Hoe besmetting in celcultuur voorkomen?

Dit artikel introduceert voornamelijk veel voorkomende soorten celbesmetting.

Werkgebied:

1. Is de ventilatiekap voor celcultuur correct opgesteld?

2. Zijn er luchtstromen of directe toegangskanalen in de ruimte waar de celcultuurventilatiekap zich bevindt?

3. Is de werkbank schoon?

4. Zijn alleen de spullen die nodig zijn voor het experiment op de werkbank geplaatst?

5. 
   

6. Heeft u de werkbank vóór aanvang van de werkzaamheden met 70% ethanol afgeveegd?

7. Reinigt en desinfecteert u regelmatig de couveuse, koelkast, vriezer en andere laboratoriumapparatuur?

Persoonlijke hygiëne:

1. Heb je je handen gewassen?

2. Heeft u persoonlijke beschermingsmiddelen gedragen?

3. Als je lang haar hebt, wordt het dan samengebonden?

4. Gebruikt u een pipet om vloeistoffen te hanteren?

5. Reagentia en kweekmedia

6. Heeft u alle reagentia, media en oplossingen die in het laboratorium zijn bereid met de juiste methoden gesteriliseerd?

7. Heeft u de buitenkant van de containers, kweekflessen, kweekplaten en kweekschalen met 70% ethanol afgeveegd voordat u containers, kweekflessen, kweekplaten en kweekschalen op het werkoppervlak plaatst?

8. Heeft u de deksels van reagensflessen, kweekflessen en andere containers goed vastgedraaid als u ze niet gebruikt?

9. Zijn alle kweekplaten in steriele, luchtdichte zakken geplaatst?

10. Zijn er tekenen van verontreiniging in de reagentia, zoals troebelheid, zwevende deeltjes, onaangename geuren of abnormale kleuren? Zo ja, heeft u deze schoongemaakt of weggegooid?

Bediening:

1. Werkt u langzaam, voorzichtig en let u op aseptische technieken?

2. Heeft u de oppervlakken van pipetten, reagensflessen en kweekflessen met 70% ethanol afgeveegd voordat u ze in de celkweekventilatiekap plaatst?

3. Heeft u de deksels naar beneden in de werkruimte geplaatst?

4. Gebruikt u steriele glazen pipetten of steriele plastic wegwerppipetten om vloeistoffen te verwerken?

5. Gebruikt u steriele pipetten slechts één keer om kruisbesmetting te voorkomen?

6. Heeft u vermeden om met de punt van de pipet niet-steriele voorwerpen aan te raken, inclusief de buitenrand van de schroefdraad van flessenhalsen?

7. Als er vloeistof gemorst wordt, heeft u dit dan onmiddellijk geabsorbeerd en het gebied met 70% ethanol afgeveegd?

Opgemerkt moet worden dat de plaatsing en rangschikking van spullen op de superschone bank, evenals persoonlijke hygiëne zoals lang haar, gemakkelijk over het hoofd worden gezien. Te veel spullen op de superschone bank kunnen de luchtstroom en luchtdruk verstoren, dus iedereen moet opletten.

'Ken jezelf en je vijand, en je zult nooit verslagen worden in honderd veldslagen.' Omdat we weten hoe we besmetting kunnen voorkomen, moeten we ook weten hoe we besmetting kunnen identificeren. Verontreinigde cellen moeten immers onmiddellijk worden weggegooid, anders zal het, als de verontreinigende stoffen alle edelstenen verzamelen,...

Celkweekbesmetting wordt hoofdzakelijk onderverdeeld in twee categorieën: chemische verontreinigingen, zoals onzuiverheden in kweekmedia, serum en water, endotoxinen, weekmakers en detergentia; en biologische verontreinigingen, zoals bacteriën, schimmels, gisten, virussen, mycoplasma en kruisbesmetting van andere cellijnen.

Bacteriële besmetting:

Bacteriën zijn er in verschillende vormen, zoals bolvormig, staafvormig en spiraalvormig. Bacteriën en schimmels vormen samen de meest voorkomende biologische verontreinigingen in celcultuur. Wanneer cellen besmet zijn met bacteriën, kan dit vaak binnen één of twee dagen worden gedetecteerd door eenvoudige observatie met het blote oog, en kan de pH-waarde van het kweekmedium plotseling dalen. De onderstaande afbeelding toont 293 cellen die besmet zijn met E. coli en groeien als hechtende cellen.

Schimmelbesmetting:

In het beginstadium van schimmelbesmetting blijft de pH van het kweekmedium stabiel, maar naarmate de vervuiling verergert, stijgt de pH snel, waardoor het medium troebel wordt. Onder de microscoop verschijnen de hyfen vaak als dunne bundels, en soms als dichte clusters van sporen. Sporen zijn tijdens de rustperiode bestand tegen extreem zware en ongunstige omgevingen. Wanneer er schimmelbesmetting optreedt, is het daarom noodzakelijk om de cellen onmiddellijk weg te gooien om grootschalige besmetting in de incubator te voorkomen.

Gistbesmetting:

Net als bij bacteriële besmetting wordt het kweekmedium troebel bij besmetting met gist, vooral tijdens besmetting in een laat stadium. De pH van het kweekmedium verandert zeer weinig na besmetting met gist, en neemt alleen toe als de besmetting ernstig is. Onder de microscoop verschijnt gist als individuele ovale of bolvormige deeltjes, waarvan sommige in dochtercellen kunnen uitgroeien. Op onderstaande afbeelding zijn 293 cellen te zien die besmet zijn met gist.

Virale besmetting:

Virussen zijn extreem klein van formaat, waardoor ze moeilijk te detecteren en te verwijderen zijn uit de reagentia die in de celcultuur worden gebruikt. Omdat de meeste virussen zeer strenge eisen stellen aan hun gastheren, hebben ze over het algemeen geen nadelige effecten op celculturen van andere gastheersoorten dan die van henzelf. Het gebruik van met virussen geïnfecteerde celculturen kan echter ernstige bedreigingen voor de gezondheid van experimentele exploitanten vormen.

Mycoplasma-besmetting:

Mycoplasma wordt beschouwd als het kleinste zelfreplicerende organisme. Vanwege de extreem kleine omvang is de detectie van mycoplasma erg moeilijk en zijn er vaak geen duidelijke tekenen van infectie, tenzij de dichtheid erg hoog is. Sommige mycoplasma's kunnen zelfs in celculturen blijven bestaan ​​zonder celdood te veroorzaken, maar ze kunnen wel het gedrag en het metabolisme van cellen in het kweeksysteem veranderen. De mogelijke manifestaties van chronische mycoplasma-infectie omvatten een afname van de celproliferatiesnelheid, een afname van de kerndichtheid en celaggregatie in suspensiekweek. De meest effectieve methoden voor het detecteren van mycoplasmabesmetting zijn fluorescentiekleuring, ELISA, PCR, immunokleuring, radiografische zelfontwikkeling of microbiologische bepalingstechnieken om de cultuur periodiek te testen.

Kruisbesmetting:

Hoewel niet zo gebruikelijk als microbiële besmetting, is wijdverbreide kruisbesmetting tussen veel cellijnen en snelgroeiende cellijnen zoals HeLa-cellen een duidelijk probleem. Het verkrijgen van cellijnen van gerenommeerde celbanken, het regelmatig controleren van de eigenschappen van cellijnen en het gebruik van goede aseptische technieken zijn conventionele methoden om kruisbesmetting te helpen voorkomen.

Gebruik van antibiotica:

Antibiotica mogen niet routinematig worden gebruikt in celculturen, omdat overmatig gebruik ervan de ontwikkeling van antibioticaresistente stammen kan bevorderen, wat kan leiden tot aanhoudende besmetting op laag niveau. Zodra antibiotica zijn verwijderd, kan deze besmetting op laag niveau zich uiteindelijk ontwikkelen tot grootschalige besmetting, en het voortgezette gebruik van antibiotica kan ook mycoplasma-infecties en andere soorten besmetting maskeren. Daarom kunnen antibiotica alleen als laatste redmiddel tegen besmetting worden gebruikt en mogen ze slechts voor een korte periode worden gebruikt en zo snel mogelijk worden verwijderd.