ビュー: 0 著者: サイト編集者 公開時間: 2023-08-08 起源: サイト
01 誤解 1: 磁気ビーズの数が多いほど、抽出効果は高くなります。
多くの教師は、抽出効果が良くない場合、磁性ビーズの量を増やすとより多くの核酸を吸収できると考え、磁性ビーズの量を増やす傾向があります。しかし、この考えは望ましいものではないと言わざるを得ません。
磁性ビーズの主な特徴は、印加された磁場の作用下で、磁性ビーズが液体中に分散することと、どのような試薬系でも固体の方法で液相から分離できることです。 磁性ビーズと液体の比率は特定の閾値である必要があり、特定の比率を超えると、磁性ビーズが多すぎると分散特性が失われるため、液体中に均一に分散できなくなります。また、洗浄プロセスが核酸ビーズと液体接触の効率を高めるのに十分ではなくなります。
また、 過剰な磁性ビーズはより多くの不純物を吸着することになり、不純物の除去効果に大きな影響を与えます。磁性ビーズが多すぎると、液体システムで主要な役割を果たすプロテアーゼ、リゾチーム、その他の機能成分が吸着され、キット全体の効率が低下する場合もあります。抽出効果が悪い場合は磁性ビーズの使用量を減らすことが多いですが、抽出効果を高めるには最適な方法です。
通常、 磁気ビーズメソッドキットで与えられる基準ビーズ添加量はやや過剰であるため、吸着効率を向上させるためにビーズ添加量を増やす必要があるケースは多くありません。ただし、ビーズの添加量が不十分で抽出効果が低いと判断される場合は、ビーズの添加量を一定の範囲内で増加させることで抽出効果を向上させることが可能です。
02 誤解 2: 使用する試薬が多いほど、抽出効果は高くなります。
溶解効果は良くないですか？さらに溶解液を加えます。洗浄効果が良くない？さらに洗浄液を加えます。これは、試薬キットを使用する際の多くのお客様の習慣的な考え方です。
しかし、磁気ビーズ法の場合、 液体の体積が増加するたびに磁気ビーズの衝突機会が減少し、磁気ビーズの衝突機会の減少は吸着率の大幅な低下につながります。多くの場合、溶解溶液と洗浄溶液の増加は確かに溶解と洗浄の役割を高める役割を果たしますが、磁気ビーズ抽出法の核心は磁気ビーズの核酸吸着効率であり、磁気ビーズの衝突効率の効率は保証できませんし、核酸抽出の効率も保証できません。そのため、抽出効果を向上させるために試薬の使用量を単純に増やすだけでは必ずしも完全に効果があるとは限りません。
03 誤解3: 洗浄回数が多ければ多いほど、抽出効果は高くなります。
抽出された核酸に不純物が多すぎる場合、ユーザーはより純粋な核酸を得るために洗浄回数を増やすことを検討します。確かに洗浄回数を増やすと核酸の精製には有利ですが、1回の洗浄で一定量の核酸が失われ、核酸の加水分解による破壊の可能性が高まることを考慮すると、一般的には2～4回程度で洗浄回数をコントロールするのが適切です。
04 誤解 4: 採取したサンプルが多いほど、抽出効果は高くなります
サンプルの鮮度が十分でない場合、または核酸含有量自体が非常に少ない場合、核酸抽出効果が良くない場合が多く、多くの教師は核酸抽出量を増やすためにより多くのサンプルを使用します。
ただし、単にサンプル採取量を増やすと、ライセートの溶解能力を超えた不純物が多量に混入する場合があり、抽出効率も低下するため、 サンプル採取量を増やすだけで抽出量を増やすという目標を達成することはお勧めできません。
サンプル量が不十分で抽出量が実際に少なすぎる場合は、抽出を開始する前に前処理で濃縮または濃縮のステップを実行することをお勧めします。あるいは、溶解の完全性を高めてより多くの核酸を露出させることも解決策です。
05 誤解 5: 1 種類のビーズが優れていれば、すべての実験でうまく機能するはずです
磁気ビーズにはさまざまな種類があり、異なる粒子サイズ、異なる分散性、異なる磁気応答時間、異なるカプセル化ベースマトリックス、異なる外層修飾官能基、異なるカプセル化密度、異なる官能基アーム長があり、これらにより磁気ビーズの幅広い特性が得られます。
したがって、異なる磁気ビーズが異なる実験やシステムに適応されます。核酸抽出用の同じ試薬がまったく同じ処方ではないのと同様に、核酸抽出に適用される同じ磁気ビーズも本質的にまったく同じではありません。
磁気ビーズの中には、マクロ核酸の抽出においてより高い吸着効率を示すものもあれば、微量核酸の抽出により適したものもあります。一部の磁気ビーズは酸性シリーズの試薬システムに適しており、一部の磁気ビーズはアルカリ性シリーズの試薬システムに適しています。一部の磁気ビーズは磁気応答が良好ですが、沈降速度が速いため、磁気ロッド型の自動抽出装置に適しています。磁性ビーズの中には、沈降速度が遅いものの磁気応答時間が長いものもあり、ピペットタイプの自動抽出装置に適しています。
磁性ビーズがすべての実験に適していることはまれですが、ほとんどの場合、磁性ビーズと試薬システムの調整には一定の時間が必要です。
06 誤解6: あるキットとの比較が良くない、つまり磁気ビーズが良くない。
すでに成熟した試薬システムで磁性ビーズをスクリーニングする過程にある多くのお客様は、磁性ビーズの効果を比較するために単に同量の磁性ビーズを交換するだけで使用されます。
これにより、特定の磁気ビーズが効果的ではないと簡単に結論付けることができますが、実際には、異なるシステムに適した異なる磁気ビーズや投与量が異なるため、より良い抽出結果を得るには調整が必要になることがよくあります。
