Hur förhindrar man kontaminering i cellkultur?

Den här artikeln introducerar huvudsakligen vanliga typer av cellkontamination.

Arbetsområde:

1. Är ventilationshuven för cellodling korrekt inställd?

2. Finns det några luftflöden eller direkta ingångskanaler i området där cellodlingsventilationshuven finns?

3. Är arbetsbänken ren?

4. Har bara de föremål som krävs för experimentet placerats på arbetsbänken?

5. 
   

6. Har du torkat av arbetsbänken med 70 % etanol innan du påbörjade arbetet?

7. Rengör och desinficerar du regelbundet inkubatorn, kylen, frysen och annan laboratorieutrustning?

Personlig hygien:

1. Har du tvättat händerna?

2. Har du burit personlig skyddsutrustning?

3. Om du har långt hår, är det bundet tillbaka?

4. Använder du en pipett för att hantera vätskor?

5. Reagens och odlingsmedia

6. Har du steriliserat alla reagenser, media och lösningar beredda i laboratoriet med lämpliga metoder?

7. Innan du placerar behållare, odlingsflaskor, odlingsplattor och odlingsfat på arbetsytan, har du torkat av deras utsida med 70 % etanol?

8. Har du dragit åt locken på reagensflaskor, odlingsflaskor och andra behållare när de inte används?

9. Har alla odlingsplattor lagts i sterila, lufttäta påsar?

10. Finns det några tecken på kontaminering i reagenserna, såsom grumlighet, flytande partiklar, obehagliga lukter eller onormala färger? Om så är fallet, har du rengjort eller kasserat dem?

Drift:

1. Arbetar du långsamt, försiktigt och uppmärksammar aseptiska tekniker?

2. Har du torkat av ytorna på pipetter, reagensflaskor och odlingsflaskor med 70 % etanol innan du placerar dem i cellodlingsventilationshuven?

3. Har du placerat locken nedåt i arbetsområdet?

4. Använder du sterila glaspipetter eller sterila engångspipetter av plast för att hantera vätskor?

5. Använder du sterila pipetter endast en gång för att undvika korskontaminering?

6. Har du undvikit att röra pipettens spets mot icke-sterila föremål, inklusive den yttre kanten av flaskhalsens trådar?

7. Om vätskespill inträffar, har du omedelbart absorberat det och torkat av området med 70 % etanol?

Det bör noteras att placeringen och arrangemanget av föremål på den superrena bänken, såväl som personlig hygien som långt hår, lätt förbises. För många föremål på den superrena bänken kan orsaka störningar i luftflödet och lufttrycket, så alla måste vara uppmärksamma.

'Känn dig själv och din fiende, och du kommer aldrig att besegras i hundra strider.' Vi vet hur vi kan förhindra kontaminering och vi måste också veta hur vi identifierar den. När allt kommer omkring måste förorenade celler kasseras omedelbart, annars, om föroreningarna samlar alla ädelstenar, kommer det att bli...

Cellkulturkontamination delas huvudsakligen in i två kategorier: kemiska föroreningar, såsom föroreningar i odlingsmedier, serum och vatten, endotoxiner, mjukgörare och rengöringsmedel; och biologiska föroreningar, såsom bakterier, svampar, jäst, virus, mykoplasma och korskontaminering av andra cellinjer.

Bakteriell kontaminering:

Bakterier finns i olika former, såsom sfäriska, stavformade och spiralformade. Bakterier och svampar utgör tillsammans de vanligast förekommande biologiska föroreningarna i cellodling. När celler är kontaminerade med bakterier kan det ofta upptäckas inom en eller två dagar genom enkel observation med blotta ögat och odlingsmediets pH-värde kan plötsligt minska. Bilden nedan visar 293 celler kontaminerade med E. coli och växer som vidhäftande celler.

Svampkontamination:

I det inledande skedet av svampkontamination förblir odlingsmediets pH stabilt, men när kontamineringen förvärras ökar pH snabbt, vilket gör att mediet blir grumligt. Under mikroskopet uppträder hyferna ofta som tunna knippen, och ibland som täta hopar av sporer. Sporer tål extremt hårda och ogynnsamma miljöer under vila. Därför, när svampkontamination inträffar, är det nödvändigt att omedelbart kassera cellerna för att förhindra storskalig kontaminering i inkubatorn.

Jästförorening:

I likhet med bakteriell kontaminering blir odlingsmediet grumligt när det är förorenat med jäst, särskilt under föroreningar i sent skede. Odlingsmediets pH förändras mycket lite efter kontaminering med jäst, och ökar endast när föroreningen är allvarlig. Under mikroskopet uppträder jäst som individuella ovala eller sfäriska partiklar, av vilka en del kan knoppa in i dotterceller. Bilden nedan visar 293 celler kontaminerade med jäst.

Viral kontaminering:

Virus har extremt små storlekar, vilket gör det svårt att upptäcka och ta bort dem från de reagenser som används i cellodling. Eftersom de flesta virus har mycket strikta krav på sina värdar, har de i allmänhet inga negativa effekter på cellkulturer från andra värdarter än deras egen. Användningen av cellkulturer infekterade med virus kan dock utgöra allvarliga hälsohot för experimentella operatörer.

Mykoplasmakontamination:

Mykoplasma anses vara den minsta självreplikerande organismen. På grund av dess extremt lilla storlek är det mycket svårt att upptäcka mykoplasma, och det finns ofta inga uppenbara tecken på infektion om inte tätheten är mycket hög. En del mykoplasma kan till och med kvarstå i cellkulturer utan att orsaka celldöd, men de kan förändra beteendet och metabolismen hos celler i odlingssystemet. De möjliga manifestationerna av kronisk mykoplasmainfektion inkluderar en minskning av cellproliferationshastigheten, en minskning av kärndensitet och cellaggregation i suspensionskultur. De mest effektiva metoderna för att upptäcka mykoplasmakontamination är fluorescensfärgning, ELISA, PCR, immunfärgning, radiografisk självutveckling eller mikrobiologiska bestämningstekniker för att periodiskt testa kulturen.

Korskontaminering:

Även om det inte är lika vanligt som mikrobiell kontaminering, är utbredd korskontamination mellan många cellinjer och snabbt växande cellinjer som HeLa-celler ett tydligt problem. Att skaffa cellinjer från välrenommerade cellbanker, regelbundet kontrollera egenskaperna hos cellinjer och använda bra aseptiska tekniker är konventionella metoder för att undvika korskontaminering.

Användning av antibiotika:

Antibiotika bör inte rutinmässigt användas i cellodling eftersom överanvändning av dem kan främja utvecklingen av antibiotikaresistenta stammar, vilket leder till ihållande förorening på låg nivå. När antibiotika väl har tagits bort kan denna lågnivåkontamination så småningom utvecklas till storskalig kontaminering, och fortsatt användning av antibiotika kan också maskera mykoplasmainfektioner och andra typer av kontaminering. Därför kan antibiotika endast användas som en sista utväg mot kontaminering och bör endast användas under en kort tidsperiod, och bör tas bort så snart som möjligt.