Как предотвратить загрязнение в клеточной культуре?

Эта статья в основном вводит общие типы загрязнения клеток.

Рабочая зона:

1. Правильно ли настроен вентиляционный капюшон для клеточной культуры?

2. Существуют ли какие -либо воздушные потоки или прямые каналы входа в той области, где расположен вентиляционный капюшон клеточной культуры?

3. Workbench чист?

4. Были ли только предметы, необходимые для эксперимента на рабочем месте?

5. 
   

6. Вы уничтожили Workbench 70% этанолом перед началом работы?

7. Вы регулярно чистите и дезинфицируете инкубатор, холодильник, морозильник и другое лабораторное оборудование?

Личная гигиена:

1. Вы вымыли руки?

2. Вы носили личное защитное оборудование?

3. Если у вас длинные волосы, это привязано?

4. Вы используете пипетку для обработки жидкостей?

5. Реагенты и культуральные средства массовой информации

6. Вы стерилизовали все реагенты, среды и решения, подготовленные в лаборатории, используя соответствующие методы?

7. Перед тем, как поместить контейнеры, культурные бутылки, культурные тарелки и культурные блюда на рабочей поверхности, вы уничтожили их экстерьеры 70% этанолом?

8. Вы сжали крышки бутылок реагентов, бутылок культуры и других контейнеров, когда не используются?

9. Были ли все культурные пластины размещены в стерильных, герметичных мешках?

10. Существуют ли какие -либо признаки загрязнения в реагентах, таких как облачность, плавающие частицы, неприятные запахи или аномальные цвета? Если да, то вы почистили или отбросили их?

Операция:

1. Вы работаете медленно, тщательно и обращаете внимание на асептические методы?

2. Вы уничтожили поверхности пипетков, бутылок реагентов и культурных бутылок с 70% этанолом, прежде чем поместить их в вентиляцию клеточной культуры?

3. Вы поместили крышки, обращенные вниз в рабочей зоне?

4. Вы используете стерильные стеклянные пипетки или одноразовые стерильные пластиковые пипетки для обработки жидкостей?

5. Вы используете стерильные пипетки только один раз, чтобы избежать перекрестного загрязнения?

6. Вы избегали прикосновения к кончику пипетки к любым нестерильным предметам, включая внешний край нити для шейки для бутылки?

7. Если возникают разливы жидкости, вы немедленно поглотили ее и вытерлись 70% этанолом?

Следует отметить, что размещение и расположение предметов на супер чистой скамейке, а также личную гигиену, такую ​​как длинные волосы, легко упускаются из виду. Слишком много предметов на супер чистой скамейке может вызвать помехи на воздушный поток и давление воздуха, поэтому каждый должен обратить внимание.

«Знай себя и своего врага, и ты никогда не потерпишь поражение в сотнях битв. В конце концов, загрязненные клетки необходимо быстро отказаться, в противном случае, если загрязнители собирают все драгоценные камни, это будет ...

Загрязнение клеточной культуры в основном делится на две категории: химические загрязнители, такие как примеси в культуральной среде, сыворотке и воде, эндотоксины, пластификаторы и моющие средства; и биологические загрязнители, такие как бактерии, грибы, дрожжи, вирусы, микоплазма и перекрестная загрязнение других клеточных линий.

Бактериальное загрязнение:

Бактерии бывают разных форм, таких как сферическая, в форме стержня и спиральная форма. Бактерии и грибы вместе составляют наиболее часто встречающиеся биологические загрязнения в клеточной культуре. Когда клетки загрязнены бактериями, их часто можно обнаружить в течение одного или двух дней путем простых наблюдений невооруженным глазом, а значение pH культуральной среды может внезапно уменьшаться. На изображении ниже показаны 293 клетки, загрязненные кишечной палочкой, и растут как прилипшие клетки.

Грибковое загрязнение:

На начальной стадии грибкового загрязнения pH культуральной среды остается стабильным, но по мере того, как загрязнение ухудшается, pH быстро увеличивается, в результате чего среда становится мутной. Под микроскопом гифы часто появляются как тонкие пучки, а иногда как плотные кластеры споров. Споры могут противостоять чрезвычайно суровой и неблагоприятной среде во время покоя. Следовательно, когда происходит загрязнение гриба, необходимо быстро отказаться от клеток, чтобы предотвратить крупномасштабное загрязнение в инкубаторе.

Загрязнение дрожжей:

Подобно бактериальному загрязнению, культуральная среда становится мутной при загрязнении дрожжами, особенно во время загрязнения поздней стадии. PH культуральной среды меняется очень мало после загрязнения дрожжами и увеличивается только тогда, когда загрязнение является серьезным. Под микроскопом дрожжи появляются в виде отдельных овальных или сферических частиц, некоторые из которых могут быть затруднены в дочерние клетки. На изображении ниже показаны 293 ячейки, загрязненные дрожжами.

Вирусное загрязнение:

Вирусы имеют чрезвычайно небольшие размеры, что затрудняет обнаружение и удаление их из реагентов, используемых в клеточной культуре. Поскольку большинство вирусов имеют очень строгие требования к своим хозяевам, они, как правило, не оказывают неблагоприятного воздействия на клеточные культуры от видов хозяев, кроме их собственных. Тем не менее, использование клеточных культур, инфицированных вирусами, может представлять серьезные угрозы для здоровья экспериментальным операторам.

Загрязнение микоплазмы:

Микоплазма считается наименьшим самореплицирующимся организмом. Из -за его чрезвычайно небольшого размера обнаружение микоплазмы очень сложно, и часто нет очевидных признаков инфекции, если плотность не очень высока. Некоторая микоплазма может даже сохраняться в клеточных культурах, не вызывая гибели клеток, но они могут изменить поведение и метаболизм клеток в системе культивирования. Возможные проявления хронической инфекции микоплазмы включают снижение скорости пролиферации клеток, снижение ядерной плотности и агрегацию клеток в культуре суспензии. Наиболее эффективными методами обнаружения загрязнения микоплазмы являются флуоресцентное окрашивание, ELISA, ПЦР, иммуноокрашивание, рентгенографическое саморазвитие или методы микробиологического определения для периодического проверки культуры.

Перекрестное загрязнение:

Хотя это не так распространено, как микробное загрязнение, широко распространенное перекрестное загрязнение между многими клеточными линиями и быстро растущими клеточными линиями, таких как клетки HeLa, является явной проблемой. Получение клеточных линий от авторитетных клеточных банков, регулярно проверяя свойства клеточных линий и использование хороших асептических методов, являются обычными методами, которые помогают избежать перекрестного загрязнения.

Использование антибиотиков:

Антибиотики не должны регулярно использовать в клеточной культуре, потому что их чрезмерное использование может способствовать развитию устойчивых к антибиотикам штаммов, что приводит к постоянному низкоуровневому загрязнению. После удаления антибиотиков это низкоуровневое загрязнение может в конечном итоге превратиться в крупномасштабное загрязнение, а дальнейшее использование антибиотиков также может маскировать микоплазменные инфекции и другие типы загрязнения. Следовательно, антибиотики могут использоваться только в качестве последней среды против загрязнения и должны использоваться только в течение короткого периода времени, и их следует удалить как можно скорее.