Jak zapobiec zanieczyszczeniu hodowli komórkowej?

W tym artykule przedstawiono głównie typowe rodzaje zanieczyszczeń komórek.

Obszar pracy:

1. Czy okap wentylacyjny do hodowli komórkowej jest prawidłowo ustawiony?

2. Czy w obszarze, w którym znajduje się okap do hodowli komórkowej, są jakieś przepływy powietrza lub kanały bezpośredniego wejścia?

3. Czy stół warsztatowy jest czysty?

4. Czy na stole warsztatowym umieszczono tylko przedmioty potrzebne do eksperymentu?

5. 
   

6. Czy przed rozpoczęciem pracy przetarłeś stół warsztatowy 70% etanolem?

7. Czy regularnie czyścisz i dezynfekujesz inkubator, lodówkę, zamrażarkę i inny sprzęt laboratoryjny?

Higiena osobista:

1. Umyłeś ręce?

2. Czy nosiłeś środki ochrony osobistej?

3. Jeśli masz długie włosy, czy są one związane z tyłu?

4. Czy używasz pipety do przenoszenia płynów?

5. Odczynniki i podłoża hodowlane

6. Czy wszystkie odczynniki, podłoża i roztwory przygotowane w laboratorium zostały wysterylizowane odpowiednimi metodami?

7. Czy przed umieszczeniem pojemników, butelek hodowlanych, płytek hodowlanych i naczyń hodowlanych na powierzchni roboczej przetarłeś ich zewnętrzne powierzchnie 70% etanolem?

8. Czy dokręciłeś pokrywki butelek z odczynnikami, butelek do hodowli i innych pojemników, gdy nie są używane?

9. Czy wszystkie płytki hodowlane umieszczono w sterylnych, hermetycznych workach?

10. Czy są jakieś oznaki zanieczyszczenia odczynników, takie jak zmętnienie, pływające cząstki, nieprzyjemny zapach lub nietypowe kolory? Jeśli tak, czy je wyczyściłeś lub wyrzuciłeś?

Działanie:

1. Czy działasz powoli, ostrożnie i zwracasz uwagę na techniki aseptyczne?

2. Czy wytarłeś powierzchnie pipet, butelek z odczynnikami i butelek do hodowli 70% etanolem przed umieszczeniem ich pod wyciągiem do hodowli komórek?

3. Czy w miejscu pracy umieściłeś pokrywy skierowane w dół?

4. Czy do przenoszenia płynów używasz sterylnych pipet szklanych lub jednorazowych sterylnych pipet plastikowych?

5. Czy sterylnych pipet używasz tylko raz, aby uniknąć zakażenia krzyżowego?

6. Czy unikałeś dotykania końcówką pipety niesterylnych przedmiotów, w tym zewnętrznej krawędzi gwintu szyjki butelki?

7. Jeśli doszło do rozlania płynu, czy natychmiast go wchłonąłeś i przetarłeś obszar 70% etanolem?

Należy zauważyć, że łatwo przeoczyć rozmieszczenie i ułożenie przedmiotów na super czystej ławce, a także higienę osobistą, taką jak długie włosy. Zbyt wiele przedmiotów na super czystej ławce może powodować zakłócenia przepływu i ciśnienia powietrza, dlatego każdy musi zachować ostrożność.

„Poznaj siebie i swojego wroga, a nigdy nie zostaniesz pokonany w stu bitwach.” Wiedząc, jak zapobiegać skażeniu, musimy także wiedzieć, jak je zidentyfikować. W końcu zanieczyszczone komórki należy natychmiast wyrzucić, w przeciwnym razie, jeśli zanieczyszczenia zbiorą wszystkie klejnoty, zostanie...

Zanieczyszczenia hodowli komórkowych dzielą się głównie na dwie kategorie: zanieczyszczenia chemiczne, takie jak zanieczyszczenia w pożywkach hodowlanych, surowicy i wodzie, endotoksyny, plastyfikatory i detergenty; oraz zanieczyszczenia biologiczne, takie jak bakterie, grzyby, drożdże, wirusy, mykoplazma i zanieczyszczenie krzyżowe innych linii komórkowych.

Zanieczyszczenie bakteryjne:

Bakterie występują w różnych kształtach, takich jak kulisty, w kształcie pręta i w kształcie spirali. Bakterie i grzyby razem tworzą najczęściej spotykane zanieczyszczenia biologiczne w kulturach komórkowych. Zanieczyszczenie komórek bakteriami często można wykryć w ciągu jednego lub dwóch dni poprzez prostą obserwację gołym okiem, a wartość pH pożywki hodowlanej może nagle spaść. Poniższy obraz przedstawia 293 komórki zakażone E. coli i rosnące jako komórki przylegające.

Zanieczyszczenie grzybicze:

W początkowej fazie skażenia grzybami pH pożywki hodowlanej pozostaje stabilne, lecz w miarę narastania skażenia pH gwałtownie wzrasta, powodując zmętnienie pożywki. Pod mikroskopem strzępki często wyglądają jak cienkie pęczki, a czasami jako gęste skupiska zarodników. Zarodniki mogą wytrzymać wyjątkowo trudne i niesprzyjające środowisko w czasie spoczynku. Dlatego w przypadku wystąpienia skażenia grzybami konieczne jest natychmiastowe wyrzucenie komórek, aby zapobiec zanieczyszczeniu inkubatora na dużą skalę.

Zanieczyszczenie drożdżami:

Podobnie jak w przypadku skażenia bakteryjnego, pożywka hodowlana staje się mętna w przypadku skażenia drożdżami, szczególnie w późnym stadium skażenia. Wartość pH pożywki hodowlanej zmienia się bardzo nieznacznie po zanieczyszczeniu drożdżami i wzrasta tylko wtedy, gdy zanieczyszczenie jest poważne. Pod mikroskopem drożdże wyglądają jak pojedyncze owalne lub kuliste cząstki, z których część może przerodzić się w komórki potomne. Poniższy obraz przedstawia 293 komórki skażone drożdżami.

Zanieczyszczenie wirusowe:

Wirusy mają niezwykle małe rozmiary, co utrudnia ich wykrycie i usunięcie z odczynników stosowanych w hodowli komórkowej. Ponieważ większość wirusów ma bardzo rygorystyczne wymagania wobec swoich żywicieli, generalnie nie mają one niekorzystnego wpływu na hodowle komórkowe gatunków żywicieli innych niż ich własne. Jednakże stosowanie kultur komórkowych zakażonych wirusami może stwarzać poważne zagrożenie dla zdrowia operatorów eksperymentów.

Zanieczyszczenie mykoplazmą:

Mykoplazma jest uważana za najmniejszy organizm samoreplikujący. Ze względu na wyjątkowo małe rozmiary wykrycie mykoplazmy jest bardzo trudne i często nie ma wyraźnych oznak infekcji, chyba że gęstość jest bardzo duża. Niektóre mykoplazmy mogą nawet przetrwać w hodowlach komórkowych, nie powodując śmierci komórek, ale mogą zmieniać zachowanie i metabolizm komórek w systemie hodowli. Możliwe objawy przewlekłej infekcji mykoplazmą obejmują zmniejszenie szybkości proliferacji komórek, zmniejszenie gęstości jądrowej i agregację komórek w hodowli zawiesinowej. Najbardziej skutecznymi metodami wykrywania skażenia mykoplazmą są barwienie fluorescencyjne, testy ELISA, PCR, barwienie immunologiczne, samorozwój radiograficzny lub techniki oznaczania mikrobiologicznego w celu okresowego badania hodowli.

Zanieczyszczenie krzyżowe:

Chociaż nie jest to tak powszechne jak zanieczyszczenie mikrobiologiczne, wyraźnym problemem jest powszechne zanieczyszczenie krzyżowe między wieloma liniami komórkowymi a szybko rosnącymi liniami komórkowymi, takimi jak komórki HeLa. Pozyskiwanie linii komórkowych z renomowanych banków komórkowych, regularne sprawdzanie właściwości linii komórkowych i stosowanie dobrych technik aseptycznych to konwencjonalne metody pomagające uniknąć zanieczyszczenia krzyżowego.

Stosowanie antybiotyków:

Antybiotyki nie powinny być rutynowo stosowane w hodowlach komórkowych, ponieważ ich nadużywanie może sprzyjać rozwojowi szczepów opornych na antybiotyki, prowadząc do trwałego skażenia na niskim poziomie. Po usunięciu antybiotyków to niewielkie zanieczyszczenie może ostatecznie przekształcić się w zanieczyszczenie na dużą skalę, a dalsze stosowanie antybiotyków może również maskować infekcje mykoplazmą i inne rodzaje zanieczyszczeń. Dlatego antybiotyki można stosować jedynie w ostateczności w celu zapobiegania zanieczyszczeniu, należy je stosować jedynie przez krótki okres czasu i należy je jak najszybciej usunąć.