Како спречити контаминацију у ћелијској култури?

Овај чланак углавном представља уобичајене врсте контаминације ћелија.

Радна област:

1. Да ли је вентилациони поклопац за ћелијску културу правилно постављен?

2. Да ли постоје проток ваздуха или канали за директан улаз у области где се налази вентилациони поклопац ћелијске културе?

3. Да ли је радни сто чист?

4. Да ли су на радном столу постављени само предмети потребни за експеримент?

5. 
   

6. Да ли сте пре почетка рада обрисали радни сто са 70% етанола?

7. Да ли редовно чистите и дезинфикујете инкубатор, фрижидер, замрзивач и другу лабораторијску опрему?

Лична хигијена:

1. Јесте ли опрали руке?

2. Да ли сте носили личну заштитну опрему?

3. Ако имате дугу косу, да ли је везана уназад?

4. Да ли користите пипету за руковање течностима?

5. Реагенси и подлоге за културу

6. Да ли сте стерилисали све реагенсе, медијуме и растворе припремљене у лабораторији одговарајућим методама?

7. Пре него што ставите контејнере, боце за културу, плоче за културу и посуде за културу на радну површину, да ли сте обрисали њихову спољашњост са 70% етанолом?

8. Да ли сте затегли поклопце боца са реагенсима, боцама за културу и другим контејнерима када нису у употреби?

9. Да ли су све плоче за културу стављене у стерилне, херметички затворене кесе?

10. Да ли постоје знаци контаминације у реагенсима, као што су замућеност, плутајуће честице, непријатни мириси или абнормалне боје? Ако јесте, да ли сте их очистили или одбацили?

Операција:

1. Да ли радите полако, пажљиво и обраћате пажњу на асептичне технике?

2. Да ли сте обрисали површине пипета, боца са реагенсима и боца за културу са 70% етанола пре него што сте их ставили у вентилациони поклопац за културу ћелија?

3. Да ли сте у радном простору поставили поклопце окренуте надоле?

4. Да ли користите стерилне стаклене пипете или пластичне пипете за једнократну употребу за руковање течностима?

5. Да ли користите стерилне пипете само једном да бисте избегли унакрсну контаминацију?

6. Да ли сте избегавали да додирујете врх пипете било које нестерилне предмете, укључујући спољну ивицу навоја на врату боце?

7. Ако дође до проливања течности, да ли сте је одмах апсорбовали и обрисали подручје са 70% етанола?

Треба напоменути да се постављање и распоред предмета на супер чистој клупи, као и лична хигијена попут дуге косе, лако занемарују. Превише предмета на супер чистој клупи може изазвати сметње у протоку ваздуха и ваздушном притиску, тако да сви треба да обрате пажњу.

'Упознај себе и свог непријатеља, и никада нећеш бити поражен у сто битака.' Знајући како да спречимо контаминацију, морамо да знамо и како да је идентификујемо. На крају крајева, контаминиране ћелије треба одмах да се одбаце, у супротном, ако загађивачи сакупе све драгуље, биће...

Контаминација ћелијском културом се углавном дели у две категорије: хемијски загађивачи, као што су нечистоће у медијуму за културу, серум и вода, ендотоксини, пластификатори и детерџенти; и биолошки загађивачи, као што су бактерије, гљиве, квасац, вируси, микоплазма и унакрсна контаминација других ћелијских линија.

Бактеријска контаминација:

Бактерије долазе у различитим облицима, као што су сферни, штапићасти и спирални. Бактерије и гљиве заједно чине биолошке загађиваче који се најчешће срећу у ћелијској култури. Када су ћелије контаминиране бактеријама, то се често може открити у року од једног или два дана једноставним посматрањем голим оком, а пХ вредност медијума за културу може нагло да се смањи. Слика испод приказује 293 ћелије контаминиране са Е. цоли и које расту као адхерентне ћелије.

Гљивична контаминација:

У почетној фази гљивичне контаминације, пХ медијума културе остаје стабилан, али како се контаминација погоршава, пХ се брзо повећава, што доводи до замућења медијума. Под микроскопом, хифе се често појављују као танки снопови, а понекад и као густи скупови спора. Споре могу да издрже изузетно оштра и неповољна окружења током мировања. Стога, када дође до гљивичне контаминације, неопходно је одмах одбацити ћелије како би се спречила контаминација великих размера у инкубатору.

Контаминација квасцем:

Слично бактеријској контаминацији, медијум за културу постаје мутан када је контаминиран квасцем, посебно током контаминације у касној фази. пХ медијума за културу се веома мало мења након контаминације квасцем и само се повећава када је контаминација озбиљна. Под микроскопом, квасац се појављује као појединачне овалне или сферичне честице, од којих неке могу да пупоље у ћерке ћелије. Слика испод приказује 293 ћелије контаминиране квасцем.

Вирусна контаминација:

Вируси имају изузетно мале величине, што отежава њихово откривање и уклањање из реагенаса који се користе у ћелијској култури. Како већина вируса има веома строге захтеве за своје домаћине, они генерално немају штетне ефекте на ћелијске културе других врста домаћина осим њихових. Међутим, употреба ћелијских култура заражених вирусима може представљати озбиљне здравствене претње за експерименталне оператере.

Контаминација микоплазмом:

Микоплазма се сматра најмањим организмом који се самореплицира. Због изузетно мале величине, откривање микоплазме је веома тешко и често нема очигледних знакова инфекције осим ако је густина веома велика. Неке микоплазме могу чак да опстану у ћелијским културама без изазивања ћелијске смрти, али могу да промене понашање и метаболизам ћелија у систему културе. Могуће манифестације хроничне инфекције микоплазмама укључују смањење стопе пролиферације ћелија, смањење нуклеарне густине и агрегацију ћелија у култури суспензије. Најефикасније методе за откривање контаминације микоплазмом су флуоресцентно бојење, ЕЛИСА, ПЦР, имунобојење, радиографски саморазвој или технике микробиолошког одређивања за периодично тестирање културе.

Унакрсна контаминација:

Иако није тако уобичајена као микробна контаминација, раширена унакрсна контаминација између многих ћелијских линија и брзо растућих ћелијских линија као што су ХеЛа ћелије је јасан проблем. Добијање ћелијских линија из реномираних ћелијских банака, редовна провера својстава ћелијских линија и коришћење добрих асептичких техника су конвенционалне методе које помажу у избегавању унакрсне контаминације.

Употреба антибиотика:

Антибиотици не би требало да се рутински користе у ћелијској култури јер њихова прекомерна употреба може подстаћи развој сојева отпорних на антибиотике, што доводи до упорне контаминације ниског нивоа. Када се антибиотици уклоне, ова контаминација ниског нивоа може на крају да се развије у контаминацију великих размера, а наставак употребе антибиотика такође може прикрити инфекције микоплазме и друге врсте контаминације. Због тога се антибиотици могу користити само као последње средство против контаминације и треба их користити само у кратком временском периоду и треба их уклонити што је пре могуће.