Como evitar a contaminação na cultura de células?

Este artigo apresenta principalmente tipos comuns de contaminação celular.

Área de trabalho:

1. O capô de ventilação da cultura de células está configurado corretamente?

2. Existem fluxos aéreos ou canais de entrada direta na área em que o capô de ventilação da cultura de células está localizado?

3. A bancada de trabalho está limpa?

4. Apenas os itens necessários para o experimento foram colocados na bancada?

5. 
   

6. Você limpou a bancada com 70% de etanol antes de começar a trabalhar?

7. Você limpa e desinfeta regularmente a incubadora, a geladeira, o freezer e outros equipamentos de laboratório?

Higiene pessoal:

1. Você lavou as mãos?

2. Você usou equipamentos de proteção pessoal?

3. Se você tem cabelos compridos, está amarrado?

4. Você está usando uma pipeta para lidar com líquidos?

5. Reagentes e mídia de cultura

6. Você esterilizou todos os reagentes, mídia e soluções preparadas em laboratório usando métodos apropriados?

7. Antes de colocar recipientes, garrafas de cultura, placas de cultura e pratos de cultura na superfície do trabalho, você limpou seus exteriores com etanol a 70%?

8. Você apertou as tampas de garrafas de reagente, garrafas de cultura e outros contêineres quando não estão em uso?

9. Todas as placas de cultura foram colocadas em sacos estéreis e herméticos?

10. Existem sinais de contaminação nos reagentes, como nebulosidade, partículas flutuantes, odores desagradáveis ​​ou cores anormais? Se sim, você os limpou ou descartou?

Operação:

1. Você está operando devagar, cuidadosamente e prestando atenção às técnicas assépticas?

2. Você limpou as superfícies de pipetas, garrafas de reagente e garrafas de cultura com etanol a 70% antes de colocá -las no capô de ventilação da cultura de células?

3. Você colocou as tampas voltadas para baixo na área de trabalho?

4. Você está usando pipetas de vidro estéril ou pipetas de plástico estéril descartáveis ​​para lidar com líquidos?

5. Você está usando pipetas estéreis apenas uma vez para evitar a contaminação cruzada?

6. Você evitou tocar a ponta da pipeta para itens não estéril, incluindo a borda externa dos fios do pescoço de garrafa?

7. Se ocorrerem derramamentos de líquidos, você o absorveu imediatamente e limpou a área com etanol a 70%?

Deve -se notar que o posicionamento e o arranjo dos itens no banco super limpo, bem como a higiene pessoal, como cabelos longos, são facilmente negligenciados. Muitos itens no banco super limpo podem causar interferência no fluxo de ar e pressão do ar, para que todos precisem prestar atenção.

'Conheça a si mesmo e ao seu inimigo, e você nunca será derrotado em cem batalhas.' Sabendo como impedir a contaminação, também precisamos saber como identificá -lo. Afinal, as células contaminadas precisam ser descartadas prontamente, caso contrário, se os contaminantes coletarem todas as jóias, será ... será ...

A contaminação da cultura de células é dividida principalmente em duas categorias: contaminantes químicos, como impurezas nos meios de cultura, soro e água, endotoxinas, plastificantes e detergentes; e contaminantes biológicos, como bactérias, fungos, leveduras, vírus, micoplasma e contaminação cruzada de outras linhas celulares.

Contaminação bacteriana:

As bactérias vêm em várias formas, como esféricas, em forma de vara e em forma de espiral. Bactérias e fungos juntos compõem os contaminantes biológicos mais comumente encontrados na cultura de células. Quando as células são contaminadas com bactérias, muitas vezes podem ser detectadas dentro de um ou dois dias por observação simples a olho nu, e o valor de pH do meio de cultura pode diminuir repentinamente. A imagem abaixo mostra 293 células contaminadas com E. coli e crescendo como células aderentes.

Contaminação de Fúngicos:

Na fase inicial da contaminação fúngica, o pH do meio de cultura permanece estável, mas à medida que a contaminação piora, o pH aumenta rapidamente, fazendo com que o meio se torne turva. Sob o microscópio, as hifas geralmente aparecem como feixes finos e, às vezes, como densos aglomerados de esporos. Os esporos podem suportar ambientes extremamente severos e desfavoráveis ​​durante a dormência. Portanto, quando ocorre a contaminação dos fungos, é necessário descartar imediatamente as células para impedir a contaminação em larga escala na incubadora.

Contaminação de leveduras:

Semelhante à contaminação bacteriana, o meio de cultura se torna turva quando contaminado com o fermento, especialmente durante a contaminação em estágio tardio. O pH do meio de cultura muda muito pouco após a contaminação com o fermento e só aumenta quando a contaminação é grave. Sob o microscópio, o fermento aparece como partículas ovais ou esféricas individuais, algumas das quais podem se brotar nas células filhas. A imagem abaixo mostra 293 células contaminadas com leveduras.

Contaminação viral:

Os vírus têm tamanhos extremamente pequenos, dificultando a detecção e a remoção dos reagentes usados ​​na cultura de células. Como a maioria dos vírus tem requisitos muito rígidos para seus anfitriões, eles geralmente não têm efeitos adversos nas culturas de células de espécies anfitriões que não sejam as suas. No entanto, o uso de culturas celulares infectadas com vírus pode representar sérias ameaças à saúde para operadores experimentais.

Contaminação por Mycoplasma:

O micoplasma é considerado o menor organismo auto-replicante. Devido ao seu tamanho extremamente pequeno, a detecção de micoplasma é muito difícil e geralmente não há sinais óbvios de infecção, a menos que a densidade seja muito alta. Alguns micoplasma podem até persistir nas culturas celulares sem causar morte celular, mas podem alterar o comportamento e o metabolismo das células no sistema de cultura. As possíveis manifestações de infecção crônica por micoplasma incluem uma diminuição na taxa de proliferação celular, uma diminuição na densidade nuclear e agregação celular na cultura da suspensão. Os métodos mais eficazes para detectar a contaminação por micoplasma são a coloração de fluorescência, ELISA, PCR, imunocoloração, autodesenvolvimento radiográfico ou técnicas de determinação microbiológica para testar periodicamente a cultura.

Contaminação cruzada:

Embora não seja tão comum quanto a contaminação microbiana, a contaminação cruzada generalizada entre muitas linhas celulares e linhas celulares de crescimento rápido, como as células HeLa, é um problema claro. A obtenção de linhas celulares de bancos celulares respeitáveis, verificando regularmente as propriedades das linhas celulares e usando boas técnicas assépticas são métodos convencionais para ajudar a evitar a contaminação cruzada.

Uso de antibióticos:

Os antibióticos não devem ser usados ​​rotineiramente na cultura de células, porque seu uso excessivo pode promover o desenvolvimento de cepas resistentes a antibióticos, levando a uma contaminação persistente de baixo nível. Depois que os antibióticos são removidos, essa contaminação de baixo nível pode eventualmente se transformar em contaminação em larga escala, e o uso contínuo de antibióticos também pode mascarar infecções por micoplasma e outros tipos de contaminação. Portanto, os antibióticos só podem ser usados ​​como último recurso contra a contaminação e devem ser usados ​​apenas por um curto período de tempo e devem ser removidos o mais rápido possível.