Jak zapobiec zanieczyszczeniu w hodowli komórkowej?

Ten artykuł wprowadza głównie wspólne rodzaje zanieczyszczenia komórek.

Obszar roboczy:

1. Czy kaptur wentylacyjny dla hodowli komórkowej jest prawidłowo ustawiony?

2. Czy są jakieś przepływy powietrza lub bezpośrednie kanały wejścia w obszarze, w którym znajduje się kaptur wentylacji hodowli komórkowej?

3. Czy warsztat jest czysty?

4. Czy tylko elementy wymagane do eksperymentu zostały umieszczone na stole warsztatowym?

5. 
   

6. Czy przed rozpoczęciem pracy wytarłeś stado robocze 70% etanolem?

7. Czy regularnie czyścicie i dezynfekujesz inkubator, lodówkę, zamrażarkę i inne urządzenia laboratoryjne?

Higiena osobista:

1. Czy umyłeś ręce?

2. Czy nosiłeś osobisty sprzęt ochronny?

3. Jeśli masz długie włosy, czy to związane?

4. Czy używasz pipety do obsługi płynów?

5. Odczynniki i media kulturowo

6. Czy sterylizowałeś wszystkie odczynniki, media i rozwiązania przygotowane w laboratorium przy użyciu odpowiednich metod?

7. Przed umieszczeniem pojemników, butelek kulturowych, płyt hodowlanych i naczyń kultutycznych na powierzchni roboczej, czy ściernąłeś swoje zewnątrz 70% etanolem?

8. Czy zaostrzyłeś pokrywki butelek odczynników, butelki kulturowej i innych pojemników, gdy nie jest używane?

9. Czy wszystkie płyty hodowlane zostały umieszczone w sterylnych, szczelnych torbach?

10. Czy są jakieś oznaki zanieczyszczenia odczynników, takie jak zmętnienie, pływające cząstki, nieprzyjemne zapachy lub nienormalne kolory? Jeśli tak, czy je wyczyściłeś lub odrzuciłeś?

Działanie:

1. Czy działasz powoli, ostrożnie i zwracasz uwagę na techniki aseptyczne?

2. Czy wytarłeś powierzchnie pipet, butelek odczynników i butelek hodowlanych z 70% etanolem, zanim umieściłeś je w kapturze wentylacji hodowli komórkowej?

3. Czy umieściłeś pokrywki skierowane w dół w obszarze roboczym?

4. Czy używasz sterylnych szklanych pipet lub jednorazowych sterylnych plastikowych pipet do obsługi płynów?

5. Czy używasz sterylnych pipet tylko raz, aby uniknąć zanieczyszczenia krzyżowego?

6. Czy unikałeś dotykania końcówki pipety do jakichkolwiek niesterylnych przedmiotów, w tym zewnętrznej krawędzi gwintów szyi butelek?

7. Jeśli wystąpią płynne wycieki, czy natychmiast go pochłonąłeś i wytarłeś obszar 70% etanolem?

Należy zauważyć, że umieszczenie i rozmieszczenie przedmiotów na super czystej ławce, a także higieny osobistej, takiej jak długie włosy, można łatwo przeoczyć. Zbyt wiele przedmiotów na super czystej ławce może powodować zakłócenia przepływu powietrza i ciśnienia powietrza, więc każdy musi zwrócić uwagę.

„Poznaj siebie i swojego wroga, a nigdy nie zostaniesz pokonany w stu bitwach. ” Wiedząc, jak zapobiec zanieczyszczeniu, musimy również wiedzieć, jak to zidentyfikować. W końcu zanieczyszczone komórki należy szybko odrzucić, w przeciwnym razie, jeśli zanieczyszczenia zbierają wszystkie klejnoty, będzie ...

Zanieczyszczenie hodowli komórkowej jest podzielone głównie na dwie kategorie: zanieczyszczenia chemiczne, takie jak zanieczyszczenia w pożywce hodowlanej, surowicy i wodzie, endotoksynach, plastyfikatorach i detergentach; oraz zanieczyszczenia biologiczne, takie jak bakterie, grzyby, drożdże, wirusy, mykoplazma i zanieczyszczenie krzyżowe innych linii komórkowych.

Zanieczyszczenie bakteryjne:

Bakterie występują w różnych kształtach, takich jak sferyczne, w kształcie pręta i w kształcie spiralnej. Bakterie i grzyby razem stanowią najczęściej spotykane biologiczne zanieczyszczenia w hodowli komórkowej. Gdy komórki są zanieczyszczone bakteriami, często można je wykryć w ciągu jednego lub dwóch dni przez prostą obserwację gołym okiem, a wartość pH pożywki hodowlanej może nagle zmniejszyć. Poniższy obraz pokazuje 293 komórki zanieczyszczone E. coli i rosnące jako przylegające komórki.

Zanieczyszczenie grzybów:

Na początkowym etapie zanieczyszczenia grzybowego pH pożywki hodowlanej pozostaje stabilna, ale wraz z pogarszaniem zanieczyszczenia pH gwałtownie wzrasta, powodując mętne medium. Pod mikroskopem strzępki często pojawiają się jako cienkie wiązki, a czasem gęste skupiska zarodników. Zarodniki mogą wytrzymać wyjątkowo trudne i niekorzystne środowiska podczas uśpienia. Dlatego, gdy nastąpi zanieczyszczenie grzybowe, konieczne jest natychmiastowe odrzucenie komórek, aby zapobiec zanieczyszczeniu na dużą skalę w inkubatorze.

Zanieczyszczenie drożdży:

Podobnie jak zanieczyszczenie bakteryjne, pożywka hodowlana staje się mętna, gdy jest zanieczyszczona drożdżami, szczególnie podczas zanieczyszczenia późnego stadium. PH pożywki hodowlanej zmienia się bardzo niewiele po zanieczyszczeniu drożdżami i wzrasta tylko wtedy, gdy zanieczyszczenie jest poważne. Pod mikroskopem drożdże pojawiają się jako indywidualne cząsteczki owalne lub sferyczne, z których niektóre mogą kłoczyć się do komórek potomnych. Poniższy obraz pokazuje 293 komórki zanieczyszczone drożdżami.

Zanieczyszczenie wirusowe:

Wirusy mają wyjątkowo małe rozmiary, co utrudnia wykrycie i usunięcie ich z odczynników stosowanych w hodowli komórkowej. Ponieważ większość wirusów ma bardzo ścisłe wymagania dla swoich gospodarzy, na ogół nie mają one niekorzystnego wpływu na kultury komórkowe z gatunków żywicieli innych niż ich własne. Jednak stosowanie hodowli komórkowych zakażonych wirusami może stanowić poważne zagrożenia dla zdrowia dla eksperymentalnych operatorów.

Zanieczyszczenie Mycoplasma:

Mycoplasma jest uważany za najmniejszy organizm samodzielny. Ze względu na wyjątkowo niewielki rozmiar wykrywanie mykoplazmy jest bardzo trudne i często nie ma oczywistych oznak infekcji, chyba że gęstość jest bardzo wysoka. Niektóre mykoplazmy mogą nawet utrzymywać się w hodowlach komórkowych bez powodowania śmierci komórek, ale mogą zmienić zachowanie i metabolizm komórek w układzie hodowli. Możliwe objawy przewlekłego zakażenia mykoplazmy obejmują spadek szybkości proliferacji komórek, spadek gęstości jądrowej i agregację komórek w hodowli zawiesiny. Najskuteczniejszymi metodami wykrywania zanieczyszczenia mycoplasma są barwienia fluorescencyjne, ELISA, PCR, barwienie immunologiczne, samorozwoju radiograficzne lub techniki determinacji mikrobiologicznej w celu okresowego testowania hodowli.

Zanieczyszczenie krzyżowe:

Chociaż nie jest tak powszechne jak zanieczyszczenie drobnoustrojowe, powszechne zanieczyszczenie krzyżowe między wieloma liniami komórkowymi i szybko rosnące linie komórkowe, takie jak komórki HeLa, jest wyraźnym problemem. Uzyskiwanie linii komórkowych z renomowanych banków komórkowych, regularne sprawdzanie właściwości linii komórkowych i stosowanie dobrych technik aseptycznych są konwencjonalnymi metodami, które pomagają uniknąć zanieczyszczenia krzyżowego.

Stosowanie antybiotyków:

Antybiotyki nie powinny być rutynowo stosowane w hodowli komórkowej, ponieważ ich nadużywanie może sprzyjać rozwojowi szczepów opornych na antybiotyki, co prowadzi do trwałego zanieczyszczenia niskiego poziomu. Po usunięciu antybiotyków to zanieczyszczenie na niskim poziomie może ostatecznie rozwinąć się w zanieczyszczenie na dużą skalę, a dalsze stosowanie antybiotyków może również maskować infekcje mykoplazmy i inne rodzaje zanieczyszczenia. Dlatego antybiotyki mogą być stosowane tylko jako ostateczność przeciwko zanieczyszczeniu i powinny być używane tylko przez krótki czas i należy je jak najszybciej usunąć.