¿Cómo prevenir la contaminación en el cultivo celular?

Este artículo presenta principalmente tipos comunes de contaminación celular.

Área de trabajo:

1. ¿La campana de ventilación para el cultivo celular está configurado correctamente?

2. ¿Hay flujos de aire o canales de entrada directos en el área donde se encuentra la campana de ventilación del cultivo celular?

3. ¿Está limpio el banco de trabajo?

4. ¿Solo se han colocado los elementos necesarios para el experimento en el banco de trabajo?

5. 
   

6. ¿Ha limpiado el banco de trabajo con un etanol al 70% antes de comenzar a trabajar?

7. ¿Regularmente limpia y desinfecta la incubadora, el refrigerador, el congelador y otros equipos de laboratorio?

Higiene personal:

1. ¿Te has lavado las manos?

2. ¿Ha usado equipo de protección personal?

3. Si tienes el pelo largo, ¿está atado hacia atrás?

4. ¿Está utilizando una pipeta para manejar líquidos?

5. Reactivos y medios de cultivo

6. ¿Ha esterilizado todos los reactivos, medios y soluciones preparadas en el laboratorio utilizando métodos apropiados?

7. Antes de colocar contenedores, botellas de cultivo, placas de cultivo y platos de cultura en la superficie de trabajo, ¿ha limpiado sus exteriores con un 70% de etanol?

8. ¿Ha apretado las tapas de las botellas de reactivos, las botellas de cultivo y otros contenedores cuando no está en uso?

9. ¿Se han colocado todas las placas de cultivo en bolsas estériles y herméticas?

10. ¿Hay signos de contaminación en los reactivos, como nubosidad, partículas flotantes, olores desagradables o colores anormales? Si es así, ¿los ha limpiado o descartado?

Operación:

1. ¿Está operando lentamente, cuidadosamente y prestando atención a las técnicas asépticas?

2. ¿Ha limpiado las superficies de pipetas, botellas de reactivos y botellas de cultivo con etanol al 70% antes de colocarlas en la campana de ventilación del cultivo celular?

3. ¿Ha colocado las tapas hacia abajo en el área de trabajo?

4. ¿Está utilizando pipetas de vidrio estériles o pipetas de plástico estériles desechables para manejar líquidos?

5. ¿Está usando pipetas estériles solo una vez para evitar la contaminación cruzada?

6. ¿Ha evitado tocar la punta de la pipeta a cualquier artículo no estéril, incluido el borde exterior de los hilos del cuello de la botella?

7. Si se producen derrames líquidos, ¿lo ha absorbido de inmediato y limpiado el área con etanol al 70%?

Cabe señalar que la ubicación y la disposición de los artículos en el banco súper limpio, así como la higiene personal como el cabello largo, se pasan por alto fácilmente. Demasiados artículos en el banco súper limpio pueden causar interferencia al flujo de aire y la presión del aire, por lo que todos deben prestar atención.

'Conócete a ti mismo y a tu enemigo, y nunca serás derrotado en cien batallas. ' Sabiendo cómo prevenir la contaminación, también necesitamos saber cómo identificarlo. Después de todo, las células contaminadas deben descartarse con prontitud, de lo contrario, si los contaminantes recolectan todas las gemas, será ...

La contaminación del cultivo celular se divide principalmente en dos categorías: contaminantes químicos, como impurezas en los medios de cultivo, suero y agua, endotoxinas, plastificantes y detergentes; y contaminantes biológicos, como bacterias, hongos, levadura, virus, micoplasma y contaminación cruzada de otras líneas celulares.

Contaminación bacteriana:

Las bacterias vienen en varias formas, como esféricas, en forma de varilla y en forma de espiral. Las bacterias y los hongos juntos representan los contaminantes biológicos más comúnmente encontrados en el cultivo celular. Cuando las células están contaminadas con bacterias, a menudo se puede detectar dentro de uno o dos días mediante observación simple a simple vista, y el valor de pH del medio de cultivo puede disminuir repentinamente. La imagen a continuación muestra 293 células contaminadas con E. coli y creciendo como células adherentes.

Contaminación de hongos:

En la etapa inicial de la contaminación fúngica, el pH del medio de cultivo permanece estable, pero a medida que la contaminación empeora, el pH aumenta rápidamente, lo que hace que el medio se vuelva turbio. Bajo el microscopio, las hifas a menudo aparecen como paquetes delgados, y a veces como densos grupos de esporas. Las esporas pueden soportar entornos extremadamente duros y desfavorables durante la latencia. Por lo tanto, cuando se produce la contaminación fúngica, es necesario descartar rápidamente las celdas para evitar la contaminación a gran escala en la incubadora.

Contaminación de levadura:

Similar a la contaminación bacteriana, el medio de cultivo se vuelve turbio cuando se contamina con levadura, especialmente durante la contaminación en la etapa tardía. El pH del medio de cultivo cambia muy poco después de la contaminación con la levadura, y solo aumenta cuando la contaminación es severa. Bajo el microscopio, la levadura aparece como partículas ovales o esféricas individuales, algunas de las cuales pueden brotar en células hija. La imagen a continuación muestra 293 células contaminadas con levadura.

Contaminación viral:

Los virus tienen tamaños extremadamente pequeños, lo que hace que sea difícil detectarlos y eliminarlos de los reactivos utilizados en el cultivo celular. Como la mayoría de los virus tienen requisitos muy estrictos para sus huéspedes, generalmente no tienen efectos adversos en los cultivos celulares de especies huésped que no sean las suyas. Sin embargo, el uso de cultivos celulares infectados con virus puede representar serias amenazas para la salud para los operadores experimentales.

Contaminación de mycoplasma:

Mycoplasma se considera el organismo auto-replicador más pequeño. Debido a su tamaño extremadamente pequeño, la detección de micoplasma es muy difícil, y a menudo no hay signos obvios de infección a menos que la densidad sea muy alta. Algunos micoplasma pueden incluso persistir en cultivos celulares sin causar muerte celular, pero pueden alterar el comportamiento y el metabolismo de las células en el sistema de cultivo. Las posibles manifestaciones de la infección crónica de micoplasma incluyen una disminución en la tasa de proliferación celular, una disminución en la densidad nuclear y la agregación celular en el cultivo de suspensión. Los métodos más efectivos para detectar la contaminación del micoplasma son la tinción de fluorescencia, ELISA, PCR, inmunotinción, autodesarrollo radiográfico o técnicas de determinación microbiológica para probar periódicamente el cultivo.

Contaminación cruzada:

Aunque no es tan común como la contaminación microbiana, la contaminación cruzada generalizada entre muchas líneas celulares y las líneas celulares de rápido crecimiento, como las células HeLa, es un problema claro. Obtener líneas celulares de bancos celulares de buena reputación, verificar regularmente las propiedades de las líneas celulares y usar buenas técnicas asépticas son métodos convencionales para ayudar a evitar la contaminación cruzada.

Uso de antibióticos:

Los antibióticos no deben usarse rutinariamente en el cultivo celular porque su uso excesivo puede promover el desarrollo de cepas resistentes a los antibióticos, lo que lleva a una contaminación persistente de bajo nivel. Una vez que se eliminan los antibióticos, esta contaminación de bajo nivel puede eventualmente convertirse en contaminación a gran escala, y el uso continuo de antibióticos también puede enmascarar infecciones de micoplasma y otros tipos de contaminación. Por lo tanto, los antibióticos solo pueden usarse como último recurso contra la contaminación y solo deben usarse durante un corto período de tiempo, y deben eliminarse lo antes posible.