細胞培養の汚染を防ぐ方法は？

この記事では、主に一般的なタイプの細胞汚染を紹介します。

作業エリア：

1. 細胞培養の換気フードは正しく設定されていますか？

2. 細胞培養換気フードが配置されているエリアに、気流や直接入力チャネルはありますか？

3. ワークベンチはきれいですか？

4. 実験に必要なアイテムのみがワークベンチに置かれましたか？

5. 
   

6. 作業を開始する前に、ワークベンチを70％エタノールで拭いたことがありますか？

7. インキュベーター、冷蔵庫、冷凍庫、およびその他の実験装置を定期的に掃除して消毒していますか？

個人衛生：

1. 手を洗ったことがありますか？

2. 個人的な保護装置を着用しましたか？

3. 髪が長い場合、それは縛られていますか？

4. 液体を扱うためにピペットを使用していますか？

5. 試薬と培地

6. 適切な方法を使用して、実験室で準備されたすべての試薬、メディア、ソリューションを滅菌しましたか？

7. 容器、培養ボトル、培養板、培養皿を作業面に置く前に、70％のエタノールで外観を拭きましたか？

8. 使用していないときに、試薬のボトル、培養ボトル、その他の容器の蓋を締めましたか？

9. すべての培養プレートは、無菌の気密バッグに入れられましたか？

10. 曇り、浮遊粒子、不快な臭気、異常な色など、試薬に汚染の兆候はありますか？もしそうなら、あなたはそれらを掃除または廃棄しましたか？

手術：

1. ゆっくりと慎重に動作し、無菌技術に注意を払っていますか？

2. 細胞培養換気フードに置く前に、ピペット、試薬ボトル、培養ボトルの表面を70％エタノールで拭いたことがありますか？

3. 作業エリアの蓋を下向きに置いたことがありますか？

4. 液体を扱うために滅菌ガラスピペットまたは使い捨ての滅菌プラスチックピペットを使用していますか？

5. 相互汚染を避けるために、滅菌ピペットを一度だけ使用していますか？

6. ピペットの先端に触れて、ボトルネックスレッドの外側の端を含む非薄型アイテムに触れることを避けましたか？

7. 液体流出が発生した場合、すぐに吸収し、70％のエタノールで領域を拭きましたか？

スーパークリーンベンチにあるアイテムの配置と配置、および長い髪などの個人的な衛生は簡単に見落とされることに注意する必要があります。超きれいなベンチにあるアイテムが多すぎると、空気の流れや空気圧に干渉する可能性があるため、誰もが注意を払う必要があります。

「自分自身とあなたの敵を知ってください、そうすれば、あなたは100の戦いで敗北することは決してありません。」汚染を防ぐ方法を知っているので、それを識別する方法を知る必要があります。結局のところ、汚染された細胞を迅速に廃棄する必要があります。そうしないと、汚染物質がすべての宝石を集める場合、それは...

細胞培養汚染は、主に2つのカテゴリに分けられます。培地、血清、水、エンドトキシン、可塑剤、洗剤の不純物などの化学汚染物質。細菌、菌類、酵母、ウイルス、マイコプラズマ、他の細胞株の相互汚染などの生物学的汚染物質。

細菌汚染：

バクテリアには、球形、棒状、スパイラル型など、さまざまな形があります。細菌と真菌は一緒になって、細胞培養で最も一般的に遭遇する生物学的汚染物質を構成します。細胞を細菌で汚染すると、肉眼での単純な観察により1〜2日以内に検出されることが多く、培地のpH値が突然減少する可能性があります。以下の画像は、大腸菌で汚染され、接着細胞として成長している293個の細胞を示しています。

真菌汚染：

真菌汚染の初期段階では、培地のpHは安定したままですが、汚染が悪化すると、pHが急速に増加し、媒体が乱流になります。顕微鏡下では、菌糸はしばしば薄い束として現れ、時には胞子の密なクラスターとして現れます。胞子は、休眠中に非常に過酷で不利な環境に耐えることができます。したがって、真菌汚染が発生した場合、インキュベーターの大規模な汚染を防ぐために細胞を速やかに廃棄する必要があります。

酵母汚染：

細菌の汚染と同様に、培地は酵母で汚染されると、特に後期段階汚染中に乱流になります。培養培地のpHは、酵母による汚染後はほとんど変化しません。また、汚染が重度の場合にのみ増加します。顕微鏡下では、酵母は個々の楕円形または球状粒子として現れ、その一部は娘細胞に芽を出します。以下の画像は、酵母で汚染された293個の細胞を示しています。

ウイルス汚染：

ウイルスのサイズは非常に少ないため、細胞培養で使用される試薬からそれらを検出して除去することが困難です。ほとんどのウイルスには宿主に非常に厳しい要件があるため、一般に、独自以外の宿主種からの細胞培養に悪影響を及ぼしません。しかし、ウイルスに感染した細胞培養の使用は、実験的な演算子に深刻な健康上の脅威をもたらす可能性があります。

マイコプラズマ汚染：

マイコプラズマは、最小の自己複製生物と考えられています。サイズが非常に小さいため、マイコプラズマの検出は非常に困難であり、密度が非常に高い場合を除き、感染の明らかな兆候はしばしばありません。一部のマイコプラズマは、細胞死を引き起こすことなく細胞培養で持続することさえありますが、培養系の細胞の挙動と代謝を変えることができます。慢性マイコプラズマ感染の可能性のある症状には、細胞増殖速度の低下、核密度の減少、および懸濁液培養における細胞凝集が含まれます。マイコプラズマの汚染を検出するための最も効果的な方法は、蛍光染色、ELISA、PCR、免疫染色、X線撮影自己発達、または培養を定期的にテストするための微生物学的決定技術です。

相互汚染：

微生物汚染ほど一般的ではありませんが、多くの細胞株とHeLa細胞などの急速に成長する細胞株間の広範な交差汚染は明らかな問題です。評判の良い細胞銀行から細胞株を取得し、細胞株の特性を定期的にチェックし、優れた無菌技術を使用することは、相互汚染を避けるための従来の方法です。

抗生物質の使用：

抗生物質は、過剰使用が抗生物質耐性株の発達を促進し、持続的な低レベルの汚染につながるため、細胞培養で日常的に使用すべきではありません。抗生物質が除去されると、この低レベルの汚染は最終的に大規模な汚染に発生する可能性があり、抗生物質の継続的な使用は、マイコプラズマ感染症や他の種類の汚染を隠すこともできます。したがって、抗生物質は汚染に対する最後の手段としてのみ使用でき、短期間のみ使用する必要があり、できるだけ早く除去する必要があります。