كيفية منع التلوث في ثقافة الخلية؟

تقدم هذه المقالة بشكل رئيسي الأنواع الشائعة من تلوث الخلايا.

منطقة العمل:

1. هل تم إعداد غطاء التهوية لثقافة الخلية بشكل صحيح؟

2. هل هناك أي تدفقات هواء أو قنوات دخول مباشرة في المنطقة التي يوجد بها غطاء تهوية ثقافة الخلية؟

3. هل طاولة العمل نظيفة؟

4. هل تم وضع العناصر المطلوبة للتجربة فقط على طاولة العمل؟

5. 
   

6. هل قمت بمسح طاولة العمل باستخدام 70% من الإيثانول قبل بدء العمل؟

7. هل تقوم بتنظيف وتطهير الحاضنة والثلاجة والفريزر ومعدات المختبرات الأخرى بانتظام؟

النظافة الشخصية:

1. هل غسلت يديك؟

2. هل ارتديت معدات الحماية الشخصية؟

3. إذا كان شعرك طويل هل هو مربوط للخلف؟

4. هل تستخدم ماصة للتعامل مع السوائل؟

5. الكواشف ووسائل الإعلام الثقافة

6. هل قمت بتعقيم جميع الكواشف والوسائط والمحاليل المحضرة في المختبر باستخدام الطرق المناسبة؟

7. قبل وضع الحاويات، وزجاجات الاستزراع، وألواح الاستزراع، وأطباق الاستزراع على سطح العمل، هل قمت بمسح الأجزاء الخارجية منها باستخدام 70% من الإيثانول؟

8. هل قمت بتشديد أغطية زجاجات الكواشف وزجاجات الثقافة والحاويات الأخرى عندما لا تكون قيد الاستخدام؟

9. هل تم وضع جميع أطباق الاستنبات في أكياس معقمة محكمة الغلق؟

10. هل هناك أي علامات للتلوث في الكواشف مثل التغيم أو الجزيئات العائمة أو الروائح الكريهة أو الألوان غير الطبيعية؟ إذا كان الأمر كذلك، هل قمت بتنظيفها أو التخلص منها؟

عملية:

1. هل تعمل ببطء وحذر وتهتم بالتقنيات المعقمة؟

2. هل قمت بمسح أسطح الماصات وزجاجات الكواشف وزجاجات الثقافة باستخدام 70% من الإيثانول قبل وضعها في غطاء تهوية ثقافة الخلية؟

3. هل وضعت الأغطية متجهة للأسفل في منطقة العمل؟

4. هل تستخدم ماصات زجاجية معقمة أو ماصات بلاستيكية معقمة يمكن التخلص منها للتعامل مع السوائل؟

5. هل تستخدم الماصات المعقمة مرة واحدة فقط لتجنب التلوث المتبادل؟

6. هل تجنبت ملامسة طرف الماصة لأي مواد غير معقمة، بما في ذلك الحافة الخارجية لخيوط عنق الزجاجة؟

7. في حالة حدوث انسكابات سائلة، هل امتصتها على الفور ومسحت المنطقة باستخدام 70% من الإيثانول؟

تجدر الإشارة إلى أنه من السهل التغاضي عن وضع الأغراض وترتيبها على المقعد فائق النظافة، بالإضافة إلى النظافة الشخصية مثل الشعر الطويل. يمكن أن يتسبب وجود الكثير من العناصر الموجودة على المقعد فائق النظافة في حدوث تداخل في تدفق الهواء وضغط الهواء، لذا يجب على الجميع الانتباه.

'اعرف نفسك وعدوك، ولن تهزم أبداً في مائة معركة'. ومن خلال معرفة كيفية منع التلوث، نحتاج أيضاً إلى معرفة كيفية التعرف عليه. بعد كل شيء، يجب التخلص من الخلايا الملوثة على الفور، وإلا، إذا قامت الملوثات بجمع كل الأحجار الكريمة، فسيكون...

ينقسم تلوث زراعة الخلايا بشكل أساسي إلى فئتين: الملوثات الكيميائية، مثل الشوائب في وسط الثقافة، والمصل، والماء، والسموم الداخلية، والملدنات، والمنظفات؛ والملوثات البيولوجية، مثل البكتيريا والفطريات والخميرة والفيروسات والميكوبلازما، والتلوث المتبادل لخطوط الخلايا الأخرى.

التلوث البكتيري:

تأتي البكتيريا في أشكال مختلفة، مثل الشكل الكروي، والقضيبي، والحلزوني. تشكل البكتيريا والفطريات معًا الملوثات البيولوجية الأكثر شيوعًا في زراعة الخلايا. عندما تكون الخلايا ملوثة بالبكتيريا، غالبًا ما يمكن اكتشافها خلال يوم أو يومين عن طريق الملاحظة البسيطة بالعين المجردة، وقد تنخفض قيمة الرقم الهيدروجيني للوسط المزروع فجأة. توضح الصورة أدناه 293 خلية ملوثة بالإشريكية القولونية وتنمو كخلايا ملتصقة.

التلوث الفطري:

في المرحلة الأولية من التلوث الفطري، يظل الرقم الهيدروجيني للوسط المزروع مستقرًا، ولكن مع تفاقم التلوث، يزداد الرقم الهيدروجيني بسرعة، مما يتسبب في أن يصبح الوسط عكرًا. تحت المجهر، غالبًا ما تظهر الخيوط الفطرية كحزم رفيعة، وأحيانًا كمجموعات كثيفة من الجراثيم. يمكن للجراثيم أن تتحمل البيئات القاسية وغير المواتية للغاية أثناء السكون. لذلك، عند حدوث تلوث فطري، من الضروري التخلص من الخلايا على الفور لمنع التلوث على نطاق واسع في الحاضنة.

تلوث الخميرة:

على غرار التلوث البكتيري، يصبح وسط الاستزراع عكرًا عندما يكون ملوثًا بالخميرة، خاصة أثناء التلوث في مرحلة متأخرة. يتغير الرقم الهيدروجيني للوسط الاستزراعي بشكل طفيف جدًا بعد التلوث بالخميرة، ولا يزيد إلا عندما يكون التلوث شديدًا. تظهر الخميرة تحت المجهر كجزيئات فردية بيضاوية أو كروية، وقد يتبرعم بعضها في الخلايا الوليدة. الصورة أدناه توضح 293 خلية ملوثة بالخميرة.

التلوث الفيروسي:

تتميز الفيروسات بأحجام صغيرة للغاية، مما يجعل من الصعب اكتشافها وإزالتها من الكواشف المستخدمة في زراعة الخلايا. نظرًا لأن معظم الفيروسات لديها متطلبات صارمة جدًا لمضيفيها، فليس لها عمومًا آثار ضارة على مزارع الخلايا من الأنواع المضيفة غير تلك الخاصة بها. ومع ذلك، فإن استخدام مزارع الخلايا المصابة بالفيروسات يمكن أن يشكل تهديدات صحية خطيرة لمشغلي التجارب.

التلوث بالميكوبلازما:

تعتبر الميكوبلازما أصغر كائن حي يتكاثر ذاتياً. نظرًا لحجمها الصغير للغاية، فإن اكتشاف الميكوبلازما أمر صعب للغاية، وغالبًا لا توجد علامات واضحة للعدوى إلا إذا كانت الكثافة عالية جدًا. يمكن لبعض الميكوبلازما أن تستمر في مزارع الخلايا دون التسبب في موت الخلايا، لكنها يمكن أن تغير سلوك الخلايا واستقلابها في نظام الزرع. تشمل المظاهر المحتملة لعدوى الميكوبلازما المزمنة انخفاضًا في معدل تكاثر الخلايا، وانخفاض الكثافة النووية، وتجمع الخلايا في مزرعة التعليق. الطرق الأكثر فعالية للكشف عن تلوث الميكوبلازما هي تلطيخ الفلورة، ELISA، PCR، المناعية، التطوير الذاتي الشعاعي، أو تقنيات التحديد الميكروبيولوجية لاختبار الثقافة بشكل دوري.

التلوث المتبادل:

على الرغم من أنه ليس شائعًا مثل التلوث الميكروبي، إلا أن التلوث المتبادل على نطاق واسع بين العديد من خطوط الخلايا وخطوط الخلايا سريعة النمو مثل خلايا هيلا يمثل مشكلة واضحة. يعد الحصول على خطوط الخلايا من بنوك الخلايا ذات السمعة الطيبة، والتحقق بانتظام من خصائص خطوط الخلايا، واستخدام تقنيات معقمة جيدة من الطرق التقليدية للمساعدة في تجنب التلوث المتبادل.

استخدام المضادات الحيوية:

لا ينبغي استخدام المضادات الحيوية بشكل روتيني في زراعة الخلايا لأن الإفراط في استخدامها يمكن أن يعزز تطور سلالات مقاومة للمضادات الحيوية، مما يؤدي إلى تلوث مستمر منخفض المستوى. بمجرد إزالة المضادات الحيوية، يمكن أن يتطور هذا التلوث المنخفض المستوى في النهاية إلى تلوث واسع النطاق، ويمكن أن يؤدي الاستخدام المستمر للمضادات الحيوية أيضًا إلى إخفاء عدوى الميكوبلازما وأنواع التلوث الأخرى. لذلك، لا يمكن استخدام المضادات الحيوية إلا كملاذ أخير ضد التلوث ويجب استخدامها فقط لفترة قصيرة من الزمن، ويجب إزالتها في أسرع وقت ممكن.