Come prevenire la contaminazione nella coltura cellulare?

Questo articolo introduce principalmente tipi comuni di contaminazione cellulare.

Area di lavoro:

1. Il cappuccio di ventilazione per la coltura cellulare è impostato correttamente?

2. Ci sono flussi d'aria o canali di accesso diretto nell'area in cui si trova il cofano di ventilazione della coltura cellulare?

3. Il banco di lavoro è pulito?

4. Sono stati inseriti solo gli articoli richiesti per l'esperimento sul banco di lavoro?

5. 
   

6. Hai cancellato il banco di lavoro con etanolo al 70% prima di iniziare il lavoro?

7. Pulisci e disinfettano regolarmente l'incubatore, il frigorifero, il congelatore e altre attrezzature da laboratorio?

Igiene personale:

1. Ti sei lavato le mani?

2. Hai indossato attrezzature per la protezione individuale?

3. Se hai i capelli lunghi, è legato?

4. Stai usando una pipetta per gestire i liquidi?

5. Reagenti e media di cultura

6. Hai sterilizzato tutti i reagenti, i media e le soluzioni preparate in laboratorio usando metodi appropriati?

7. Prima di posizionare contenitori, bottiglie di coltura, piatti di cultura e piatti di cultura sulla superficie del lavoro, hai cancellato i loro esterni con etanolo al 70%?

8. Hai stretto i coperchi di bottiglie di reagente, bottiglie di coltura e altri contenitori quando non sei in uso?

9. Tutte le piastre di coltura sono state collocate in sacchi sterili e ermetici?

10. Ci sono segni di contaminazione nei reagenti, come nuvolosità, particelle galleggianti, odori spiacevoli o colori anormali? In tal caso, li hai puliti o scartati?

Operazione:

1. Stai operando lentamente, attentamente e prestando attenzione alle tecniche asettiche?

2. Hai cancellato le superfici di pipette, bottiglie di reagente e bottiglie di coltura con etanolo al 70% prima di metterle nel cofano di ventilazione della coltura cellulare?

3. Hai messo i coperchi rivolti verso il basso nell'area di lavoro?

4. Stai usando pipette di vetro sterile o pipette in plastica sterili usa e getta per gestire i liquidi?

5. Stai usando pipette sterili solo una volta per evitare la contaminazione incrociata?

6. Hai evitato di toccare la punta della pipetta a qualsiasi oggetto non sterile, incluso il bordo esterno dei fili del collo della bottiglia?

7. Se si verificano fuoriuscite liquide, l'hai assorbita immediatamente e cancellato l'area con etanolo al 70%?

Va notato che il posizionamento e la disposizione degli oggetti sulla panca super pulita, nonché l'igiene personale come i capelli lunghi, sono facilmente trascurati. Troppi articoli sulla panca super pulita possono causare interferenze al flusso d'aria e alla pressione dell'aria, quindi tutti devono prestare attenzione.

'Conosci te stesso e il tuo nemico e non sarai mai sconfitto in un centinaio di battaglie. ' Sapendo come prevenire la contaminazione, dobbiamo anche sapere come identificarla. Dopotutto, le cellule contaminate devono essere scartate prontamente, altrimenti, se i contaminanti raccolgono tutte le gemme, sarà ...

La contaminazione della coltura cellulare è principalmente divisa in due categorie: contaminanti chimici, come impurità in terreni di coltura, siero e acqua, endotossine, plastificanti e detergenti; e contaminanti biologici, come batteri, funghi, lievito, virus, micoplasma e contaminazione incrociata di altre linee cellulari.

Contaminazione batterica:

I batteri sono disponibili in varie forme, come sferiche, a forma di asta e a forma di spirale. I batteri e i funghi insieme costituiscono i contaminanti biologici più comunemente incontrati nella coltura cellulare. Quando le cellule sono contaminate da batteri, spesso possono essere rilevate entro uno o due giorni mediante una semplice osservazione ad occhio nudo e il valore del pH del terreno di coltura può improvvisamente diminuire. L'immagine seguente mostra 293 cellule contaminate da E. coli e crescendo come cellule aderenti.

Contaminazione fungina:

Nella fase iniziale della contaminazione fungina, il pH del terreno di coltura rimane stabile, ma man mano che la contaminazione peggiora, il pH aumenta rapidamente, facendo diventare torbidi il mezzo. Al microscopio, le ife appaiono spesso come pacchetti sottili e talvolta come fitti grappoli di spore. Le spore possono resistere a ambienti estremamente duri e sfavorevoli durante la dormienza. Pertanto, quando si verifica la contaminazione fungina, è necessario scartare prontamente le cellule per prevenire la contaminazione su larga scala nell'incubatore.

Contaminazione del lievito:

Simile alla contaminazione batterica, il terreno di coltura diventa torbido se contaminato da lievito, specialmente durante la contaminazione in fase avanzata. Il pH del terreno di coltura cambia molto poco dopo la contaminazione con il lievito e aumenta solo quando la contaminazione è grave. Sotto il microscopio, il lievito appare come singole particelle ovali o sferiche, alcune delle quali possono gettare in cellule figlie. L'immagine seguente mostra 293 celle contaminate da lievito.

Contaminazione virale:

I virus hanno dimensioni estremamente piccole, rendendo difficile rilevarli e rimuoverli dai reagenti utilizzati nella coltura cellulare. Poiché la maggior parte dei virus ha requisiti molto severi per i loro ospiti, generalmente non hanno effetti negativi sulle colture cellulari da specie ospiti diverse dalla propria. Tuttavia, l'uso di colture cellulari infettate da virus può rappresentare gravi minacce di salute agli operatori sperimentali.

Contaminazione da mycoplasma:

Il micoplasma è considerato il più piccolo organismo autoreplicante. A causa delle sue dimensioni estremamente ridotte, il rilevamento del micoplasma è molto difficile e spesso non ci sono evidenti segni di infezione a meno che la densità non sia molto elevata. Un po 'di micoplasma può persino persistere nelle colture cellulari senza causare la morte cellulare, ma possono alterare il comportamento e il metabolismo delle cellule nel sistema di coltura. Le possibili manifestazioni di infezione cronica del micoplasma comprendono una diminuzione del tasso di proliferazione cellulare, una diminuzione della densità nucleare e l'aggregazione cellulare nella coltura della sospensione. I metodi più efficaci per rilevare la contaminazione da micoplasma sono la colorazione della fluorescenza, ELISA, PCR, immunocolorazione, auto-sviluppo radiografica o tecniche di determinazione microbiologica per testare periodicamente la coltura.

Contaminazione incrociata:

Sebbene non sia comune come la contaminazione microbica, la diffusa contaminazione incrociata tra molte linee cellulari e linee cellulari in rapida crescita come le cellule HeLa è un problema chiaro. Ottenere le linee cellulari da banche cellulari affidabili, controllare regolarmente le proprietà delle linee cellulari e l'uso di buone tecniche asettiche sono metodi convenzionali per evitare la contaminazione incrociata.

Uso di antibiotici:

Gli antibiotici non dovrebbero essere abitualmente usati nella coltura cellulare perché il loro uso eccessivo può promuovere lo sviluppo di ceppi resistenti agli antibiotici, portando a una contaminazione persistente di basso livello. Una volta rimossi gli antibiotici, questa contaminazione di basso livello può eventualmente svilupparsi in contaminazione su larga scala e l'uso continuo di antibiotici può anche mascherare le infezioni da micoplasma e altri tipi di contaminazione. Pertanto, gli antibiotici possono essere usati come ultima risorsa contro la contaminazione e devono essere usati solo per un breve periodo di tempo e dovrebbero essere rimossi il prima possibile.