiche è leggermente eccessivo , quindi non sono molti i casi in cui è necessario aumentare il dosaggio delle sfere per migliorare l'efficienza di adsorbimento. Tuttavia, se si determina che l'effetto di estrazione è scarso a causa del dosaggio insufficiente delle perle, è possibile migliorare l'effetto di estrazione aumentando il dosaggio delle perle entro un certo intervallo.
02 Idea sbagliata 2: Maggiore è il numero di reagenti utilizzati, migliore sarà l'effetto di estrazione.
L'effetto della lisi non è buono? Aggiungere altra soluzione di lisi. L'effetto di lavaggio non è buono? Aggiungere altra soluzione di lavaggio. Questo è il pensiero abituale di molti clienti nell'utilizzo dei kit di reagenti.
Tuttavia, per il metodo delle sfere magnetiche, ogni aumento del volume del liquido riduce la possibilità di collisione delle sfere magnetiche e la riduzione della possibilità di collisione delle sfere magnetiche porterà ad una significativa diminuzione del tasso di adsorbimento. Quindi molto spesso, anche se l'aumento della soluzione di lisi e della soluzione di lavaggio può effettivamente svolgere un ruolo nel migliorare il ruolo della lisi e del lavaggio, ma il nucleo del metodo di estrazione delle sfere magnetiche è l'efficienza dell'adsorbimento degli acidi nucleici da parte delle sfere magnetiche, non può garantire l'efficienza dell'efficienza di collisione delle sfere magnetiche non può garantire l'efficienza dell'estrazione dell'acido nucleico, quindi il semplice aumento nell'uso di reagenti per migliorare l'effetto di estrazione non è necessariamente completamente efficace.
03 Idea sbagliata 3: Più volte si lava, migliore è l'effetto di estrazione.
Quando l'acido nucleico estratto presenta troppe impurità, l'utente valuterà la possibilità di lavarlo più volte per ottenere acido nucleico più puro. Aumentare il numero di lavaggi è effettivamente favorevole alla purificazione degli acidi nucleici, ma tenendo conto che ogni lavaggio perderà una certa quantità di acidi nucleici e aumenterà la possibilità di idrolisi della frattura dell'acido nucleico, quindi in generale è appropriato controllare il numero di lavaggi entro 2 ~ 4 volte.
04 Idea sbagliata 4: Maggiore è il numero di campioni prelevati, migliore sarà l'effetto di estrazione
Nel caso in cui il campione non sia sufficientemente fresco o il contenuto di acido nucleico stesso sia molto piccolo, spesso l'effetto di estrazione dell'acido nucleico non è buono, molti insegnanti utilizzeranno più campioni per aumentare la quantità di estrazione dell'acido nucleico.
Tuttavia, il semplice aumento della quantità di campione prelevato a volte introduce troppe impurità oltre la capacità di lisi del lisato e riduce anche l'efficienza di estrazione, quindi non è consigliabile raggiungere l'obiettivo di aumentare la quantità di estrazione semplicemente aumentando la quantità di campione prelevato.
Se il volume di estrazione è effettivamente troppo basso a causa di un volume di campione insufficiente, si consiglia di eseguire una fase di arricchimento o concentrazione nel pretrattamento prima di iniziare l'estrazione. Oppure anche aumentare la completezza della lisi per esporre più acidi nucleici è una soluzione.
05 Idea sbagliata 5: Se un tipo di perla è buono, dovrebbe funzionare bene in tutti gli esperimenti
Esistono vari tipi di sfere magnetiche, diverse dimensioni delle particelle, diversa disperdibilità, diversi tempi di risposta magnetica, diversa matrice di base di incapsulamento, diversi gruppi funzionali di modifica dello strato esterno, diversa densità di incapsulamento, diverse lunghezze dei bracci dei gruppi funzionali, che porteranno a un'ampia gamma di caratteristiche delle sfere magnetiche.
Pertanto, diverse sfere magnetiche sono adattate a diversi esperimenti e sistemi. Proprio come gli stessi reagenti per l'estrazione dell'acido nucleico non hanno esattamente la stessa formula, le stesse sfere magnetiche applicate all'estrazione dell'acido nucleico non sono esattamente della stessa natura.
Alcune sfere magnetiche mostrano una maggiore efficienza di adsorbimento nell'estrazione dell'acido macronucleico, mentre altre sono più adatte per l'estrazione dell'acido nucleico in tracce. Alcune sfere magnetiche sono adatte per serie di sistemi reagenti acidi, mentre alcune sfere magnetiche sono adatte per serie di sistemi reagenti alcalini. Alcune sfere magnetiche hanno una buona risposta magnetica ma una velocità di assestamento elevata, che è più adatta per l'estrattore automatico del tipo ad asta magnetica; alcune sfere magnetiche hanno una velocità di sedimentazione lenta ma un lungo tempo di risposta magnetica, che è più adatto per l'estrattore automatico del tipo a pipetta.
Raramente le sfere magnetiche possono essere adatte a tutti gli esperimenti, oltre al kit fisso con, nella maggior parte dei casi, le sfere magnetiche e i sistemi di reagenti devono dedicare un certo tempo alla regolazione.
06 Idea sbagliata6: il confronto con un certo kit non è buono, cioè le sfere magnetiche non sono buone.
Molti clienti nel processo di screening delle sfere magnetiche nel sistema di reagenti già maturo, semplicemente la stessa quantità di sostituzione delle sfere magnetiche, utilizzata per confrontare l'effetto delle sfere magnetiche.
Ciò porterà facilmente alla conclusione che una certa perla magnetica non è efficace, ma in realtà, a causa delle diverse perle magnetiche adatte a diversi sistemi e al diverso dosaggio, spesso è necessario regolarlo per ottenere risultati di estrazione migliori.
