Como prevenir a contaminação em cultura celular?

Este artigo apresenta principalmente tipos comuns de contaminação celular.

Área de trabalho:

1. A coifa de ventilação para cultura de células está configurada corretamente?

2. Existem fluxos de ar ou canais de entrada direta na área onde a coifa de ventilação para cultura de células está localizada?

3. A bancada está limpa?

4. Apenas os itens necessários para o experimento foram colocados na bancada?

5. 
   

6. Você limpou a bancada com etanol 70% antes de iniciar o trabalho?

7. Você limpa e desinfeta regularmente a incubadora, a geladeira, o freezer e outros equipamentos do laboratório?

Higiene pessoal:

1. Você lavou as mãos?

2. Você usou equipamento de proteção individual?

3. Se você tem cabelo comprido, ele fica preso para trás?

4. Você está usando uma pipeta para manusear líquidos?

5. Reagentes e meios de cultura

6. Você esterilizou todos os reagentes, meios e soluções preparados no laboratório usando métodos apropriados?

7. Antes de colocar recipientes, frascos de cultura, placas de cultura e placas de cultura na superfície de trabalho, você limpou a parte externa com etanol 70%?

8. Você apertou as tampas dos frascos de reagentes, frascos de cultura e outros recipientes quando não estavam em uso?

9. Todas as placas de cultura foram colocadas em sacos estéreis e herméticos?

10. Existem sinais de contaminação nos reagentes, como turvação, partículas flutuantes, odores desagradáveis ​​ou cores anormais? Se sim, você os limpou ou descartou?

Operação:

1. Você está operando lentamente, com cuidado e prestando atenção às técnicas assépticas?

2. Você limpou as superfícies das pipetas, dos frascos de reagentes e dos frascos de cultura com etanol 70% antes de colocá-los na capela de ventilação para cultura de células?

3. Você colocou as tampas voltadas para baixo na área de trabalho?

4. Você está usando pipetas de vidro estéreis ou pipetas de plástico estéreis descartáveis ​​para manusear líquidos?

5. Você está usando pipetas estéreis apenas uma vez para evitar contaminação cruzada?

6. Você evitou tocar a ponta da pipeta em qualquer item não estéril, incluindo a borda externa das roscas do gargalo do frasco?

7. Se ocorrer derramamento de líquido, você o absorveu imediatamente e limpou a área com etanol 70%?

Ressalta-se que a colocação e disposição dos itens na bancada super limpa, bem como a higiene pessoal como cabelos longos, passam facilmente despercebidas. Muitos itens na bancada super limpa podem causar interferência no fluxo e na pressão do ar, por isso todos precisam prestar atenção.

“Conheça a si mesmo e ao seu inimigo e nunca será derrotado em cem batalhas.” Sabendo como prevenir a contaminação, também precisamos saber como identificá-la. Afinal, as células contaminadas precisam ser descartadas prontamente, caso contrário, se os contaminantes coletarem todas as gemas, será...

A contaminação da cultura celular é dividida principalmente em duas categorias: contaminantes químicos, como impurezas em meios de cultura, soro e água, endotoxinas, plastificantes e detergentes; e contaminantes biológicos, tais como bactérias, fungos, leveduras, vírus, micoplasmas e contaminação cruzada de outras linhas celulares.

Contaminação bacteriana:

As bactérias vêm em vários formatos, como esféricos, em forma de bastonete e em forma de espiral. Bactérias e fungos juntos constituem os contaminantes biológicos mais comumente encontrados na cultura de células. Quando as células estão contaminadas com bactérias, muitas vezes pode ser detectado dentro de um ou dois dias pela simples observação a olho nu, e o valor do pH do meio de cultura pode diminuir repentinamente. A imagem abaixo mostra células 293 contaminadas com E. coli e crescendo como células aderentes.

Contaminação fúngica:

Na fase inicial da contaminação fúngica, o pH do meio de cultura permanece estável, mas à medida que a contaminação piora, o pH aumenta rapidamente, fazendo com que o meio fique turvo. Sob o microscópio, as hifas geralmente aparecem como feixes finos e, às vezes, como densos aglomerados de esporos. Os esporos podem resistir a ambientes extremamente adversos e desfavoráveis ​​durante a dormência. Portanto, quando ocorre contaminação fúngica, é necessário descartar prontamente as células para evitar contaminação em larga escala na incubadora.

Contaminação por levedura:

Semelhante à contaminação bacteriana, o meio de cultura torna-se turvo quando contaminado com levedura, especialmente durante a contaminação em estágio avançado. O pH do meio de cultura muda muito pouco após a contaminação com levedura e só aumenta quando a contaminação é grave. Ao microscópio, a levedura aparece como partículas ovais ou esféricas individuais, algumas das quais podem brotar em células-filhas. A imagem abaixo mostra 293 células contaminadas com levedura.

Contaminação viral:

Os vírus possuem tamanhos extremamente pequenos, dificultando sua detecção e remoção dos reagentes utilizados na cultura celular. Como a maioria dos vírus tem requisitos muito rigorosos para os seus hospedeiros, geralmente não têm efeitos adversos nas culturas de células de espécies hospedeiras que não sejam as suas. No entanto, a utilização de culturas celulares infectadas com vírus pode representar sérias ameaças à saúde dos operadores experimentais.

Contaminação por micoplasma:

O Mycoplasma é considerado o menor organismo auto-replicante. Devido ao seu tamanho extremamente pequeno, a detecção do micoplasma é muito difícil e muitas vezes não há sinais óbvios de infecção, a menos que a densidade seja muito alta. Alguns micoplasmas podem até persistir em culturas celulares sem causar morte celular, mas podem alterar o comportamento e o metabolismo das células no sistema de cultura. As possíveis manifestações da infecção crônica por micoplasma incluem diminuição da taxa de proliferação celular, diminuição da densidade nuclear e agregação celular em cultura em suspensão. Os métodos mais eficazes para detectar a contaminação por micoplasma são coloração de fluorescência, ELISA, PCR, imunocoloração, autodesenvolvimento radiográfico ou técnicas de determinação microbiológica para testar periodicamente a cultura.

Contaminação cruzada:

Embora não seja tão comum como a contaminação microbiana, a contaminação cruzada generalizada entre muitas linhas celulares e linhas celulares de crescimento rápido, como as células HeLa, é um problema claro. A obtenção de linhas celulares de bancos de células respeitáveis, a verificação regular das propriedades das linhas celulares e a utilização de boas técnicas assépticas são métodos convencionais para ajudar a evitar a contaminação cruzada.

Uso de antibióticos:

Os antibióticos não devem ser usados ​​rotineiramente em cultura de células porque o seu uso excessivo pode promover o desenvolvimento de cepas resistentes aos antibióticos, levando a uma contaminação persistente de baixo nível. Uma vez removidos os antibióticos, esta contaminação de baixo nível pode eventualmente evoluir para contaminação em grande escala, e o uso continuado de antibióticos também pode mascarar infecções por micoplasma e outros tipos de contaminação. Portanto, os antibióticos só podem ser usados ​​como último recurso contra a contaminação e devem ser usados ​​apenas por um curto período de tempo, devendo ser retirados o mais rápido possível.