Како спречити контаминацију у ћелијској култури?

Овај чланак углавном уводи заједничке врсте контаминације ћелије.

Радна површина:

1. Да ли је вентилациона капуљача за ћелијску културу правилно постављена?

2. Постоје ли ваздушни протокови или директни улазни канали у околини у којима се налази капуљача за вентилацију ћелијске културе?

3. Да ли је радна плоча чиста?

4. Да ли су потребни само ставке потребне за експеримент на радном месту?

5. 
   

6. Да ли сте обрисали раду са 70% етанолом пре него што започнете посао?

7. Да ли редовно чистите и дезинфицирајте инкубатор, фрижидер, замрзивач и другу лабораторијску опрему?

Лична хигијена:

1. Јесте ли испрали руке?

2. Да ли сте носили личну заштитну опрему?

3. Ако имате дугу косу, да ли је везан назад?

4. Да ли користите пипету за руковање течностима?

5. Реагенси и медији за културу

6. Да ли сте стерилизирали све реагенсе, медије и решења припремљене у лабораторији користећи одговарајуће методе?

7. Пре постављања контејнера, културне боце, културне таблице и културне посуде на радну површину, да ли сте обрисали своје екстеријере са 70% етанолом?

8. Да ли сте пооштрили поклопце боца са реагенсима, боца за културу и друге контејнере када се не користи?

9. Да ли су све културне плоче смештене у стерилне, херметичке кесе?

10. Постоје ли знакови контаминације у реагенсима, попут облачности, плутајуће честице, непријатни мириси или ненормалне боје? Ако је тако, да ли сте их очистили или одбацили?

Рад:

1. Да ли радите полако, пажљиво и обраћајте пажњу на асептичне технике?

2. Да ли сте обрисали површине пипета, боца са реагенсима и култури боца са 70% етанола пре него што их ставите у капуљач са ћелијом?

3. Да ли сте поставили поклопце окренуте према доле у ​​радном подручју?

4. Да ли користите стерилне стаклене пипете или за једнократну стерилну пластичну пипете за руковање течностима?

5. Да ли користите стерилне пипете само једном да бисте избегли унакрсно контаминацију?

6. Да ли сте избегли додиривање врха пипете на било које нестерилне ставке, укључујући спољну ивицу нити за боце?

7. Ако се појаве течно изливање, да ли сте га одмах апсорбовали и обрисали подручје са 70% етанолом?

Треба напоменути да се постављање и распоред предмета на супер чистом клупи, као и лична хигијена попут дуге косе, лако се превиде. Превише предмета на супер чистом клупи може проузроковати сметње на протоку ваздуха и притиска ваздуха, тако да сви морају да обрати пажњу.

'Познајте сами и свој непријатеља, и никада нећете бити поражени у сто богатима. ' Знајући како да спречите контаминацију, такође морамо да знамо како да га идентификујемо. Након свих, контаминиране ћелије морају се одмах одбацити, у супротном, ако контаминанти сакупе све драгуље, то ће бити ...

Контаминација ћелијске културе углавном је подељена у две категорије: хемијски контаминант, као што су нечистоће у медијима, серуму и води, ендотоксини, пластификатори и детерџенти; и биолошки контаминанти, као што су бактерије, гљивице, квасце, вируси, микоплазми и унакрсна контаминација других ћелијских линија.

Бактеријска контаминација:

Бактерије долазе у разним облицима, као што су сферични, облик у облику шипке и спирале. Бактерије и гљивице заједно чине најчешће наишле на биолошке контаминације у ћелијској култури. Када су ћелије контаминиране бактеријама, често се може открити у року од једног или два дана једноставним посматрањем голим оком, а пХ вредност културе медијума може се изненада смањити. Слика испод приказује 293 ћелије контаминирана Е. цоли и расте као придржавање ћелија.

Гружана контаминација:

У почетној фази контаминације гљивица, пХ културни медијум остаје стабилан, али као што се контаминација погоршала, пХ се брзо повећава, узрокујући да медија задршка да постане забијен. Под микроскопом се хифае често појављују као танки снопови, а понекад и густи гроздови спора. Споре могу да издрже изузетно оштре и неповољна окружења током успаваности. Стога, када се догоди контаминација гљивица, потребно је одмах да одбаците ћелије да спрече ограничење великих размера у инкубатору.

Контаминација квасца:

Слично као и контаминација бактерија, култура медијум постаје мутан када је контаминиран квасцу, посебно током контаминације касне фазе. ПХ културне медијуме се врло мало пролази након контаминације квасца и само се повећава када је контаминација озбиљна. Под микроскопом се квас појављује као појединачне овалне или сферне честице, од којих неки могу да се пупољци у ћерке. Слика испод приказује 293 ћелије контаминирана квасцама.

Вирусна контаминација:

Вируси имају изузетно мале величине, што их је отежало откривање и уклањање из реагенса који се користе у ћелијској култури. Како већина вируса има веома строге захтеве за њихове домаћине, они углавном немају штетне ефекте на ћелијске културе од врста домаћина осим њихове сопствене. Међутим, употреба ћелијских култура заражених вирусима може представљати озбиљне здравствене претње експерименталним оператерима.

Контаминација микоплазме:

Мицопласма се сматра најмањим репликалним организмом. Због своје изузетно мале величине, откривање микоплазме је веома тешко и често нема очигледних знакова инфекције, осим ако густина није веома висока. Неки микоплазми могу чак и да истрају у ћелијским културама без изазивања ћелијске смрти, али могу да измене понашање и метаболизам ћелија у систему културе. Могуће манифестације хроничне микоплазме инфекције укључују смањење стопе пролиферације ћелије, смањење нуклеарне густине и ћелијске агрегације у култури суспензије. Најефикасније методе за откривање контаминације микоплазма су флуоресцентни бојитељ, ЕЛИСА, ПЦР, ИМУНОСТИНСКО, РАДИОграфски саморазвој или микробиолошке технике одређивања да тестирају културу.

Укрштеност:

Иако није уобичајено као микробна контаминација, широко распрострањеност између многих ћелијских линија и брзо растуће ћелијске линије као што су ћелије Хелла је јасан проблем. Добијање ћелијских линија од угледних ћелијских банака, редовно проверава својства ћелијских линија и коришћење добрих асептичних техника је конвенционалне методе које помажу у избегавању унакрсне контаминације.

Употреба антибиотика:

Антибиотици се не смеју рутински користити у ћелијској култури јер њихов преоптерећење може промовисати развој сојева отпорних на антибиотик, што доводи до трајне контаминације ниског нивоа. Једном када се уклањају антибиотици, ова ниска контаминација на крају се може на крају развити у ограничење у великој мери, а континуирана употреба антибиотика такође може маскирати микоплазме инфекције и друге врсте контаминације. Стога се антибиотици могу користити само као крајње средство против контаминације и требало би да се користи само у кратком временском периоду и треба их уклонити што је пре могуће.