Hvordan forhindre forurensning i cellekultur?

Denne artikkelen introduserer hovedsakelig vanlige typer celleforurensning.

Arbeidsområde:

1. Er ventilasjonshetten for cellekultur satt opp riktig?

2. Er det noen luftstrøm eller direkte inngangskanaler i området der cellekulturventilasjonshetten ligger?

3. Er arbeidsbenken ren?

4. Har bare varene som kreves for eksperimentet blitt plassert på arbeidsbenken?

5. 
   

6. Har du tørket arbeidsbenken med 70% etanol før du startet arbeidet?

7. Rengjør du regelmessig og desinfiserer inkubatoren, kjøleskapet, fryseren og annet laboratorieutstyr?

Personlig hygiene:

1. Har du vasket hendene?

2. Har du brukt personlig verneutstyr?

3. Hvis du har langt hår, er det bundet tilbake?

4. Bruker du en pipette for å håndtere væsker?

5. Reagenser og kulturmedier

6. Har du sterilisert alle reagenser, medier og løsninger fremstilt i laboratoriet ved hjelp av passende metoder?

7. Før du plasserer containere, kulturflasker, kulturplater og kulturretter på arbeidsoverflaten, har du tørket deres ytre med 70% etanol?

8. Har du strammet lokkene med reagensflasker, kulturflasker og andre containere når de ikke er i bruk?

9. Har alle kulturplater blitt plassert i sterile, lufttette poser?

10. Er det noen tegn på forurensning i reagensene, for eksempel skyhet, flytende partikler, ubehagelige lukt eller unormale farger? I så fall, har du renset eller kastet dem?

Operasjon:

1. Opererer du sakte, nøye og legger merke til aseptiske teknikker?

2. Har du tørket overflatene til pipetter, reagensflasker og kulturflasker med 70% etanol før du plasserer dem i cellekulturventilasjonshetten?

3. Har du plassert lokkene som vender nedover i arbeidsområdet?

4. Bruker du sterile glasspipetter eller engangs sterile plastpipetter for å håndtere væsker?

5. Bruker du sterile pipetter bare en gang for å unngå kryssforurensning?

6. Har du unngått å berøre spissen av pipetten til noen ikke-sterile gjenstander, inkludert ytterkanten av flaskehalstråder?

7. Hvis væskeutslipp oppstår, har du umiddelbart absorbert det og tørket området med 70% etanol?

Det skal bemerkes at plassering og arrangement av gjenstander på den superrene benken, så vel som personlig hygiene som langt hår, lett blir oversett. For mange gjenstander på den superrene benken kan forårsake forstyrrelser i luftstrømmen og lufttrykket, så alle trenger å ta hensyn.

'Kjenn deg selv og fienden din, og du vil aldri bli beseiret i hundre kamper. ' Når du vet hvordan du kan forhindre forurensning, må vi også vite hvordan vi skal identifisere det. Tross alt må forurensede celler kastes omgående, ellers, hvis forurensningene samler alle perlene, vil det være ...

Cellekulturforurensning er hovedsakelig delt inn i to kategorier: kjemiske forurensninger, for eksempel urenheter i kulturmedier, serum og vann, endotoksiner, myknere og vaskemidler; og biologiske forurensninger, som bakterier, sopp, gjær, virus, mycoplasma og kryssforurensning av andre cellelinjer.

Bakteriell forurensning:

Bakterier kommer i forskjellige former, for eksempel sfærisk, stavformet og spiralformet. Bakterier og sopp utgjør sammen de mest oppståtte biologiske forurensningene i cellekultur. Når celler er forurenset med bakterier, kan det ofte oppdages i løpet av en eller to dager ved enkel observasjon med det blotte øye, og pH -verdien til kulturmediet kan plutselig avta. Bildet nedenfor viser 293 celler forurenset med E. coli og vokser som adherende celler.

Soppforurensning:

I det innledende stadiet av soppforurensning, forblir pH i kulturmediet stabilt, men når forurensningen forverres, øker pH raskt, noe som får mediet til å bli grumsete. Under mikroskopet fremstår hyfer ofte som tynne bunter, og noen ganger som tette klynger av sporer. Sporer tåler ekstremt tøffe og ugunstige miljøer under dvale. Derfor, når soppforurensning oppstår, er det nødvendig å kaste cellene for å forhindre storskala forurensning i inkubatoren.

Gjærforurensning:

I likhet med bakteriell forurensning, blir kulturmediet grumsete når det er forurenset med gjær, spesielt under forurensning av sent stadium. PH i kulturmediet endres veldig lite etter forurensning med gjær, og øker bare når forurensningen er alvorlig. Under mikroskopet fremstår gjær som individuelle ovale eller sfæriske partikler, hvorav noen kan knuse inn i datterceller. Bildet nedenfor viser 293 celler forurenset med gjær.

Viral forurensning:

Virus har ekstremt små størrelser, noe som gjør det vanskelig å oppdage og fjerne dem fra reagensene som brukes i cellekultur. Ettersom de fleste virus har veldig strenge krav til vertene sine, har de vanligvis ikke bivirkninger på cellekulturer fra andre arter enn sine egne. Imidlertid kan bruk av cellekulturer infisert med virus utgjøre alvorlige helsetrusler mot eksperimentelle operatører.

Mycoplasma -forurensning:

Mycoplasma regnes som den minste selvreplikerende organismen. På grunn av sin ekstremt liten størrelse er deteksjon av mycoplasma veldig vanskelig, og det er ofte ingen åpenbare tegn på infeksjon med mindre tettheten er veldig høy. Noe mycoplasma kan til og med vedvare i cellekulturer uten å forårsake celledød, men de kan endre atferden og metabolismen til celler i kultursystemet. De mulige manifestasjonene av kronisk mycoplasma -infeksjon inkluderer en reduksjon i celleproliferasjonshastighet, en reduksjon i kjernetetthet og celleaggregering i suspensjonskultur. De mest effektive metodene for å oppdage mycoplasma-forurensning er fluorescensfarging, ELISA, PCR, immunfarging, radiografisk selvutvikling eller mikrobiologiske bestemmelsesteknikker for periodisk å teste kulturen.

Kryssforurensning:

Selv om det ikke er så vanlig som mikrobiell forurensning, er utbredt kryssforurensning mellom mange cellelinjer og raskt voksende cellelinjer som HeLa-celler et klart problem. Å skaffe cellelinjer fra anerkjente cellebanker, regelmessig sjekke egenskapene til cellelinjer, og bruke gode aseptiske teknikker er konvensjonelle metoder for å unngå kryssforurensning.

Bruk av antibiotika:

Antibiotika skal ikke rutinemessig brukes i cellekultur fordi deres overforbruk kan fremme utviklingen av antibiotikaresistente stammer, noe som fører til vedvarende forurensning på lavt nivå. Når antibiotika er fjernet, kan denne forurensningen på lavt nivå til slutt utvikle seg til storskala forurensning, og fortsatt bruk av antibiotika kan også maskere mycoplasma-infeksjoner og andre typer forurensning. Derfor kan antibiotika bare brukes som en siste utvei mot forurensning og bør bare brukes i en kort periode, og bør fjernes så snart som mulig.