ビュー: 0 著者: サイト編集者 公開時間: 2023-07-04 起源: サイト
この記事では主に一般的な細胞汚染の種類を紹介します。
作業エリア:
細胞培養用の換気フードは正しく設置されていますか?
細胞培養換気フードが配置されているエリアに空気の流れや直接の入口チャネルはありますか?
作業台はきれいですか？
作業台には実験に必要なものだけが置かれていますか？
作業前に作業台を70％エタノールで拭きましたか？
インキュベーター、冷蔵庫、冷凍庫、その他の実験器具を定期的に洗浄および消毒していますか?
個人の衛生状態:
手を洗いましたか？
個人用保護具を着用しましたか?
髪が長い場合は後ろで束ねていますか？
液体を扱うのにピペットを使用していますか?
試薬と培地
研究室で調製したすべての試薬、培地、溶液を適切な方法で滅菌しましたか?
容器、培養ボトル、培養プレート、培養皿を作業面に置く前に、70%エタノールで外側を拭きましたか?
試薬ボトルや培養ボトルなどの容器を使用しないときは、蓋をしっかり締めていませんか?
すべての培養プレートは滅菌された気密バッグに入れられていますか?
試薬に濁り、浮遊物、異臭、色の異常などの異物混入の兆候はありませんか？もしそうなら、掃除したり廃棄したりしましたか?
手術：
ゆっくりと慎重に、無菌技術に注意を払って操作していますか?
細胞培養換気フードに入れる前に、ピペット、試薬ボトル、培養ボトルの表面を 70% エタノールで拭きましたか?
作業場所に蓋を下向きに置きましたか?
液体を扱うために滅菌ガラスピペットまたは使い捨ての滅菌プラスチックピペットを使用していますか?
二次汚染を避けるために滅菌ピペットを 1 回だけ使用していますか?
ピペットの先端がボトルネックのネジ山の外縁など、滅菌されていないものに触れないようにしていませんか?
液体をこぼした場合、すぐに吸収して70%エタノールで拭きましたか?
なお、スーパークリーンベンチ上の物品の配置や配置、長い髪などの個人の衛生状態は見落とされやすい。スーパークリーンベンチ上に物品が多すぎると、空気の流れや空気圧に影響を与える可能性がありますので注意が必要です。
「自分と敵を知れば、百戦錬磨で負けることはありません。」 汚染を防ぐ方法を知るには、汚染を特定する方法も知る必要があります。結局のところ、汚染された細胞はすぐに廃棄する必要があります。そうしないと、汚染物質がすべての宝石を集めてしまったら...
細胞培養汚染は主に 2 つのカテゴリに分類されます。1 つは培養培地、血清、水中の不純物、エンドトキシン、可塑剤、界面活性剤などの化学的汚染物質です。細菌、真菌、酵母、ウイルス、マイコプラズマ、他の細胞株の相互汚染などの生物学的汚染物質。
細菌汚染:
細菌には球状、棒状、らせん状などさまざまな形があります。細菌と真菌は一緒になって、細胞培養において最も一般的に遭遇する生物学的汚染物質を構成します。細胞が細菌に汚染されると、肉眼での簡単な観察で 1 ～ 2 日以内に検出できることが多く、培地の pH 値が急激に低下する場合があります。下の画像は、大腸菌に汚染され、接着細胞として増殖する 293 細胞を示しています。
真菌汚染:
菌汚染の初期段階では培地のpHは安定していますが、汚染が進行すると急激にpHが上昇し、培地が濁ります。顕微鏡下では、菌糸は細い束として見えることが多く、時には胞子が密集した塊として見えることもあります。胞子は休眠中に非常に過酷で不利な環境に耐えることができます。したがって、真菌汚染が発生した場合には、培養器内の大規模な汚染を防ぐために、速やかに細胞を廃棄する必要があります。
酵母の汚染:
細菌汚染と同様に、酵母で汚染されると、特に汚染の後期に培地が濁ります。培地の pH は酵母による汚染後もほとんど変化せず、汚染がひどい場合にのみ上昇します。顕微鏡下では、酵母は個々の楕円形または球形の粒子として見え、その一部は娘細胞に出芽する可能性があります。下の画像は、酵母で汚染された 293 細胞を示しています。
ウイルス汚染:
ウイルスのサイズは非常に小さいため、細胞培養に使用される試薬からウイルスを検出して除去することが困難です。ほとんどのウイルスは宿主に対して非常に厳しい要件を持っているため、通常、ウイルス自体の宿主種以外の細胞培養に悪影響を及ぼしません。しかし、ウイルスに感染した細胞培養物の使用は、実験従事者に重大な健康上の脅威をもたらす可能性があります。
マイコプラズマ汚染:
マイコプラズマは、最小の自己複製生物と考えられています。マイコプラズマのサイズは非常に小さいため、検出は非常に困難であり、密度が非常に高くない限り、感染の明らかな兆候が見られないことがよくあります。マイコプラズマの中には、細胞死を引き起こすことなく細胞培養中に存続できるものもありますが、培養系内の細胞の挙動や代謝を変化させる可能性があります。慢性マイコプラズマ感染症の考えられる症状としては、細胞増殖速度の低下、核密度の低下、浮遊培養における細胞凝集などが挙げられます。マイコプラズマ汚染を検出する最も効果的な方法は、蛍光染色、ELISA、PCR、免疫染色、X線撮影による自己現像、または定期的に培養物を検査する微生物学的測定技術です。
相互汚染:
微生物汚染ほど一般的ではありませんが、多くの細胞株と HeLa 細胞などの急速に成長する細胞株の間での広範な相互汚染は明らかな問題です。評判の良い細胞バンクから細胞株を入手し、細胞株の特性を定期的にチェックし、適切な無菌技術を使用することが、相互汚染を避けるための従来の方法です。
抗生物質の使用:
抗生物質を細胞培養に日常的に使用すべきではありません。抗生物質を過剰に使用すると抗生物質耐性株の発生を促進し、低レベルの汚染が持続する可能性があるためです。抗生物質が除去されると、この低レベルの汚染は最終的に大規模な汚染に発展する可能性があり、抗生物質の継続使用によりマイコプラズマ感染症やその他の種類の汚染が隠蔽される可能性もあります。したがって、抗生物質は汚染に対する最後の手段としてのみ使用でき、短期間のみ使用し、できるだけ早く除去する必要があります。
