Как предотвратить контаминацию клеточной культуры?

В этой статье в основном представлены распространенные типы загрязнения клеток.

Рабочая зона:

1. Правильно ли установлен вытяжной шкаф для клеточной культуры?

2. Имеются ли потоки воздуха или каналы прямого входа в зоне, где расположен вытяжной шкаф для клеточной культуры?

3. Рабочий стол чистый?

4. Разложены ли на верстаке только предметы, необходимые для эксперимента?

5. 
   

6. Протирали ли вы верстак 70%-ным этанолом перед началом работы?

7. Регулярно ли вы чистите и дезинфицируете инкубатор, холодильник, морозильную камеру и другое лабораторное оборудование?

Личная гигиена:

1. Вы помыли руки?

2. Использовали ли вы средства индивидуальной защиты?

3. Если у вас длинные волосы, завязаны ли они сзади?

4. Используете ли вы пипетку для работы с жидкостями?

5. Реагенты и питательные среды

6. Стерилизовали ли вы все реагенты, среды и растворы, приготовленные в лаборатории, с использованием соответствующих методов?

7. Перед размещением контейнеров, культуральных бутылок, культуральных чашек и культуральных чашек на рабочей поверхности протерли ли вы их снаружи 70%-ным этанолом?

8. Закрывали ли вы крышки бутылей с реагентами, культуральных бутылей и других контейнеров, когда они не используются?

9. Все ли культуральные чашки помещены в стерильные герметичные пакеты?

10. Имеются ли какие-либо признаки загрязнения реагентов, такие как помутнение, плавающие частицы, неприятный запах или ненормальный цвет? Если да, то чистили ли вы их или выбрасывали?

Операция:

1. Вы действуете медленно, осторожно и обращаете внимание на асептические методы?

2. Протирали ли вы поверхности пипеток, флаконов с реагентами и флаконов с культурами 70%-ным этанолом перед помещением их в вытяжной шкаф для клеточной культуры?

3. Разместили ли вы крышки вниз в рабочей зоне?

4. Используете ли вы стерильные стеклянные пипетки или одноразовые стерильные пластиковые пипетки для работы с жидкостями?

5. Используете ли вы стерильные пипетки только один раз, чтобы избежать перекрестного загрязнения?

6. Избегали ли вы прикосновения кончиком пипетки к нестерильным предметам, включая внешний край резьбы горлышка бутылки?

7. Если произошла утечка жидкости, немедленно ли вы ее впитали и протерли место 70%-ным этанолом?

Следует отметить, что размещение и расположение предметов на сверхчистой скамейке, а также личная гигиена, например, длинные волосы, легко упускаются из виду. Слишком большое количество предметов на сверхчистом столе может стать помехой потоку и давлению воздуха, поэтому всем следует быть внимательными.

«Познай себя и своего врага, и ты никогда не проиграешь ни в сотне сражений». Зная, как предотвратить заражение, нам также необходимо знать, как его идентифицировать. Ведь загрязненные клетки нужно срочно выбрасывать, иначе, если загрязнители соберут все драгоценные камни, это будет...

Загрязнение клеточных культур в основном делится на две категории: химические загрязнители, такие как примеси в культуральных средах, сыворотке и воде, эндотоксины, пластификаторы и детергенты; и биологические загрязнители, такие как бактерии, грибы, дрожжи, вирусы, микоплазма и перекрестное загрязнение других клеточных линий.

Бактериальное загрязнение:

Бактерии бывают различной формы, например сферической, палочковидной и спиралевидной. Бактерии и грибы вместе составляют наиболее часто встречающиеся биологические загрязнители в культуре клеток. Когда клетки заражены бактериями, это часто можно обнаружить в течение одного или двух дней путем простого наблюдения невооруженным глазом, а значение pH культуральной среды может внезапно снизиться. На изображении ниже показаны 293 клетки, зараженные кишечной палочкой и растущие как прикрепившиеся клетки.

Грибковое загрязнение:

На начальной стадии грибкового заражения pH культуральной среды остается стабильным, но по мере усугубления загрязнения pH быстро увеличивается, в результате чего среда мутнеет. Под микроскопом гифы часто выглядят как тонкие пучки, а иногда и как плотные скопления спор. Споры могут выдерживать чрезвычайно суровые и неблагоприятные условия во время покоя. Поэтому при возникновении грибкового заражения необходимо оперативно выбрасывать клетки, чтобы предотвратить масштабное заражение инкубатора.

Дрожжевое загрязнение:

Подобно бактериальному загрязнению, культуральная среда становится мутной при загрязнении дрожжами, особенно на поздних стадиях заражения. pH культуральной среды меняется очень незначительно после заражения дрожжами и увеличивается только при сильном загрязнении. Под микроскопом дрожжи выглядят как отдельные овальные или сферические частицы, некоторые из которых могут превращаться в дочерние клетки. На изображении ниже показаны 293 клетки, зараженные дрожжами.

Вирусное заражение:

Вирусы имеют чрезвычайно малые размеры, что затрудняет их обнаружение и удаление из реагентов, используемых в культуре клеток. Поскольку большинство вирусов предъявляют очень строгие требования к своим хозяевам, они, как правило, не оказывают неблагоприятного воздействия на культуры клеток других видов хозяев, кроме их собственных. Однако использование культур клеток, зараженных вирусами, может представлять серьезную угрозу для здоровья операторов-экспериментаторов.

Микоплазменная контаминация:

Микоплазма считается самым маленьким самовоспроизводящимся организмом. Из-за чрезвычайно малого размера обнаружить микоплазму очень сложно, и явных признаков инфекции часто нет, если только плотность не очень высока. Некоторые микоплазмы могут даже персистировать в клеточных культурах, не вызывая гибели клеток, но они могут изменять поведение и метаболизм клеток в культуральной системе. К возможным проявлениям хронической микоплазменной инфекции относятся снижение скорости пролиферации клеток, снижение плотности ядра и агрегации клеток в суспензионной культуре. Наиболее эффективными методами обнаружения заражения микоплазмой являются флуоресцентное окрашивание, ИФА, ПЦР, иммуноокрашивание, радиографическое саморазвитие или методы микробиологического определения для периодического тестирования культуры.

Перекрестное загрязнение:

Хотя это и не так распространено, как микробное загрязнение, широко распространенное перекрестное загрязнение между многими клеточными линиями и быстро растущими клеточными линиями, такими как клетки HeLa, представляет собой явную проблему. Получение клеточных линий из надежных банков клеток, регулярная проверка свойств клеточных линий и использование хороших асептических методов являются традиционными методами, помогающими избежать перекрестного загрязнения.

Использование антибиотиков:

Антибиотики не следует регулярно использовать в культурах клеток, поскольку их чрезмерное использование может способствовать развитию штаммов, устойчивых к антибиотикам, что приводит к стойкому низкому уровню загрязнения. После отмены антибиотиков это низкое загрязнение может в конечном итоге перерасти в крупномасштабное загрязнение, а дальнейшее использование антибиотиков также может маскировать микоплазменные инфекции и другие типы загрязнения. Таким образом, антибиотики можно использовать только в качестве крайней меры против заражения, их следует применять только в течение короткого периода времени и их следует отменить как можно скорее.