Hvordan forhindre forurensning i cellekultur?

Denne artikkelen introduserer hovedsakelig vanlige typer celleforurensning.

Arbeidsområde:

1. Er ventilasjonshetten for cellekultur satt opp riktig?

2. Er det noen luftstrømmer eller direkte inngangskanaler i området hvor cellekulturventilasjonshetten er plassert?

3. Er arbeidsbenken ren?

4. Har bare gjenstandene som kreves for eksperimentet blitt plassert på arbeidsbenken?

5. 
   

6. Har du tørket av arbeidsbenken med 70 % etanol før du starter arbeidet?

7. Rengjør og desinfiserer du inkubatoren, kjøleskapet, fryseren og annet laboratorieutstyr regelmessig?

Personlig hygiene:

1. Har du vasket hendene?

2. Har du brukt personlig verneutstyr?

3. Hvis du har langt hår, er det bundet tilbake?

4. Bruker du pipette til å håndtere væsker?

5. Reagenser og kulturmedier

6. Har du sterilisert alle reagenser, media og løsninger tilberedt i laboratoriet ved å bruke passende metoder?

7. Før du plasserer beholdere, kulturflasker, kulturplater og kulturfat på arbeidsflaten, har du tørket av utsiden med 70 % etanol?

8. Har du strammet lokkene til reagensflasker, kulturflasker og andre beholdere når de ikke er i bruk?

9. Har alle kulturplater blitt lagt i sterile, lufttette poser?

10. Er det noen tegn på forurensning i reagensene, slik som uklarhet, flytende partikler, ubehagelig lukt eller unormale farger? Hvis ja, har du renset eller kastet dem?

Operasjon:

1. Arbeider du sakte, forsiktig og tar hensyn til aseptiske teknikker?

2. Har du tørket av overflatene på pipetter, reagensflasker og kulturflasker med 70 % etanol før du plasserer dem i cellekulturventilasjonshetten?

3. Har du plassert lokkene vendt nedover i arbeidsområdet?

4. Bruker du sterile glasspipetter eller sterile engangspipetter i plast for å håndtere væsker?

5. Bruker du sterile pipetter kun én gang for å unngå krysskontaminering?

6. Har du unngått å berøre tuppen av pipetten til ikke-sterile gjenstander, inkludert den ytre kanten av flaskehalsens tråder?

7. Hvis det oppstår væskesøl, har du umiddelbart absorbert det og tørket av området med 70 % etanol?

Det skal bemerkes at plassering og arrangement av gjenstander på den superrene benken, samt personlig hygiene som langt hår, lett blir oversett. For mange gjenstander på den superrene benken kan forårsake forstyrrelser i luftstrømmen og lufttrykket, så alle må være oppmerksomme.

'Kjenn deg selv og fienden din, og du vil aldri bli beseiret i hundre kamper.' Når vi vet hvordan vi kan forhindre kontaminering, må vi også vite hvordan vi identifiserer den. Tross alt må forurensede celler kasseres umiddelbart, ellers, hvis forurensningene samler alle edelstenene, vil det være ...

Cellekulturforurensning er hovedsakelig delt inn i to kategorier: kjemiske forurensninger, slik som urenheter i kulturmedier, serum og vann, endotoksiner, myknere og vaskemidler; og biologiske forurensninger, slik som bakterier, sopp, gjær, virus, mykoplasma og krysskontaminering av andre cellelinjer.

Bakteriell forurensning:

Bakterier kommer i forskjellige former, for eksempel sfæriske, stavformede og spiralformede. Bakterier og sopp utgjør sammen de mest vanlige biologiske forurensningene i cellekultur. Når celler er forurenset med bakterier, kan det ofte oppdages i løpet av én eller to dager ved enkel observasjon med det blotte øye, og pH-verdien til dyrkingsmediet kan plutselig synke. Bildet nedenfor viser 293 celler kontaminert med E. coli og vokser som adherente celler.

Soppforurensning:

I det innledende stadiet av soppkontaminering forblir pH i kulturmediet stabil, men etter hvert som forurensningen forverres, øker pH raskt, noe som gjør at mediet blir uklart. Under mikroskopet vises hyfene ofte som tynne bunter, og noen ganger som tette klynger av sporer. Sporer tåler ekstremt tøffe og ugunstige miljøer under dvale. Derfor, når det oppstår soppkontaminering, er det nødvendig å kaste cellene umiddelbart for å forhindre storskala forurensning i inkubatoren.

Gjærforurensning:

I likhet med bakteriell forurensning, blir kulturmediet grumset når det forurenses med gjær, spesielt under sent stadium forurensning. pH i kulturmediet endres svært lite etter forurensning med gjær, og øker kun når forurensningen er alvorlig. Under mikroskopet fremstår gjær som individuelle ovale eller sfæriske partikler, hvorav noen kan spire til datterceller. Bildet nedenfor viser 293 celler forurenset med gjær.

Viral kontaminering:

Virus har ekstremt små størrelser, noe som gjør det vanskelig å oppdage og fjerne dem fra reagensene som brukes i cellekultur. Ettersom de fleste virus har svært strenge krav til vertene sine, har de generelt ikke uheldige effekter på cellekulturer fra andre vertsarter enn deres egen. Imidlertid kan bruk av cellekulturer infisert med virus utgjøre alvorlige helsetrusler for eksperimentelle operatører.

Mykoplasma forurensning:

Mycoplasma regnes som den minste selvreplikerende organismen. På grunn av den ekstremt lille størrelsen er det svært vanskelig å oppdage mykoplasma, og det er ofte ingen tydelige tegn på infeksjon med mindre tettheten er veldig høy. Noen mykoplasma kan til og med vedvare i cellekulturer uten å forårsake celledød, men de kan endre oppførselen og metabolismen til cellene i kultursystemet. De mulige manifestasjonene av kronisk mykoplasmainfeksjon inkluderer en reduksjon i celleproliferasjonshastighet, en reduksjon i kjernefysisk tetthet og celleaggregering i suspensjonskultur. De mest effektive metodene for å oppdage mykoplasma-kontaminering er fluorescensfarging, ELISA, PCR, immunfarging, radiografisk selvutvikling eller mikrobiologiske bestemmelsesteknikker for periodisk testing av kulturen.

Krysskontaminering:

Selv om det ikke er så vanlig som mikrobiell forurensning, er utbredt krysskontaminering mellom mange cellelinjer og raskt voksende cellelinjer som HeLa-celler et klart problem. Å skaffe cellelinjer fra anerkjente cellebanker, regelmessig sjekke egenskapene til cellelinjer og bruke gode aseptiske teknikker er konvensjonelle metoder for å unngå krysskontaminering.

Bruk av antibiotika:

Antibiotika bør ikke brukes rutinemessig i cellekultur fordi overforbruk av dem kan fremme utviklingen av antibiotikaresistente stammer, noe som fører til vedvarende lavt nivå forurensning. Når antibiotika først er fjernet, kan denne forurensningen på lavt nivå etter hvert utvikle seg til forurensning i stor skala, og fortsatt bruk av antibiotika kan også maskere mykoplasmainfeksjoner og andre typer kontaminering. Derfor kan antibiotika kun brukes som en siste utvei mot kontaminering og bør kun brukes i en kort periode, og bør fjernes så snart som mulig.