Wie verhindern Sie eine Kontamination in der Zellkultur?

In diesem Artikel werden hauptsächlich häufige Arten der Zellverschmutzung eingeführt.

Arbeitsbereich:

1. Ist die Lüftungshaube für die Zellkultur richtig eingerichtet?

2. Gibt es in dem Bereich, in dem sich die Zellkulturbeatmeterhaube befindet, Luftströme oder direkte Einstiegskanäle?

3. Ist die Workbench sauber?

4. Wurden nur die für das Experiment erforderlichen Gegenstände auf die Workbench gestellt?

5. 
   

6. Haben Sie die Workbench vor Beginn der Arbeit mit 70% Ethanol ausgelöscht?

7. Reinigen Sie den Inkubator, den Kühlschrank, den Gefrierschrank und andere Laborgeräte regelmäßig und desinfizieren Sie regelmäßig?

Persönliche Hygiene:

1. Hast du deine Hände gewaschen?

2. Haben Sie persönliche Schutzausrüstung getragen?

3. Wenn Sie lange Haare haben, ist es dann zurückgebunden?

4. Verwenden Sie eine Pipette, um Flüssigkeiten zu behandeln?

5. Reagenzien und Kulturmedien

6. Haben Sie alle im Labor erstellten Reagenzien, Medien und Lösungen mit geeigneten Methoden sterilisiert?

7. Haben Sie ihre Äußere mit 70% Ethanol ausgelöscht, bevor Sie Behälter, Kulturflaschen, Kulturplatten und Kulturgerichte auf der Arbeitsfläche platzieren?

8. Haben Sie die Deckel von Reagenzflaschen, Kulturflaschen und anderen Behältern festgezogen, wenn Sie nicht verwendet werden?

9. Wurden alle Kulturplatten in sterile luftdichte Beutel platziert?

10. Gibt es Anzeichen von Kontaminationen in den Reagenzien wie Trübung, schwimmenden Partikeln, unangenehmen Gerüchen oder abnormalen Farben? Wenn ja, haben Sie sie gereinigt oder weggeworfen?

Betrieb:

1. Arbeiten Sie langsam, sorgfältig und achten Sie auf aseptische Techniken?

2. Haben Sie die Oberflächen von Pipetten, Reagenzflaschen und Kulturflaschen mit 70% Ethanol ausgelöscht, bevor Sie sie in die Zellkulturbeatmungshaube aufgenommen haben?

3. Haben Sie die Deckel im Arbeitsbereich nach unten gerichtet?

4. Verwenden Sie sterile Glaspipetten oder Einweg -Steril -Plastikpipetten, um Flüssigkeiten zu behandeln?

5. Verwenden Sie nur einmal sterile Pipetten, um eine Kreuzkontamination zu vermeiden?

6. Haben Sie es vermieden, die Spitze der Pipette nicht sterile Gegenstände zu berühren, einschließlich der Außenkante von Flaschenhalsfäden?

7. Wenn flüssige Verschüttungen auftreten, haben Sie ihn sofort absorbiert und die Fläche mit 70% Ethanol abgewischt?

Es ist zu beachten, dass die Platzierung und Anordnung von Gegenständen auf der super sauberen Bank sowie persönliche Hygiene wie langes Haar leicht übersehen werden. Zu viele Gegenstände auf der super sauberen Bank können den Luftstrom und den Luftdruck stören, sodass jeder Aufmerksamkeit schenken muss.

'Kennen Sie sich und Ihren Feind, und Sie werden niemals in hundert Schlachten besiegt werden. ' Wenn Sie wissen, wie Sie eine Kontamination verhindern können, müssen wir auch wissen, wie man sie identifiziert. Schließlich müssen kontaminierte Zellen umgehend verworfen werden, sonst, wenn die Verunreinigungen alle Edelsteine ​​sammeln, wird es ...

Die Kontamination der Zellkultur ist hauptsächlich in zwei Kategorien unterteilt: chemische Verunreinigungen wie Verunreinigungen in Kulturmedien, Serum und Wasser, Endotoxinen, Weichmacher und Reinigungsmitteln; und biologische Verunreinigungen wie Bakterien, Pilze, Hefe, Viren, Mycoplasma und Kreuzkontamination anderer Zelllinien.

Bakterienkontamination:

Bakterien gibt es in verschiedenen Formen wie kugelförmiger, stäbchenförmig und spiralförmig. Bakterien und Pilze zusammen sind die am häufigsten auftretenden biologischen Verunreinigungen in der Zellkultur. Wenn Zellen mit Bakterien kontaminiert sind, kann sie häufig innerhalb von ein oder zwei Tagen durch einfache Beobachtung mit dem bloßen Auge nachgewiesen werden, und der pH -Wert des Kulturmediums kann plötzlich abnehmen. Das folgende Bild zeigt 293 Zellen, die mit E. coli kontaminiert sind und als anhaftende Zellen wachsen.

Pilzkontamination:

In der anfänglichen Phase der Pilzkontamination bleibt der pH -Wert des Kulturmediums stabil, aber wenn sich die Kontamination verschlechtert, nimmt der pH -Wert schnell zu, was dazu führt, dass das Medium trüb wird. Unter dem Mikroskop erscheinen die Hyphen oft als dünne Bündel und manchmal als dichte Sporencluster. Sporen können während der Ruhezeit extrem raue und ungünstige Umgebungen standhalten. Wenn daher eine Pilzkontamination auftritt, muss die Zellen umgehend verurteilt werden, um eine großräumige Kontamination im Inkubator zu verhindern.

Hefekontamination:

Ähnlich wie bei der bakteriellen Kontamination wird das Kulturmedium bei kontaminiertem mit Hefe trüb, insbesondere während der Verunreinigung im späten Stadium. Der pH -Wert des Kulturmediums verändert sich nur sehr wenig nach der Kontamination mit Hefe und nimmt nur zu, wenn die Kontamination schwerwiegend ist. Unter dem Mikroskop erscheint Hefe als individuelle ovale oder kugelförmige Partikel, von denen einige zu Tochterzellen knospen können. Das Bild unten zeigt 293 Zellen, die mit Hefe kontaminiert sind.

Virale Kontamination:

Viren haben extrem kleine Größen, was es schwierig macht, sie aus den in der Zellkultur verwendeten Reagenzien zu erkennen und zu entfernen. Da die meisten Viren sehr strenge Anforderungen an ihre Wirte haben, haben sie im Allgemeinen keine nachteiligen Auswirkungen auf Zellkulturen von anderen Wirtsarten als ihre eigenen. Die Verwendung von mit Viren infizierten Zellkulturen kann jedoch für experimentelle Operatoren ernsthafte Gesundheitsbedrohungen darstellen.

Mycoplasma -Kontamination:

Mycoplasma gilt als der kleinste selbstreplizierende Organismus. Aufgrund seiner extrem geringen Größe ist die Erkennung von Mycoplasma sehr schwierig, und es gibt oft keine offensichtlichen Anzeichen einer Infektion, es sei denn, die Dichte ist sehr hoch. Einige Mycoplasma können in Zellkulturen sogar bestehen, ohne den Zelltod zu verursachen, aber sie können das Verhalten und den Stoffwechsel von Zellen im Kultursystem verändern. Die möglichen Manifestationen einer chronischen Mycoplasma -Infektion umfassen eine Abnahme der Zellproliferationsrate, eine Abnahme der Kerndichte und die Zellaggregation in der Suspensionskultur. Die effektivsten Methoden zur Erkennung von Mycoplasma-Kontaminationen sind Fluoreszenzfärbung, ELISA, PCR, Immunfärbung, radiologische Selbstentwicklung oder mikrobiologische Bestimmungstechniken, um die Kultur regelmäßig zu testen.

Kreuzkontamination:

Obwohl nicht so häufig wie mikrobielle Kontamination, ist die weit verbreitete Kreuzkontamination zwischen vielen Zelllinien und schnell wachsenden Zelllinien wie HeLa-Zellen ein klares Problem. Das Erhalten von Zelllinien von seriösen Zellbanken, regelmäßig die Eigenschaften von Zelllinien und die Verwendung guter aseptischer Techniken sind herkömmliche Methoden, um eine Kreuzkontamination zu vermeiden.

Verwendung von Antibiotika:

Antibiotika sollten in der Zellkultur nicht routinemäßig eingesetzt werden, da ihre Überbeanspruchung die Entwicklung von Antibiotika-resistenten Stämmen fördern kann, was zu einer anhaltenden Verunreinigung mit niedriger Ebene führt. Sobald die Antibiotika entfernt sind, kann sich diese Kontamination mit niedriger Ebene schließlich zu einer Kontamination in großem Maßstab entwickeln, und die fortgesetzte Verwendung von Antibiotika kann auch Mycoplasma-Infektionen und andere Arten der Kontamination maskieren. Daher können Antibiotika nur als letztes Mittel gegen Kontamination verwendet werden und sollten nur für kurze Zeit verwendet werden und sollten so bald wie möglich entfernt werden.