Hoe besmetting in celkweek te voorkomen?

Dit artikel introduceert voornamelijk gemeenschappelijke soorten celverontreiniging.

Werkgebied:

1. Is de ventilatiekap voor celkweek correct opgezet?

2. Zijn er luchtstromen of directe toegangskanalen in het gebied waar de celcultuurventilatiekap zich bevindt?

3. Is de werkbank schoon?

4. Zijn alleen de items die nodig zijn voor het experiment op de werkbank geplaatst?

5. 
   

6. Heb je de werkbank geveegd met 70% ethanol voordat je aan het werk begint?

7. Reinigt en desinfecteert u regelmatig de incubator, koelkast, vriezer en andere laboratoriumapparatuur?

Persoonlijke hygiëne:

1. Heb je je handen gewassen?

2. Heb je persoonlijke beschermingsapparatuur gedragen?

3. Als je lang haar hebt, is het dan teruggebonden?

4. Gebruikt u een pipet om vloeistoffen aan te kunnen?

5. Reagentia en cultuurmedia

6. Heb je alle reagentia, media en oplossingen die in het laboratorium zijn bereid met behulp van geschikte methoden gesteriliseerd?

7. Voordat u containers, kweekflessen, kweekplaten en kweekgerechten op het werkoppervlak plaatst, heeft u hun exterieur geveegd met 70% ethanol?

8. Heb je de deksels van reagensflessen, kweekflessen en andere containers aangescherpt wanneer je niet in gebruik bent?

9. Zijn alle kweekplaten in steriele, luchtdichte tassen geplaatst?

10. Zijn er tekenen van verontreiniging in de reagentia, zoals bewolking, drijvende deeltjes, onaangename geuren of abnormale kleuren? Zo ja, heb je ze schoongemaakt of weggegooid?

Bediening:

1. Werk je langzaam, voorzichtig en let je op aseptische technieken?

2. Heb je de oppervlakken van pipetten, reagensflessen en kweekflessen met 70% ethanol weggevaagd voordat je ze in de celcultuurventilatiekap plaatst?

3. Heb je de deksels naar beneden in het werkgebied geplaatst?

4. Gebruikt u steriele glazen pipetten of wegwerpsteriele plastic pipetten om vloeistoffen aan te kunnen?

5. Gebruikt u slechts één keer steriele pipetten om kruisbesmetting te voorkomen?

6. Heb je vermeden de punt van de pipet aan te raken aan niet-steriele items, inclusief de buitenrand van flesjeshals?

7. Als er vloeistof morsen optreden, hebt u het dan onmiddellijk geabsorbeerd en het gebied geveegd met 70% ethanol?

Opgemerkt moet worden dat de plaatsing en opstelling van items op de super schone bank, evenals persoonlijke hygiëne zoals lang haar, gemakkelijk over het hoofd worden gezien. Te veel items op de super schone bank kunnen interferentie veroorzaken in de luchtstroom en de luchtdruk, dus iedereen moet opletten.

'Ken uzelf en uw vijand, en u zult nooit worden verslagen in honderd gevechten. ' Wetende hoe we besmetting kunnen voorkomen, moeten we ook weten hoe we het kunnen identificeren. Verbonden cellen moeten immers onmiddellijk worden weggegooid, anders, als de verontreinigingen alle edelstenen verzamelen, zal dit ...

Celkweekverontreiniging is voornamelijk verdeeld in twee categorieën: chemische verontreinigingen, zoals onzuiverheden in kweekmedia, serum en water, endotoxinen, weekmis- en wasmiddelen; en biologische verontreinigingen, zoals bacteriën, schimmels, gist, virussen, mycoplasma en kruisbesmetting van andere cellijnen.

Bacteriële besmetting:

Bacteriën zijn er in verschillende vormen, zoals bolvormig, staafvormig en spiraalvormig. Bacteriën en schimmels vormen samen de meest voorkomende biologische verontreinigingen in celkweek. Wanneer cellen besmet zijn met bacteriën, kan dit vaak binnen een of twee dagen worden gedetecteerd door eenvoudige observatie met het blote oog en kan de pH -waarde van het kweekmedium plotseling afnemen. De onderstaande afbeelding toont 293 cellen vervuild met E. coli en groeien als hechtende cellen.

Schimmelbesmetting:

In de beginfase van schimmelverontreiniging blijft de pH van het kweekmedium stabiel, maar naarmate de verontreiniging verslechtert, neemt de pH snel toe, waardoor het medium troebel wordt. Onder de microscoop verschijnen de hyfen vaak als dunne bundels, en soms als dichte clusters van sporen. Sporen kunnen tijdens de slaapstand extreem harde en ongunstige omgevingen weerstaan. Daarom, wanneer schimmelbesmetting optreedt, is het noodzakelijk om de cellen onmiddellijk weg te gooien om grootschalige besmetting in de incubator te voorkomen.

Gistbesmetting:

Net als bij bacteriële besmetting wordt het kweekmedium troebel wanneer het wordt besmet met gist, vooral tijdens late verontreiniging. De pH van het kweekmedium verandert zeer weinig na besmetting met gist en neemt alleen toe wanneer de verontreiniging ernstig is. Onder de microscoop verschijnt gist als individuele ovale of sferische deeltjes, waarvan sommige in dochtercellen kunnen ontluiken. De onderstaande afbeelding toont 293 cellen besmet met gist.

Virale besmetting:

Virussen hebben extreem kleine maten, waardoor het moeilijk is om ze te detecteren en te verwijderen uit de reagentia die in celkweek worden gebruikt. Aangezien de meeste virussen zeer strikte vereisten hebben voor hun gastheren, hebben ze over het algemeen geen nadelige effecten op celculturen van andere gastheersoorten dan die van henzelf. Het gebruik van celculturen die zijn geïnfecteerd met virussen kan echter een ernstige gezondheidsbedreigingen vormen voor experimentele operators.

Mycoplasma -besmetting:

Mycoplasma wordt beschouwd als het kleinste zelfreplicerende organisme. Vanwege het extreem kleine formaat is detectie van mycoplasma erg moeilijk, en er zijn vaak geen duidelijke tekenen van infectie tenzij de dichtheid erg hoog is. Sommige mycoplasma kan zelfs in celculturen blijven bestaan ​​zonder celdood te veroorzaken, maar ze kunnen het gedrag en het metabolisme van cellen in het kweekysteem veranderen. De mogelijke manifestaties van chronische mycoplasma -infectie omvatten een afname van de celproliferatiesnelheid, een afname van de nucleaire dichtheid en celaggregatie in de suspensiekweek. De meest effectieve methoden voor het detecteren van mycoplasma-verontreiniging zijn fluorescentiekleuring, ELISA, PCR, immunokleuring, radiografische zelfontwikkeling of microbiologische bepalingstechnieken om de cultuur periodiek te testen.

Kruisbesmetting:

Hoewel niet zo gebruikelijk als microbiële besmetting, is wijdverbreide kruisbesmetting tussen veel cellijnen en snelgroeiende cellijnen zoals HeLa-cellen een duidelijk probleem. Het verkrijgen van cellijnen van gerenommeerde celbanken, het regelmatig controleren van de eigenschappen van cellijnen en het gebruik van goede aseptische technieken zijn conventionele methoden om kruisbesmetting te voorkomen.

Gebruik van antibiotica:

Antibiotica mogen niet routinematig worden gebruikt in celkweek omdat hun overmatig gebruik de ontwikkeling van antibioticaresistente stammen kan bevorderen, wat leidt tot aanhoudende besmetting op laag niveau. Zodra antibiotica zijn verwijderd, kan deze besmetting op laag niveau zich uiteindelijk ontwikkelen tot grootschalige besmetting en kan het voortdurende gebruik van antibiotica ook mycoplasma-infecties en andere soorten verontreiniging maskeren. Daarom kunnen antibiotica alleen worden gebruikt als laatste redmiddel tegen besmetting en mogen slechts voor een korte periode worden gebruikt en mogen zo snel mogelijk worden verwijderd.