Ako zabrániť kontaminácii v bunkovej kultúre?

Tento článok predstavuje hlavne bežné typy kontaminácie buniek.

Pracovný priestor:

1. Je ventilačná kapucňa pre bunkovú kultúru správne nastavená?

2. Existujú v oblasti, kde sa nachádza vetraná kapucňa bunkovej kultúry vetranie, ktoré sa nachádza?

3. Je pracovný stôl čistý?

4. Boli na pracovný stôl umiestnené iba položky potrebné pre experiment?

5. 
   

6. Pred začatím práce ste si utreli pracovný stôl so 70% etanolom?

7. Pravidelne čistíte a dezinfikujete inkubátor, chladničku, mrazničku a ďalšie laboratórne vybavenie?

Osobná hygiena:

1. Umyli ste si ruky?

2. Nosili ste osobné ochranné vybavenie?

3. Ak máte dlhé vlasy, je zviazané späť?

4. Používate pipetu na manipuláciu s tekutkami?

5. Reagencie a kultúrne médiá

6. Sterilizovali ste všetky reagenty, médiá a roztoky pripravené v laboratóriu pomocou vhodných metód?

7. Pred umiestnením kontajnerov, kultúrnych fliaš, kultúrnych dosiek a kultúrnych jedál na pracovnú plochu ste si utreli exteriéry 70% etanolom?

8. Pritiahli ste viečka fliaš na reagenciu, fľaše na kultúru a ďalšie nádoby, keď sa nepoužívajú?

9. Boli všetky kultivačné dosky umiestnené do sterilných, vzduchotesných tašiek?

10. Existujú nejaké známky kontaminácie v reagenciách, ako sú oblačnosť, plávajúce častice, nepríjemné pachy alebo abnormálne farby? Ak áno, vyčistili ste ich alebo vyhodili?

Prevádzka:

1. Pracujete pomaly, opatrne a venujete pozornosť aseptickým technikám?

2. Utreli ste povrchy pipety, fliaš na reagenciu a fľaše na kultúru so 70% etanolom pred ich umiestnením do vetracej kapoty bunkovej kultúry?

3. Položili ste viečka smerujúce nadol do pracovnej oblasti?

4. Používate sterilné sklenené pipety alebo jednorazové sterilné plastové pipety na manipuláciu s tekutkami?

5. Používate sterilné pipety iba raz, aby ste predišli krížovej kontaminácii?

6. Vyhli ste sa dotkli sa špičky pipety na akékoľvek nesterilné predmety vrátane vonkajšieho okraja závitov krku na fľaše?

7. Ak dôjde k úniku tekutín, okamžite ste ju absorbovali a utreli ste oblasť 70% etanolom?

Je potrebné poznamenať, že umiestnenie a usporiadanie predmetov na super čistej lavičke, ako aj osobná hygiena, ako sú dlhé vlasy, sa ľahko prehliadajú. Príliš veľa položiek na super čistej lavičke môže spôsobiť rušenie prietoku vzduchu a tlaku vzduchu, takže každý musí venovať pozornosť.

„Poznajte seba a svojho nepriateľa a nikdy nebudete porazení v stovkách bitiek.“ Vedieť, ako zabrániť kontaminácii, musíme tiež vedieť, ako ju identifikovať. Nakoniec, kontaminované bunky sa musia okamžite vyradiť, inak, ak kontaminanty zhromažďujú všetky drahokamy, bude to ...

Kontaminácia bunkovej kultúry je rozdelená hlavne do dvoch kategórií: chemické kontaminanty, ako sú nečistoty v kultivačnom médiu, sére a vode, endotoxínoch, plastifikátoroch a detergentoch; a biologické kontaminanty, ako sú baktérie, huby, kvasinky, vírusy, mykoplazma a krížová kontaminácia iných bunkových línií.

Bakteriálna kontaminácia:

Baktérie sa dodávajú v rôznych tvaroch, ako sú sférické, tyčové a špirálové tvary. Baktérie a huby spolu tvoria najčastejšie vyskytujúce sa biologické kontaminanty v bunkovej kultúre. Ak sú bunky kontaminované baktériami, môže sa často detegovať do jedného alebo dvoch dní jednoduchým pozorovaním voľným okom a hodnota pH kultivačného média sa môže náhle znížiť. Obrázok nižšie zobrazuje 293 buniek kontaminovaných E. coli a rastúce ako adherentné bunky.

Kontaminácia húb:

V počiatočnej fáze plesňovej kontaminácie zostáva pH kultivačného média stabilné, ale keď sa kontaminácia zhoršuje, pH sa rýchlo zvyšuje, čo spôsobuje, že médium je zakalené. Pod mikroskopom sa hýfy často javia ako tenké zväzky a niekedy ako husté zhluky spór. Spóry vydržia mimoriadne drsné a nepriaznivé prostredie počas dormancie. Preto, keď dôjde k kontaminácii hubov, je potrebné okamžite zlikvidovať bunky, aby sa zabránilo rozsiahlej kontaminácii v inkubátore.

Kvasinková kontaminácia:

Podobne ako pri bakteriálnej kontaminácii sa kultivačné médium zakalia, keď kontaminuje kvasinkami, najmä počas kontaminácie v neskorom štádiu. PH kultivačného média sa po kontaminácii kvasinkami mení veľmi málo a zvyšuje sa iba vtedy, keď je kontaminácia závažná. Pod mikroskopom sa kvasinky javia ako jednotlivé oválne alebo sférické častice, z ktorých niektoré sa môžu pútať do dcérskych buniek. Obrázok nižšie zobrazuje 293 buniek kontaminovaných kvasinkami.

Vírusová kontaminácia:

Vírusy majú extrémne malé veľkosti, čo sťažuje ich detekciu a ich odstránenie z reagentov používaných v bunkovej kultúre. Pretože väčšina vírusov má pre svojich hostiteľov veľmi prísne požiadavky, vo všeobecnosti nemajú nepriaznivé účinky na bunkové kultúry od iných hostiteľských druhov, ako sú ich vlastné. Použitie bunkových kultúr infikovaných vírusmi však môže predstavovať vážne zdravotné hrozby pre experimentálnych operátorov.

Kontaminácia mycoplasmy:

Mycoplasma sa považuje za najmenší samoreplikujúci organizmus. Vďaka svojej extrémne malej veľkosti je detekcia mykoplazmy veľmi náročná a často neexistujú zjavné príznaky infekcie, pokiaľ nie je hustota veľmi vysoká. Niektoré mykoplazmy môžu dokonca pretrvávať v bunkových kultúrach bez toho, aby spôsobili bunkovú smrť, ale môžu zmeniť správanie a metabolizmus buniek v kultivačnom systéme. Možné prejavy chronickej infekcie mykoplazmy zahŕňajú zníženie rýchlosti proliferácie buniek, zníženie jadrovej hustoty a agregáciu buniek v kultúre suspenzie. Najúčinnejšími metódami na detekciu kontaminácie mykoplazmy sú fluorescenčné farbenie, ELISA, PCR, imunofarbenie, rádiografický sebestačný vývoj alebo techniky mikrobiologického určovania na pravidelné testovanie kultúry.

Krížová kontaminácia:

Hoci to nie je tak bežná ako mikrobiálna kontaminácia, je jasným problémom rozšírená krížová kontaminácia medzi mnohými bunkovými líniami a rýchlo rastúcimi bunkovými líniami, ako sú HeLa bunky. Získanie bunkových línií od renomovaných bunkových bánk, pravidelná kontrola vlastností bunkových línií a použitie dobrých aseptických techník sú konvenčné metódy, ktoré pomôžu vyhnúť sa krížovej kontaminácii.

Použitie antibiotík:

Antibiotiká by sa nemali bežne používať v bunkovej kultúre, pretože ich nadmerné využitie môže podporovať vývoj kmeňov rezistentných na antibiotiká, čo vedie k pretrvávajúcej kontaminácii nízkej úrovne. Po odstránení antibiotík sa táto kontaminácia na nízkej úrovni môže nakoniec vyvinúť na rozsiahlu kontamináciu a pokračujúce používanie antibiotík môže tiež maskovať infekcie mykoplazmy a iné typy kontaminácie. Preto sa antibiotiká môžu používať iba ako posledná možnosť proti kontaminácii a mali by sa používať iba na krátku dobu a mali by sa odstrániť čo najskôr.