¿Cómo prevenir la contaminación en el cultivo celular?

Este artículo presenta principalmente tipos comunes de contaminación celular.

Área de trabajo:

1. ¿Está configurada correctamente la campana de ventilación para cultivo celular?

2. ¿Hay flujos de aire o canales de entrada directa en el área donde se encuentra la campana de ventilación del cultivo celular?

3. ¿Está limpia la mesa de trabajo?

4. ¿Se han colocado en la mesa de trabajo sólo los elementos necesarios para el experimento?

5. 
   

6. ¿Ha limpiado el banco de trabajo con etanol al 70% antes de empezar a trabajar?

7. ¿Limpia y desinfecta periódicamente la incubadora, el refrigerador, el congelador y otros equipos de laboratorio?

Higiene personal:

1. ¿Te has lavado las manos?

2. ¿Ha usado equipo de protección personal?

3. Si tienes el pelo largo, ¿lo lleva recogido?

4. ¿Estás usando una pipeta para manipular líquidos?

5. Reactivos y medios de cultivo.

6. ¿Ha esterilizado todos los reactivos, medios y soluciones preparados en el laboratorio utilizando métodos adecuados?

7. Antes de colocar recipientes, botellas de cultivo, placas de cultivo y platos de cultivo en la superficie de trabajo, ¿ha limpiado su exterior con etanol al 70 %?

8. ¿Ha apretado las tapas de los frascos de reactivos, frascos de cultivo y otros recipientes cuando no están en uso?

9. ¿Se han colocado todas las placas de cultivo en bolsas herméticas y esterilizadas?

10. ¿Hay signos de contaminación en los reactivos, como turbidez, partículas flotantes, olores desagradables o colores anormales? Si es así, ¿los ha limpiado o desechado?

Operación:

1. ¿Está operando lenta y cuidadosamente y prestando atención a las técnicas asépticas?

2. ¿Ha limpiado las superficies de las pipetas, los frascos de reactivos y los frascos de cultivo con etanol al 70% antes de colocarlos en la campana de ventilación para cultivos celulares?

3. ¿Has colocado las tapas hacia abajo en la zona de trabajo?

4. ¿Utiliza pipetas de vidrio esterilizadas o pipetas de plástico desechables y esterilizadas para manipular líquidos?

5. ¿Utiliza pipetas esterilizadas solo una vez para evitar la contaminación cruzada?

6. ¿Ha evitado tocar con la punta de la pipeta algún elemento no esterilizado, incluido el borde exterior de las roscas del cuello de la botella?

7. Si se producen derrames de líquido, ¿lo ha absorbido inmediatamente y ha limpiado el área con etanol al 70%?

Cabe señalar que la colocación y disposición de los elementos en el banco súper limpio, así como la higiene personal, como el cabello largo, pasan fácilmente por alto. Demasiados elementos en el banco súper limpio pueden causar interferencias en el flujo y la presión del aire, por lo que todos deben prestar atención.

'Conócete a ti mismo y a tu enemigo, y nunca serás derrotado en cien batallas'. Para saber cómo prevenir la contaminación, también necesitamos saber cómo identificarla. Después de todo, las células contaminadas deben desecharse lo antes posible; de ​​lo contrario, si los contaminantes recogen todas las gemas, será...

La contaminación de los cultivos celulares se divide principalmente en dos categorías: contaminantes químicos, como impurezas en los medios de cultivo, suero y agua, endotoxinas, plastificantes y detergentes; y contaminantes biológicos, como bacterias, hongos, levaduras, virus, micoplasmas y contaminación cruzada de otras líneas celulares.

Contaminación bacteriana:

Las bacterias tienen varias formas, como esféricas, en forma de varilla y en forma de espiral. Las bacterias y los hongos juntos constituyen los contaminantes biológicos que se encuentran con mayor frecuencia en los cultivos celulares. Cuando las células están contaminadas con bacterias, a menudo se puede detectar en uno o dos días mediante simple observación a simple vista, y el valor del pH del medio de cultivo puede disminuir repentinamente. La siguiente imagen muestra 293 células contaminadas con E. coli y creciendo como células adherentes.

Contaminación por hongos:

En la etapa inicial de la contaminación por hongos, el pH del medio de cultivo permanece estable, pero a medida que la contaminación empeora, el pH aumenta rápidamente, lo que hace que el medio se vuelva turbio. Bajo el microscopio, las hifas suelen aparecer como haces delgados y, a veces, como densos grupos de esporas. Las esporas pueden soportar ambientes extremadamente duros y desfavorables durante la latencia. Por lo tanto, cuando se produce contaminación por hongos, es necesario desechar rápidamente las células para evitar una contaminación a gran escala en la incubadora.

Contaminación por levaduras:

De manera similar a la contaminación bacteriana, el medio de cultivo se vuelve turbio cuando se contamina con levadura, especialmente durante la última etapa de contaminación. El pH del medio de cultivo cambia muy poco después de la contaminación con levadura y sólo aumenta cuando la contaminación es grave. Bajo el microscopio, la levadura aparece como partículas individuales ovaladas o esféricas, algunas de las cuales pueden convertirse en células hijas. La siguiente imagen muestra 293 células contaminadas con levadura.

Contaminación viral:

Los virus tienen tamaños extremadamente pequeños, lo que dificulta su detección y eliminación de los reactivos utilizados en el cultivo celular. Como la mayoría de los virus tienen requisitos muy estrictos para sus huéspedes, generalmente no tienen efectos adversos en cultivos celulares de especies huésped distintas a la suya. Sin embargo, el uso de cultivos celulares infectados con virus puede plantear graves amenazas para la salud de los operadores experimentales.

Contaminación por micoplasma:

Mycoplasma se considera el organismo autorreplicante más pequeño. Debido a su tamaño extremadamente pequeño, la detección del micoplasma es muy difícil y, a menudo, no hay signos evidentes de infección a menos que la densidad sea muy alta. Algunos micoplasmas pueden incluso persistir en cultivos celulares sin provocar la muerte celular, pero pueden alterar el comportamiento y el metabolismo de las células en el sistema de cultivo. Las posibles manifestaciones de la infección crónica por micoplasma incluyen una disminución de la tasa de proliferación celular, una disminución de la densidad nuclear y la agregación celular en cultivos en suspensión. Los métodos más eficaces para detectar la contaminación por micoplasmas son la tinción por fluorescencia, ELISA, PCR, inmunotinción, autorevelado radiográfico o técnicas de determinación microbiológica para analizar periódicamente el cultivo.

Contaminación cruzada:

Aunque no es tan común como la contaminación microbiana, la contaminación cruzada generalizada entre muchas líneas celulares y líneas celulares de rápido crecimiento, como las células HeLa, es un problema claro. Obtener líneas celulares de bancos de células acreditados, comprobar periódicamente las propiedades de las líneas celulares y utilizar buenas técnicas asépticas son métodos convencionales para ayudar a evitar la contaminación cruzada.

Uso de antibióticos:

Los antibióticos no deben usarse de manera rutinaria en cultivos celulares porque su uso excesivo puede promover el desarrollo de cepas resistentes a los antibióticos, lo que lleva a una contaminación persistente de bajo nivel. Una vez que se eliminan los antibióticos, esta contaminación de bajo nivel puede eventualmente convertirse en una contaminación a gran escala, y el uso continuo de antibióticos también puede enmascarar infecciones por micoplasma y otros tipos de contaminación. Por lo tanto, los antibióticos sólo pueden usarse como último recurso contra la contaminación y solo deben usarse por un período corto de tiempo, debiendo retirarse lo antes posible.