Hogyan lehet megakadályozni a fertőzést a sejttenyészetben?

Ez a cikk elsősorban a sejtszennyeződések gyakori típusait mutatja be.

Munkaterület:

1. Megfelelően van beállítva a sejttenyésztéshez szükséges szellőzőburkolat?

2. Vannak-e légáramlások vagy közvetlen bemeneti csatornák azon a területen, ahol a sejtkultúra szellőzőburkolata található?

3. Tiszta a munkaasztal?

4. Csak a kísérlethez szükséges tárgyak kerültek a munkapadra?

5. 
   

6. Letörölte a munkapadot 70%-os etanollal a munka megkezdése előtt?

7. Rendszeresen tisztítja és fertőtleníti az inkubátort, hűtőszekrényt, fagyasztót és egyéb laboratóriumi berendezéseket?

Személyes higiénia:

1. Megmostad a kezed?

2. Viseltél egyéni védőfelszerelést?

3. Ha hosszú a haja, akkor hátra van kötve?

4. Használ pipettát a folyadékok kezelésére?

5. Reagensek és táptalajok

6. A laboratóriumban elkészített összes reagenst, táptalajt és oldatot megfelelő módszerekkel sterilizálta?

7. Mielőtt az edényeket, kultúrpalackokat, kultúrtányérokat és kultúrtányérokat a munkafelületre helyezné, letörölte a külsejüket 70%-os etanollal?

8. Meghúzta a reagenspalackok, kultúrpalackok és egyéb tartályok fedelét, amikor nem használják őket?

9. Minden tenyésztő lemezt steril, légmentesen záródó tasakokba helyeztek?

10. Vannak-e szennyeződés jelei a reagensekben, például zavarosság, lebegő részecskék, kellemetlen szagok vagy rendellenes színek? Ha igen, kitisztította vagy eldobta őket?

Művelet:

1. Lassan, óvatosan dolgozik, és ügyel az aszeptikus technikákra?

2. Letörölte a pipetták, reagenspalackok és tenyészpalackok felületét 70%-os etanollal, mielőtt a sejttenyésztő szellőzőburkolatba helyezte őket?

3. A fedeleket lefelé helyezte a munkaterületen?

4. Steril üvegpipettákat vagy eldobható steril műanyag pipettákat használ a folyadékok kezelésére?

5. Csak egyszer használ steril pipettákat, hogy elkerülje a keresztszennyeződést?

6. Elkerülte, hogy a pipetta hegyével hozzáérjen bármilyen nem steril tárgyhoz, beleértve a palacknyak meneteinek külső szélét is?

7. Ha folyadék kiömlött, azonnal felszívta és letörölte a területet 70%-os etanollal?

Meg kell jegyezni, hogy a tárgyak elhelyezése és elrendezése a szupertiszta padon, valamint a személyes higiénia, például a hosszú haj, könnyen figyelmen kívül hagyható. A szupertiszta padon túl sok tárgy zavarhatja a légáramlást és a légnyomást, ezért mindenkinek oda kell figyelnie.

'Ismerd meg magad és az ellenséged, és soha nem fogsz legyőzni száz csatában.' Ha tudjuk, hogyan előzhetjük meg a fertőzést, azt is tudnunk kell azonosítani. Végül is a szennyezett sejteket azonnal el kell dobni, különben ha a szennyeződések összegyűjtik az összes drágakövet, akkor...

A sejttenyészet szennyezettsége főként két kategóriába sorolható: kémiai szennyeződések, például szennyeződések a táptalajban, szérumban és vízben, endotoxinok, lágyítók és detergensek; és biológiai szennyeződések, például baktériumok, gombák, élesztőgombák, vírusok, mikoplazma és más sejtvonalak keresztszennyeződése.

Bakteriális szennyeződés:

A baktériumok különböző formájúak, például gömb alakúak, rúd alakúak és spirál alakúak. A baktériumok és a gombák együtt alkotják a sejttenyészetben leggyakrabban előforduló biológiai szennyeződéseket. Ha a sejteket baktériummal szennyezik, az gyakran egy-két napon belül, egyszerű, szabad szemmel történő megfigyeléssel kimutatható, és a táptalaj pH-értéke hirtelen lecsökkenhet. Az alábbi képen 293 E. coli-val szennyezett sejt látható, amelyek tapadó sejtként növekednek.

Gombás fertőzés:

A gombás fertőzés kezdeti szakaszában a táptalaj pH-ja stabil marad, de a szennyeződés romlásával a pH gyorsan megemelkedik, amitől a táptalaj zavarossá válik. Mikroszkóp alatt a hifák gyakran vékony kötegekként, néha pedig sűrű spóracsoportokként jelennek meg. A spórák nyugalmi időszakában ellenállnak a rendkívül zord és kedvezőtlen környezetnek. Ezért, ha gombás fertőzés lép fel, azonnal el kell dobni a sejteket, hogy megakadályozzuk a nagymértékű szennyeződést az inkubátorban.

Élesztő szennyeződés:

A bakteriális szennyeződéshez hasonlóan a táptalaj zavarossá válik, ha élesztővel szennyeződik, különösen a késői stádiumú szennyeződés során. A táptalaj pH-ja nagyon kevéssé változik élesztővel való szennyeződés után, és csak akkor növekszik, ha a szennyeződés súlyos. Mikroszkóp alatt az élesztő egyedi ovális vagy gömb alakú részecskékként jelenik meg, amelyek egy része leánysejtekké rügyezhet. Az alábbi képen 293 élesztővel szennyezett sejt látható.

Vírusfertőzés:

A vírusok rendkívül kis méretűek, ezért nehéz észlelni és eltávolítani őket a sejttenyészetben használt reagensekből. Mivel a legtöbb vírus nagyon szigorú követelményeket támaszt gazdáival szemben, általában nincs káros hatásuk a sajátjukon kívüli gazdafajokból származó sejttenyészetekre. A vírusokkal fertőzött sejttenyészetek használata azonban komoly egészségügyi veszélyt jelenthet a kísérleti üzemeltetők számára.

Mycoplasma fertőzés:

A mikoplazmát a legkisebb önreplikáló organizmusnak tekintik. Rendkívül kis mérete miatt a mikoplazma kimutatása nagyon nehéz, és gyakran nincsenek nyilvánvaló fertőzési jelek, kivéve, ha a sűrűség nagyon magas. Egyes mikoplazmák még a sejttenyészetekben is megmaradhatnak anélkül, hogy sejthalált okoznának, de megváltoztathatják a sejtek viselkedését és anyagcseréjét a tenyésztőrendszerben. A krónikus mycoplasma fertőzés lehetséges megnyilvánulásai közé tartozik a sejtproliferáció csökkenése, a nukleáris sűrűség csökkenése és a sejtaggregáció a szuszpenziós tenyészetben. A mikoplazma-szennyeződés kimutatásának leghatékonyabb módszerei a fluoreszcens festés, ELISA, PCR, immunfestés, radiográfiás önfejlesztés, vagy a tenyészet időszakos tesztelésére szolgáló mikrobiológiai meghatározási technikák.

Keresztszennyeződés:

Bár nem olyan gyakori, mint a mikrobiális szennyeződés, a sok sejtvonal és a gyorsan növekvő sejtvonalak, például a HeLa sejtek közötti széles körben elterjedt keresztszennyeződés egyértelmű probléma. A sejtvonalak jó hírű sejtbankokból való beszerzése, a sejtvonalak tulajdonságainak rendszeres ellenőrzése és a jó aszeptikus technikák alkalmazása hagyományos módszerek a keresztszennyeződés elkerülésére.

Az antibiotikumok használata:

Az antibiotikumokat nem szabad rutinszerűen alkalmazni sejttenyészetben, mert túlzott használatuk elősegítheti az antibiotikum-rezisztens törzsek kialakulását, ami tartós, alacsony szintű szennyeződéshez vezethet. Az antibiotikumok eltávolítása után ez az alacsony szintű szennyeződés végül nagymértékű szennyeződéssé fejlődhet, és az antibiotikumok folyamatos használata elfedheti a mikoplazmás fertőzéseket és más típusú szennyeződéseket is. Ezért az antibiotikumok csak a szennyeződés elleni végső megoldásként használhatók, és csak rövid ideig szabad használni, és a lehető leghamarabb el kell távolítani.