01 Idée fausse 1: Plus les billes plus magnétiques, meilleures sont l'effet d'extraction.
De nombreux enseignants ont tendance à augmenter la quantité de billes magnétiques lorsque l'effet d'extraction n'est pas bon, pensant que des billes plus magnétiques pourront absorber plus d'acides nucléiques. Cependant, il faut dire que cette idée n'est pas souhaitable.
The main feature of magnetic beads is that they can be both dispersed in liquid and separated from the liquid phase in a solid manner under the action of an applied magnetic field, any reagent system, the ratio of magnetic beads and liquid should be a certain threshold , over a certain ratio, too many magnetic beads will not be able to evenly dispersed in the liquid because of the loss of its dispersion properties, but also make the washing process can not être suffisant pour augmenter l'efficacité des billes d'acide nucléique et le contact liquide.
Et des billes magnétiques excessives adsorberont également plus d'impuretés , ce qui a une grande influence sur l'effet de l'élimination des impuretés. Il y a même des moments où trop de billes magnétiques adsorberont la protéase, le lysozyme et d'autres composants fonctionnels qui jouent un rôle majeur dans le système liquide, conduisant à l'inefficacité de l'ensemble du kit. Il y a plusieurs fois où l'effet d'extraction est pauvre, réduit la quantité de billes magnétiques utilisées, mais est le moyen optimal d'améliorer l'effet d'extraction.
Habituellement, la dose de perle de référence donnée par le kit de méthode de perle magnétique est légèrement excessive , il n'y a donc pas beaucoup de cas où la dose de perle doit être augmentée pour améliorer l'efficacité d'adsorption. Cependant, s'il est déterminé que l'effet d'extraction est mauvais en raison d'une dose de billes insuffisante, il est possible d'améliorer l'effet d'extraction en augmentant la dose de perle dans une certaine plage.
02 Idée fausse 2: Plus il y a de réactifs utilisés, meilleur est l'effet d'extraction.
L'effet de lyse n'est pas bon? Ajoutez plus de solution de lyse. L'effet de lavage n'est pas bon? Ajoutez plus de solution de lavage. C'est la pensée habituelle de nombreux clients dans l'utilisation de kits de réactifs.
Cependant, pour la méthode des billes magnétiques, chaque augmentation du volume du liquide réduit le risque de collision des billes magnétiques , et la réduction du risque de collision des billes magnétiques entraînera une diminution significative du taux d'adsorption. Donc, très souvent, bien que l'augmentation de la solution de lyse et de la solution de lavage puisse en effet jouer un rôle dans l'amélioration du rôle de la lyse et du lavage, mais le cœur de la méthode d'extraction des billes magnétiques est l'efficacité de l'adsorption des billes magnétiques nécessairement complètement efficace.
03 Idée fausse 3: Plus vous lavez, plus vous vous lavez, meilleur est l'effet d'extraction.
Lorsque l'acide nucléique extrait a trop d'impuretés, l'utilisateur envisagera de se laver plus de fois pour obtenir plus d'acide nucléique pur. L'augmentation du nombre de lavages est en effet propice à la purification des acides nucléiques, mais en tenant compte que chaque lavage perdra une certaine quantité d'acides nucléiques, et augmentera la possibilité d'hydrolyse de la fracture d'acide nucléique, donc d'une manière générale, le nombre de lavages est contrôlé dans le 2 ~ 4 fois est approprié.
04 Idée fausse 4: Plus il y a d'échantillons prélevés, meilleur est l'effet d'extraction
Dans le cas de l'échantillon n'est pas assez frais ou la teneur en acide nucléique elle-même est très petite, souvent l'effet d'extraction d'acide nucléique n'est pas bon, de nombreux enseignants utiliseront plus d'échantillons pour augmenter la quantité d'extraction d'acide nucléique.
Cependant, le simple fait d'augmenter la quantité d'échantillon prélevé introduira parfois trop d'impuretés au-delà de la capacité du lysat à lyser, et réduira également l'efficacité d'extraction, il n'est donc pas recommandé d'atteindre l'objectif d'augmenter la quantité d'extraction en augmentant simplement la quantité d'échantillon prélevé.
Si le volume d'extraction est en effet trop faible en raison du volume d'échantillon insuffisant, il est recommandé de passer par une étape d'enrichissement ou de concentration dans le prétraitement avant de commencer l'extraction. Ou l'augmentation de l'exhaustivité de la lyse pour exposer plus d'acides nucléiques est également une solution.
05 Idée à fautes 5: Si un type de perle est bon, cela devrait bien fonctionner dans toutes les expériences
Il existe différents types de billes magnétiques, une taille de particules différentes, une dispersibilité différente, un temps de réponse magnétique différent, une matrice de base d'encapsulation différente, différents groupes fonctionnels de modification de la couche externe, une densité d'encapsulation différente, différentes longueurs de bras de groupe fonctionnel, ce qui conduira à une large gamme de caractéristiques de billes magnétiques.
Par conséquent, différentes billes magnétiques sont adaptées à différentes expériences et systèmes. Tout comme les mêmes réactifs pour l'extraction d'acide nucléique ne sont pas exactement la même formule, les mêmes billes magnétiques appliquées à l'extraction d'acide nucléique ne sont pas exactement les mêmes dans la nature.
Certaines billes magnétiques présentent une efficacité d'adsorption plus élevée dans l'extraction de l'acide macronucléique, tandis que d'autres conviennent plus à l'extraction d'acide nucléique trace. Certaines perles magnétiques conviennent aux séries acides de systèmes de réactifs, et certaines billes magnétiques conviennent aux séries alcalines de systèmes de réactifs. Certaines perles magnétiques ont une bonne réponse magnétique mais une vitesse de décantation rapide, qui convient plus à l'extracteur automatique de type de tige magnétique; Certaines perles magnétiques ont une vitesse de décantation lente mais un long temps de réponse magnétique, qui convient plus à l'extracteur automatique de type pipette.
Rarement une bille magnétique peut convenir à toutes les expériences, en plus du kit fixe avec, dans la plupart des cas, des billes magnétiques et des systèmes de réactifs doivent faire un certain temps avec l'ajustement.
06 Dison conception6: La comparaison avec un certain kit n'est pas bonne, c'est-à-dire que les perles magnétiques ne sont pas bonnes.
De nombreux clients dans le processus de dépistage des billes magnétiques dans le système de réactif déjà mature, tout simplement une quantité égale de remplacement des perles magnétiques, utilisé pour comparer l'effet des billes magnétiques.
Cela conclura facilement qu'une certaine perle magnétique n'est pas efficace, mais en fait, en raison des différentes billes magnétiques adaptées à différents systèmes et la posologie est différente, doit souvent être ajustée afin d'obtenir de meilleurs résultats d'extraction.
