सेल कल्चर में संदूषण को कैसे रोकें?

यह लेख मुख्य रूप से सामान्य प्रकार के कोशिका संदूषण का परिचय देता है।

कार्य क्षेत्र:

1. क्या सेल कल्चर के लिए वेंटिलेशन हुड सही ढंग से स्थापित किया गया है?

2. क्या उस क्षेत्र में कोई वायु प्रवाह या सीधे प्रवेश चैनल हैं जहां सेल कल्चर वेंटिलेशन हुड स्थित है?

3. क्या कार्यक्षेत्र साफ़ है?

4. क्या कार्यक्षेत्र पर केवल प्रयोग के लिए आवश्यक वस्तुएं ही रखी गई हैं?

5. 
   

6. क्या आपने काम शुरू करने से पहले कार्यक्षेत्र को 70% इथेनॉल से पोंछ लिया है?

7. क्या आप इनक्यूबेटर, रेफ्रिजरेटर, फ्रीजर और अन्य प्रयोगशाला उपकरणों को नियमित रूप से साफ और कीटाणुरहित करते हैं?

व्यक्तिगत स्वच्छता:

1. क्या आपने अपने हाथ धोये हैं?

2. क्या आपने व्यक्तिगत सुरक्षा उपकरण पहने हैं?

3. यदि आपके बाल लंबे हैं, तो क्या वे पीछे बंधे हैं?

4. क्या आप तरल पदार्थों को संभालने के लिए पिपेट का उपयोग कर रहे हैं?

5. अभिकर्मक और संस्कृति मीडिया

6. क्या आपने उचित तरीकों का उपयोग करके प्रयोगशाला में तैयार किए गए सभी अभिकर्मकों, मीडिया और समाधानों को निर्जलित कर दिया है?

7. कंटेनर, कल्चर बोतलें, कल्चर प्लेट और कल्चर डिश को काम की सतह पर रखने से पहले, क्या आपने उनके बाहरी हिस्से को 70% इथेनॉल से पोंछा है?

8. क्या आपने उपयोग में न होने पर अभिकर्मक बोतलों, कल्चर बोतलों और अन्य कंटेनरों के ढक्कन कस दिए हैं?

9. क्या सभी कल्चर प्लेटों को जीवाणुरहित, वायुरोधी थैलों में रखा गया है?

10. क्या अभिकर्मकों में संदूषण के कोई लक्षण हैं, जैसे बादल, तैरते कण, अप्रिय गंध या असामान्य रंग? यदि हां, तो क्या आपने उन्हें साफ़ किया है या त्याग दिया है?

संचालन:

1. क्या आप धीरे-धीरे, सावधानी से काम कर रहे हैं और सड़न रोकने वाली तकनीकों पर ध्यान दे रहे हैं?

2. क्या आपने सेल कल्चर वेंटिलेशन हुड में रखने से पहले पिपेट, अभिकर्मक बोतलों और कल्चर बोतलों की सतहों को 70% इथेनॉल से पोंछ दिया है?

3. क्या आपने कार्य क्षेत्र में पलकें नीचे की ओर रखी हैं?

4. क्या आप तरल पदार्थों को संभालने के लिए स्टेराइल ग्लास पिपेट या डिस्पोजेबल स्टेराइल प्लास्टिक पिपेट का उपयोग कर रहे हैं?

5. क्या आप क्रॉस-संदूषण से बचने के लिए केवल एक बार रोगाणुहीन पिपेट का उपयोग कर रहे हैं?

6. क्या आपने बोतल की गर्दन के धागों के बाहरी किनारे सहित किसी भी गैर-बाँझ वस्तु को पिपेट की नोक को छूने से परहेज किया है?

7. यदि तरल फैल जाता है, तो क्या आपने तुरंत इसे अवशोषित कर लिया है और 70% इथेनॉल से क्षेत्र को पोंछ दिया है?

यह ध्यान दिया जाना चाहिए कि सुपर क्लीन बेंच पर वस्तुओं की नियुक्ति और व्यवस्था, साथ ही लंबे बाल जैसी व्यक्तिगत स्वच्छता को आसानी से नजरअंदाज कर दिया जाता है। सुपर क्लीन बेंच पर बहुत अधिक वस्तुएं वायु प्रवाह और वायु दबाव में व्यवधान पैदा कर सकती हैं, इसलिए सभी को ध्यान देने की आवश्यकता है।

''अपने आप को और अपने दुश्मन को जानो, और तुम सैकड़ों लड़ाइयों में कभी नहीं हारोगे।'' संदूषण को रोकने के तरीके को जानने के साथ-साथ हमें यह भी जानना होगा कि इसे कैसे पहचाना जाए। आख़िरकार, दूषित कोशिकाओं को तुरंत त्यागने की ज़रूरत है, अन्यथा, यदि दूषित पदार्थ सभी रत्नों को इकट्ठा कर लेते हैं, तो यह होगा...

सेल कल्चर संदूषण को मुख्य रूप से दो श्रेणियों में विभाजित किया गया है: रासायनिक संदूषक, जैसे कि कल्चर मीडिया, सीरम और पानी में अशुद्धियाँ, एंडोटॉक्सिन, प्लास्टिसाइज़र और डिटर्जेंट; और जैविक संदूषक, जैसे बैक्टीरिया, कवक, यीस्ट, वायरस, माइकोप्लाज्मा, और अन्य कोशिका रेखाओं का क्रॉस-संदूषण।

विषाणु दूषण:

बैक्टीरिया विभिन्न आकारों में आते हैं, जैसे गोलाकार, छड़ के आकार और सर्पिल के आकार के। बैक्टीरिया और कवक मिलकर कोशिका संवर्धन में सबसे अधिक पाए जाने वाले जैविक संदूषक बनते हैं। जब कोशिकाएं बैक्टीरिया से दूषित होती हैं, तो इसे अक्सर नग्न आंखों से साधारण अवलोकन द्वारा एक या दो दिनों के भीतर पता लगाया जा सकता है, और संस्कृति माध्यम का पीएच मान अचानक कम हो सकता है। नीचे दी गई छवि ई. कोलाई से दूषित 293 कोशिकाओं को दिखाती है और अनुवर्ती कोशिकाओं के रूप में बढ़ रही है।

फंगल संदूषण:

फंगल संदूषण के प्रारंभिक चरण में, संस्कृति माध्यम का पीएच स्थिर रहता है, लेकिन जैसे-जैसे संदूषण बिगड़ता है, पीएच तेजी से बढ़ता है, जिससे माध्यम अशांत हो जाता है। माइक्रोस्कोप के तहत, हाइफ़े अक्सर पतले बंडलों के रूप में और कभी-कभी बीजाणुओं के घने समूहों के रूप में दिखाई देते हैं। सुप्तावस्था के दौरान बीजाणु अत्यंत कठोर और प्रतिकूल वातावरण का सामना कर सकते हैं। इसलिए, जब फंगल संदूषण होता है, तो इनक्यूबेटर में बड़े पैमाने पर संदूषण को रोकने के लिए कोशिकाओं को तुरंत त्यागना आवश्यक है।

यीस्ट संदूषण:

जीवाणु संदूषण के समान, यीस्ट से संदूषित होने पर संस्कृति माध्यम गंदला हो जाता है, विशेष रूप से अंतिम चरण संदूषण के दौरान। यीस्ट से संदूषण के बाद कल्चर माध्यम का pH बहुत कम बदलता है, और केवल तभी बढ़ता है जब संदूषण गंभीर हो। माइक्रोस्कोप के तहत, खमीर व्यक्तिगत अंडाकार या गोलाकार कणों के रूप में दिखाई देता है, जिनमें से कुछ बेटी कोशिकाओं में विकसित हो सकते हैं। नीचे दी गई छवि यीस्ट से दूषित 293 कोशिकाओं को दिखाती है।

वायरल संदूषण:

वायरस का आकार बेहद छोटा होता है, जिससे सेल कल्चर में इस्तेमाल होने वाले अभिकर्मकों से उनका पता लगाना और उन्हें हटाना मुश्किल हो जाता है। चूंकि अधिकांश वायरस की अपने मेजबानों के लिए बहुत सख्त आवश्यकताएं होती हैं, इसलिए वे आम तौर पर अपने अलावा अन्य मेजबान प्रजातियों की कोशिका संस्कृतियों पर प्रतिकूल प्रभाव नहीं डालते हैं। हालाँकि, वायरस से संक्रमित सेल कल्चर का उपयोग प्रायोगिक ऑपरेटरों के लिए गंभीर स्वास्थ्य खतरे पैदा कर सकता है।

माइकोप्लाज्मा संदूषण:

माइकोप्लाज्मा को सबसे छोटा स्व-प्रतिकृति जीव माना जाता है। इसके बेहद छोटे आकार के कारण, माइकोप्लाज्मा का पता लगाना बहुत मुश्किल है, और अक्सर संक्रमण के कोई स्पष्ट संकेत नहीं होते हैं जब तक कि घनत्व बहुत अधिक न हो। कुछ माइकोप्लाज्मा कोशिका मृत्यु के बिना भी कोशिका संवर्धन में बने रह सकते हैं, लेकिन वे संवर्धन प्रणाली में कोशिकाओं के व्यवहार और चयापचय को बदल सकते हैं। क्रोनिक माइकोप्लाज्मा संक्रमण की संभावित अभिव्यक्तियों में कोशिका प्रसार दर में कमी, परमाणु घनत्व में कमी और निलंबन संस्कृति में कोशिका एकत्रीकरण शामिल है। माइकोप्लाज्मा संदूषण का पता लगाने के लिए सबसे प्रभावी तरीके फ्लोरोसेंस स्टेनिंग, एलिसा, पीसीआर, इम्यूनोस्टेनिंग, रेडियोग्राफिक स्व-विकास, या समय-समय पर संस्कृति का परीक्षण करने के लिए सूक्ष्मजीवविज्ञानी निर्धारण तकनीक हैं।

पार संदूषण:

यद्यपि माइक्रोबियल संदूषण जितना सामान्य नहीं है, कई कोशिका रेखाओं और हेला कोशिकाओं जैसी तेजी से बढ़ती कोशिका रेखाओं के बीच व्यापक क्रॉस-संदूषण एक स्पष्ट समस्या है। प्रतिष्ठित सेल बैंकों से सेल लाइनें प्राप्त करना, नियमित रूप से सेल लाइनों के गुणों की जांच करना, और अच्छी सड़न रोकने वाली तकनीकों का उपयोग करना क्रॉस-संदूषण से बचने में मदद करने के पारंपरिक तरीके हैं।

एंटीबायोटिक्स का उपयोग:

सेल कल्चर में एंटीबायोटिक दवाओं का नियमित रूप से उपयोग नहीं किया जाना चाहिए क्योंकि उनका अत्यधिक उपयोग एंटीबायोटिक-प्रतिरोधी उपभेदों के विकास को बढ़ावा दे सकता है, जिससे लगातार निम्न स्तर का संदूषण हो सकता है। एक बार एंटीबायोटिक्स हटा दिए जाने के बाद, यह निम्न-स्तरीय संदूषण अंततः बड़े पैमाने पर संदूषण में विकसित हो सकता है, और एंटीबायोटिक दवाओं का निरंतर उपयोग माइकोप्लाज्मा संक्रमण और अन्य प्रकार के संदूषण को भी छुपा सकता है। इसलिए, एंटीबायोटिक दवाओं का उपयोग केवल संदूषण के खिलाफ अंतिम उपाय के रूप में किया जा सकता है और इसका उपयोग केवल थोड़े समय के लिए किया जाना चाहिए, और जितनी जल्दी हो सके हटा दिया जाना चाहिए।