Visningar: 0 Författare: Webbplatsredaktör Publicera tid: 2023-07-04 Ursprung: Plats
Den här artikeln introducerar huvudsakligen vanliga typer av cellföroreningar.
Arbetsområde:
Är ventilationshuven för cellkultur inställd korrekt?
Finns det några luftflöden eller direkta inträdeskanaler i området där cellkulturventilationshuven finns?
Är arbetsbänken ren?
Har du bara de artiklar som krävs för experimentet har placerats på arbetsbänken?
Har du torkat arbetsbänken med 70% etanol innan du börjar arbeta?
Rengör och desinficerar du regelbundet inkubatorn, kylskåpet, frysen och annan laboratorieutrustning?
Personlig hygien:
Har du tvättat händerna?
Har du bär personlig skyddsutrustning?
Om du har långt hår, är det bundet tillbaka?
Använder du en pipett för att hantera vätskor?
Reagens och kulturmedium
Har du steriliserat alla reagens, media och lösningar tillagade i laboratoriet med lämpliga metoder?
Innan du placerar behållare, odlingsflaskor, odlingsplattor och odlingsrätter på arbetsytan, har du torkat deras exteriörer med 70% etanol?
Har du skärpat locken med reagensflaskor, odlingsflaskor och andra containrar när du inte används?
Har alla odlingsplattor placerats i sterila, lufttäta påsar?
Finns det några tecken på föroreningar i reagensen, såsom molnighet, flytande partiklar, obehagliga luktar eller onormala färger? Om så är fallet, har du rengjort eller kastat dem?
Drift:
Arbetar du långsamt, noggrant och uppmärksam på aseptiska tekniker?
Har du torkat ytorna på pipetter, reagensflaskor och odlingsflaskor med 70% etanol innan du placerar dem i cellkulturventilationshuven?
Har du placerat locken mot nedåt i arbetsområdet?
Använder du sterila glaspipetter eller engångs sterila plastpipetter för att hantera vätskor?
Använder du sterila pipetter bara en gång för att undvika korsföroreningar?
Har du undvikit att röra vid spetsen på pipetten till några icke-sterila föremål, inklusive den yttre kanten på flaskhalstrådar?
Om flytande spill inträffar, har du omedelbart absorberat det och torkat området med 70% etanol?
Det bör noteras att placeringen och arrangemanget av föremål på den superrena bänken, såväl som personlig hygien som långt hår, lätt förbises. För många föremål på den superrengöringsbänken kan orsaka störningar i luftflödet och lufttrycket, så alla måste vara uppmärksamma.
'Känner dig själv och din fiende, så kommer du aldrig att besegras i hundra strider. ' När vi vet hur man kan förhindra förorening måste vi också veta hur du identifierar det. När allt kommer omkring måste förorenade celler kasseras snabbt, annars, om föroreningarna samlar in alla ädelstenar, kommer det att vara ...
Cellkulturföroreningar är huvudsakligen uppdelat i två kategorier: kemiska föroreningar, såsom föroreningar i odlingsmedier, serum och vatten, endotoxiner, mjukgörare och tvättmedel; och biologiska föroreningar, såsom bakterier, svampar, jäst, virus, mycoplasma och korskontaminering av andra cellinjer.
Bakteriell förorening:
Bakterier finns i olika former, såsom sfärisk, stångformad och spiralformad. Bakterier och svampar utgör tillsammans de vanligaste biologiska föroreningarna i cellkultur. När cellerna är förorenade med bakterier kan det ofta detekteras inom en eller två dagar genom enkel observation med blotta ögat, och pH -värdet på odlingsmediet kan plötsligt minska. Bilden nedan visar 293 celler förorenade med E. coli och växer som vidhäftande celler.
Svampföroreningar:
I det initiala stadiet av svampföroreningar förblir pH för odlingsmediet stabilt, men när föroreningen förvärras ökar pH snabbt, vilket gör att mediet blir grumligt. Under mikroskopet förekommer hyferna ofta som tunna buntar och ibland som täta kluster av sporer. Sporer tål extremt hårda och ogynnsamma miljöer under vila. Därför, när svampföroreningar inträffar, är det nödvändigt att snabbt kasta cellerna för att förhindra storskalig förorening i inkubatorn.
Jästföroreningar:
I likhet med bakteriell kontaminering blir odlingsmediet grumligt när det förorenas med jäst, särskilt under förorening av sena. Kulturmedelsens pH förändras mycket lite efter förorening med jäst och ökar endast när föroreningen är allvarlig. Under mikroskopet framträder jäst som enskilda ovala eller sfäriska partiklar, av vilka några kan knoppas in i dotterceller. Bilden nedan visar 293 celler förorenade med jäst.
Viral förorening:
Virus har extremt små storlekar, vilket gör det svårt att upptäcka och ta bort dem från reagensen som används i cellkulturen. Eftersom de flesta virus har mycket strikta krav för sina värdar har de i allmänhet inte negativa effekter på cellkulturer från andra värdarter än sina egna. Användningen av cellkulturer som är infekterade med virus kan emellertid utgöra allvarliga hälsohot mot experimentella operatörer.
Mycoplasma -kontaminering:
Mycoplasma anses vara den minsta självreplikerande organismen. På grund av dess extremt lilla storlek är detektering av mycoplasma mycket svårt, och det finns ofta inga uppenbara tecken på infektion om inte densiteten är mycket hög. Vissa mycoplasma kan till och med fortsätta i cellkulturer utan att orsaka celldöd, men de kan förändra beteendet och metabolismen hos celler i kultursystemet. De möjliga manifestationerna av kronisk mycoplasma -infektion inkluderar en minskning av cellproliferationshastigheten, en minskning av kärntäthet och cellaggregering i suspensionskultur. De mest effektiva metoderna för att detektera mycoplasma-kontaminering är fluorescensfärgning, ELISA, PCR, immunfärgning, radiografisk självutveckling eller mikrobiologisk bestämningstekniker för att regelbundet testa kulturen.
Korskontaminering:
Även om det inte är lika vanligt som mikrobiell förorening, är utbredd korskontaminering mellan många cellinjer och snabbt växande cellinjer som HeLa-celler ett tydligt problem. Att få cellinjer från ansedda cellbanker, regelbundet kontrollera egenskaperna hos cellinjer och använda goda aseptiska tekniker är konventionella metoder för att undvika korsföroreningar.
Användning av antibiotika:
Antibiotika bör inte rutinmässigt användas i cellkultur eftersom deras överanvändning kan främja utvecklingen av antibiotikaresistenta stammar, vilket leder till ihållande lågnivåföroreningar. När antibiotika har tagits bort kan denna låga nivå föroreningar så småningom utvecklas till storskalig förorening, och fortsatt användning av antibiotika kan också maskera mycoplasma-infektioner och andra typer av föroreningar. Därför kan antibiotika endast användas som en sista utväg mot förorening och bör endast användas under en kort tid och bör tas bort så snart som möjligt.
