Visningar: 0 Författare: Webbplatsredaktör Publicera tid: 2023-08-08 Ursprung: Plats
01 Missuppfattning 1: Ju mer magnetiska pärlor, desto bättre extraktionseffekt.
Många lärare tenderar att öka mängden magnetiska pärlor när extraktionseffekten inte är bra och tänker att fler magnetiska pärlor kommer att kunna absorbera fler nukleinsyror. Det måste dock sägas att denna idé inte är önskvärd.
The main feature of magnetic beads is that they can be both dispersed in liquid and separated from the liquid phase in a solid manner under the action of an applied magnetic field, any reagent system, the ratio of magnetic beads and liquid should be a certain threshold , over a certain ratio, too many magnetic beads will not be able to evenly dispersed in the liquid because of the loss of its dispersion properties, but also make the washing process can not be sufficient to increase Effektiviteten hos nukleinsyrapärlorna och den flytande kontakten.
Och överdrivna magnetiska pärlor kommer också att adsorbera fler föroreningar , vilket har ett stort inflytande på effekten av att ta bort föroreningar. Det finns till och med tillfällen då för många magnetiska pärlor kommer att adsorbera proteas, lysozym och andra funktionella komponenter som spelar en viktig roll i vätskesystemet, vilket leder till ineffektiviteten i hela kit. Det finns många gånger när extraktionseffekten är dålig, minska mängden magnetiska pärlor som används, men är det optimala sättet att förbättra extraktionseffekten.
Vanligtvis är referenspärldoseringen som ges av Magnetic Bead -metodkitet något överdrivet , så det finns inte många fall där pärldoseringen måste ökas för att förbättra adsorptionseffektiviteten. Om det fastställs att extraktionseffekten är dålig på grund av otillräcklig pärldos, är det möjligt att förbättra extraktionseffekten genom att öka pärldosen inom ett visst intervall.
02 Missuppfattning 2: Ju fler reagens som används, desto bättre är extraktionseffekten.
Lyseffekten är inte bra? Lägg till mer lyslösning. Tvätteffekten är inte bra? Lägg till mer tvättlösning. Detta är det vanliga tänkandet för många kunder i användningen av reagenssatser.
För den magnetiska pärlmetoden minskar emellertid varje ökning av vätskans volym risken för kollision av magnetpärlorna , och minskningen av risken för kollision av magnetpärlorna kommer att leda till en betydande minskning av adsorptionshastigheten. So very often, although the increase in lysis solution and washing solution can indeed play a role in enhancing the role of lysis and washing, but the core of the magnetic bead method of extraction is the efficiency of the magnetic beads adsorption of nucleic acids, can not guarantee the efficiency of the magnetic beads collision efficiency can not guarantee the efficiency of nucleic acid extraction, so the simple increase in the use of reagents to improve the extraction effect is Inte nödvändigtvis helt effektivt.
03 Missuppfattning 3: Ju fler gånger du tvättar, desto bättre är extraktionseffekten.
När den extraherade nukleinsyran har för många föroreningar kommer användaren att överväga att tvätta fler gånger för att få mer ren nukleinsyra. Att öka antalet tvättar är verkligen gynnsamt för rening av nukleinsyror, men med hänsyn till att varje tvätt kommer att förlora en viss mängd nukleinsyror och öka möjligheten till hydrolys av nukleinsyrfraktur, så generellt kontrolleras antalet tvättar i 2 ~ 4 gånger är lämpligt.
04 Missuppfattning 4: Ju fler prover som tas, desto bättre är extraktionseffekten
När det gäller provet är inte tillräckligt färskt eller själva nukleinsyrainnehållet är mycket litet, ofta är nukleinsyraktraktionseffekten inte bra, många lärare kommer att använda fler prover för att öka mängden nukleinsyraktraktion.
Men helt enkelt att öka mängden prov som tagits kommer ibland att introducera för många föroreningar utöver lysatets förmåga att lysa och kommer också att minska extraktionseffektiviteten, så det rekommenderas inte att uppnå målet att öka extraktionsmängden genom att helt enkelt öka mängden provtagna.
Om extraktionsvolymen verkligen är för låg på grund av otillräcklig provvolym, rekommenderas det att gå igenom ett anrikning eller koncentrationssteg i förbehandlingen innan extraktionen startas. Eller att öka fullständigheten av lysen för att exponera fler nukleinsyror är också en lösning.
05 Missuppfattning 5: Om en typ av pärla är bra, bör den fungera bra i alla experiment
Det finns olika typer av magnetiska pärlor, olika partikelstorlek, olika dispersibilitet, olika magnetiska responstid, olika inkapslingsbasmatris, olika yttre skiktmodifieringsfunktionsgrupper, olika kapslingstäthet, olika funktionella grupparmlängder, vilket kommer att leda till ett brett spektrum av magnetiska pärlegenskaper.
Därför anpassas olika magnetiska pärlor till olika experiment och system. Precis som samma reagens för extraktion av nukleinsyra är inte exakt samma formel, är samma magnetiska pärlor som appliceras på nukleinsyraktraktion inte exakt samma i naturen.
Vissa magnetiska pärlor visar högre adsorptionseffektivitet vid extraktion av makronukleinsyra, medan andra är mer lämpade för spårnings nukleinsyraktraktion. Vissa magnetiska pärlor är lämpliga för sura serier av reagenssystem, och vissa magnetiska pärlor är lämpliga för alkaliska serier av reagenssystem. Vissa magnetiska pärlor har ett bra magnetiskt svar men snabb sedimenteringshastighet, vilket är mer lämpligt för automatisk extrakt av magnetisk stång; Vissa magnetiska pärlor har långsam sedimenteringshastighet men lång magnetisk responstid, vilket är mer lämpligt för automatisk extrakt av pipettyp.
Sällan kan en magnetpärlor vara lämpliga för alla experiment, utöver det fasta satsen med i de flesta fall måste magnetiska pärlor och reagenssystem göra en viss tid med justeringen.
06 MISSECONEPTION6: Jämförelse med ett visst kit är inte bra, det vill säga magnetpärlorna är inte bra.
Många kunder i processen att screena magnetiska pärlor i det redan mogna reagenssystemet, helt enkelt lika stor mängd ersättning av magnetiska pärlor, som används för att jämföra effekten av magnetiska pärlor.
Detta kommer lätt att dra slutsatsen att en viss magnetisk pärla inte är effektiv, men i själva verket, på grund av de olika magnetiska pärlorna som är lämpliga för olika system och dosering är olika, måste ofta justeras för att få bättre extraktionsresultat.
