01 Idée fausse 1 : plus il y a de billes magnétiques, meilleur est l'effet d'extraction.
De nombreux enseignants ont tendance à augmenter la quantité de billes magnétiques lorsque l’effet d’extraction n’est pas bon, pensant que davantage de billes magnétiques seront capables d’absorber plus d’acides nucléiques. Il faut cependant reconnaître que cette idée n’est pas souhaitable.
La principale caractéristique des billes magnétiques est qu'elles peuvent être à la fois dispersées dans un liquide et séparées de la phase liquide de manière solide sous l'action d'un champ magnétique appliqué. Tout système de réactifs, le rapport billes magnétiques/liquide doit être un certain seuil. Au-delà d'un certain rapport, trop de billes magnétiques ne pourront pas se disperser uniformément dans le liquide en raison de la perte de ses propriétés de dispersion, mais le processus de lavage ne peut pas être suffisant pour augmenter l'efficacité des billes d'acide nucléique et du contact liquide.
Et des billes magnétiques excessives adsorberont également plus d'impuretés , ce qui a une grande influence sur l'effet d'élimination des impuretés. Il arrive même que trop de billes magnétiques adsorbent la protéase, le lysozyme et d’autres composants fonctionnels qui jouent un rôle majeur dans le système liquide, conduisant à l’inefficacité de l’ensemble du kit. Il arrive souvent que l'effet d'extraction soit médiocre, réduisez la quantité de billes magnétiques utilisées, mais c'est le moyen optimal d'améliorer l'effet d'extraction.
Habituellement, le dosage de billes de référence donné par le kit de méthode de billes magnétiques est légèrement excessif , il n'y a donc pas beaucoup de cas où le dosage de billes doit être augmenté pour améliorer l'efficacité de l'adsorption. Cependant, s'il est déterminé que l'effet d'extraction est médiocre en raison d'un dosage de billes insuffisant, il est possible d'améliorer l'effet d'extraction en augmentant le dosage de billes dans une certaine plage.
02 Idée fausse 2 : plus on utilise de réactifs, meilleur est l'effet d'extraction.
L'effet de lyse n'est pas bon ? Ajoutez plus de solution de lyse. L'effet lavant n'est pas bon ? Ajoutez plus de solution de lavage. C'est la pensée habituelle de nombreux clients lors de l'utilisation de kits de réactifs.
Cependant, pour la méthode des billes magnétiques, chaque augmentation du volume du liquide réduit le risque de collision des billes magnétiques , et la réduction du risque de collision des billes magnétiques entraînera une diminution significative du taux d'adsorption. Ainsi, très souvent, bien que l'augmentation de la solution de lyse et de la solution de lavage puisse en effet jouer un rôle dans l'amélioration du rôle de lyse et de lavage, mais le cœur de la méthode d'extraction par billes magnétiques est l'efficacité de l'adsorption des acides nucléiques par billes magnétiques, ne peut pas garantir l'efficacité de l'efficacité de collision des billes magnétiques ne peut pas garantir l'efficacité de l'extraction des acides nucléiques, de sorte que la simple augmentation de l'utilisation de réactifs pour améliorer l'effet d'extraction n'est pas nécessairement complètement efficace.
03 Idée fausse 3 : Plus vous vous lavez plusieurs fois, meilleur est l'effet d'extraction.
Lorsque l’acide nucléique extrait contient trop d’impuretés, l’utilisateur envisagera de le laver plusieurs fois pour obtenir un acide nucléique plus pur. L'augmentation du nombre de lavages est en effet propice à la purification des acides nucléiques, mais étant donné que chaque lavage perdra une certaine quantité d'acides nucléiques et augmentera la possibilité d'hydrolyse de la fracture de l'acide nucléique, donc d'une manière générale, le nombre de lavages est contrôlé dans les 2 à 4 fois est approprié.
04 Idée fausse 4 : plus il y a d’échantillons prélevés, meilleur est l’effet d’extraction
Dans le cas où l'échantillon n'est pas assez frais ou si la teneur en acide nucléique elle-même est très faible, souvent l'effet d'extraction de l'acide nucléique n'est pas bon, de nombreux enseignants utiliseront davantage d'échantillons pour augmenter la quantité d'extraction d'acide nucléique.
Cependant, le simple fait d'augmenter la quantité d'échantillon prélevé introduira parfois trop d'impuretés au-delà de la capacité de lyse du lysat, et réduira également l'efficacité de l'extraction. Il n'est donc pas recommandé d'atteindre l'objectif d'augmenter la quantité d'extraction en augmentant simplement la quantité d'échantillon prélevé.
Si le volume d'extraction est effectivement trop faible en raison d'un volume d'échantillon insuffisant, il est recommandé de passer par une étape d'enrichissement ou de concentration lors du prétraitement avant de commencer l'extraction. Ou augmenter l’intégralité de la lyse pour exposer davantage d’acides nucléiques est également une solution.
05 Idée fausse n°5 : si un type de perle est bon, il devrait bien fonctionner dans toutes les expériences
Il existe différents types de billes magnétiques, différentes tailles de particules, différentes dispersibilités, différents temps de réponse magnétique, différentes matrices de base d'encapsulation, différents groupes fonctionnels de modification de la couche externe, différentes densités d'encapsulation, différentes longueurs de bras de groupes fonctionnels, ce qui conduira à un large éventail de caractéristiques de billes magnétiques.
Par conséquent, différentes billes magnétiques sont adaptées à différentes expériences et systèmes. Tout comme les mêmes réactifs pour l’extraction des acides nucléiques n’ont pas exactement la même formule, les mêmes billes magnétiques appliquées à l’extraction des acides nucléiques ne sont pas exactement de la même nature.
Certaines billes magnétiques présentent une efficacité d'adsorption plus élevée dans l'extraction des acides macronucléiques, tandis que d'autres sont plus adaptées à l'extraction des traces d'acides nucléiques. Certaines billes magnétiques conviennent aux séries acides de systèmes de réactifs, et certaines billes magnétiques conviennent aux séries alcalines de systèmes de réactifs. Certaines billes magnétiques ont une bonne réponse magnétique mais une vitesse de sédimentation rapide, ce qui convient mieux aux extracteurs automatiques de type tige magnétique ; Certaines billes magnétiques ont une vitesse de sédimentation lente mais un temps de réponse magnétique long, ce qui convient mieux aux extracteurs automatiques de type pipette.
Rarement, des billes magnétiques peuvent convenir à toutes les expériences, en plus du kit fixe avec, dans la plupart des cas, des billes magnétiques et des systèmes de réactifs qui doivent consacrer un certain temps à l'ajustement.
06 Idée fausse6 : la comparaison avec un certain kit n'est pas bonne, c'est-à-dire que les perles magnétiques ne sont pas bonnes.
De nombreux clients en train de cribler les billes magnétiques dans le système de réactifs déjà mature, remplacent simplement une quantité égale de billes magnétiques, utilisées pour comparer l'effet des billes magnétiques.
Cela permettra facilement de conclure qu'une certaine bille magnétique n'est pas efficace, mais en fait, en raison des différentes billes magnétiques adaptées aux différents systèmes et que le dosage est différent, il faut souvent l'ajuster afin d'obtenir de meilleurs résultats d'extraction.
