Hogyan lehet megelőzni a szennyeződést a sejttenyészetben?

Ez a cikk elsősorban a sejtszennyezés általános típusait vezeti be.

Munkaterület:

1. Helyesen van beállítva a sejttenyészet szellőztető motorja?

2. Van -e légáram vagy közvetlen belépési csatornák azon a területen, ahol a sejttenyésztő szellőztetés található?

3. Tiszta a munkapad?

4. Csak a kísérlethez szükséges tételeket helyezték a munkapadra?

5. 
   

6. A munka megkezdése előtt megsemmisítette a munkapadot 70% -os etanollal?

7. Rendszeresen tisztítja és fertőtleníti az inkubátor, hűtőszekrény, fagyasztó és egyéb laboratóriumi berendezések?

Személyes higiénia:

1. Mossa meg a kezét?

2. Viselt személyi védőfelszerelést?

3. Ha hosszú haja van, vissza van kötve?

4. Pipettát használ a folyadékok kezelésére?

5. Reagensek és kulturális közeg

6. Sterilizálta -e a laboratóriumban elkészített összes reagens, közeg és oldat megfelelő módszerekkel?

7. Mielőtt tartályokat, kulturális palackokat, kulturális lemezeket és tenyésztési ételeket helyezne a munkafelületre, megtörölte a külső részüket 70% -os etanollal?

8. Meghúzta -e a reagens palackok, a kulturális palackok és más tartályok fedeleit, ha nem használják?

9. Az összes tenyésztési lemezt steril, légmentesen lezárt zsákokba helyezték?

10. Vannak -e a reagensekben a szennyeződés jelei, például a felhősség, a lebegő részecskék, a kellemetlen szagok vagy a rendellenes színek? Ha igen, megtisztította vagy eldobta őket?

Művelet:

1. Lassan, óvatosan működik, és figyel az aszeptikus technikákra?

2. Megtisztította -e a pipetták, a reagens palackok és a 70% -os etanollal ellátott tenyésztési palackok felületeit, mielőtt a sejttenyésztő szellőztetőházba helyezte őket?

3. Helyezte a fedeleket lefelé a munkaterületen?

4. Steril üvegpipetteket vagy eldobható steril műanyag pipettákat használ a folyadékok kezelésére?

5. A keresztszennyeződés elkerülése érdekében csak egyszer használ steril pipettákat?

6. Kerülte-e a pipetta csúcsának megérintését bármely nem steril cikkhez, beleértve a palack nyakszálak külső szélét is?

7. Ha folyékony kiömlések fordulnak elő, azonnal felszívta -e és 70% -os etanollal törölte a területet?

Meg kell jegyezni, hogy a szuper tiszta padon lévő tárgyak elhelyezése és elrendezése, valamint a személyes higiénia, például a hosszú haj, könnyen figyelmen kívül hagyható. A szuper tiszta padon túl sok elem beavatkozhat a légáramlásba és a légnyomásba, így mindenkinek figyelnie kell.

'' Ismerje meg magát és az ellenségedet, és soha nem fog legyőzni száz csatában. '' Tudva, hogyan lehet megakadályozni a szennyeződést, akkor is tudnunk kell, hogyan lehet azonosítani. Végül is a szennyezett sejteket haladéktalanul el kell dobni, különben, ha a szennyező anyagok összegyűjtik az összes drágakövet, akkor ...

A sejttenyészet -szennyeződés elsősorban két kategóriába oszlik: kémiai szennyeződések, például szennyeződések a tenyésztésben, a szérumban és a vízben, az endotoxinokban, a lágyítókban és a mosószerekben; és a biológiai szennyező anyagok, például baktériumok, gombák, élesztő, vírusok, mikoplazma és más sejtvonalak keresztszennyeződése.

Bakteriális szennyeződés:

A baktériumok különböző formájúak, például gömb alakú, rúd alakú és spirál alakúak. A baktériumok és a gombák együttesen alkotják a sejttenyészet leggyakrabban felmerült biológiai szennyeződéseit. Ha a sejteket baktériumokkal szennyezik, akkor ezt egy vagy két napon belül gyakran szabad szemmel észlelve észlelhető, és a tápközeg pH -értéke hirtelen csökkenhet. Az alábbi kép 293 sejtet mutat az E. coli -val szennyezett és tapadó sejtekként növekszik.

Gombás szennyeződés:

A gombás szennyeződés kezdeti szakaszában a tápközeg pH -ja stabil marad, de mivel a szennyeződés romlik, a pH gyorsan növekszik, ami a közeg zavarossá válik. A mikroszkóp alatt a hyphae gyakran vékony kötegekként és néha sűrű spórákként jelenik meg. A spórák a nyugalmi állapotban ellenállnak a rendkívül kemény és kedvezőtlen környezetnek. Ezért, amikor gombás szennyeződés történik, akkor a sejteket haladéktalanul el kell dobni, hogy megakadályozzák az inkubátorban a nagyszabású szennyeződést.

Élesztőszennyezés:

A baktériumszennyezéshez hasonlóan a tápközeg zavarossá válik, ha élesztővel szennyeződik, különösen a késői stádiumú szennyeződés során. A tápközeg pH -ja az élesztővel történő szennyezés után nagyon kevésbé változik, és csak akkor növekszik, ha a szennyeződés súlyos. A mikroszkóp alatt az élesztő egyedi ovális vagy gömb alakú részecskékként jelenik meg, amelyek közül néhány a lánysejtekbe bocsáthat. Az alábbi kép 293 sejtet mutat az élesztővel.

Vírusszennyezés:

A vírusok rendkívül kicsi méretűek, megnehezítve a sejttenyészetben használt reagensek észlelését és eltávolítását. Mivel a legtöbb vírusnak nagyon szigorú követelményei vannak a gazdaszervezetekre, általában nem befolyásolják a gazdaszervezetfajok sejttenyészeteit, kivéve a sajátjukat. A vírusokkal fertőzött sejttenyészetek használata azonban súlyos egészségügyi veszélyeket jelenthet a kísérleti operátorok számára.

Mycoplasma szennyeződés:

A mycoplasma a legkisebb öncsökkentő szervezetnek tekinthető. Rendkívül kicsi méretének köszönhetően a mycoplasma kimutatása nagyon nehéz, és gyakran nincsenek nyilvánvaló fertőzés jelei, kivéve, ha a sűrűség nagyon magas. Néhány mycoplasma még a sejttenyészetekben is fennmaradhat anélkül, hogy sejthalálot okozna, ám ezek megváltoztathatják a sejtek viselkedését és anyagcseréjét a tenyésztési rendszerben. A krónikus mycoplasma fertőzés lehetséges megnyilvánulásai között szerepel a sejtproliferációs sebesség csökkenése, a nukleáris sűrűség csökkenése és a sejtek aggregációja a szuszpenziós tenyészetben. A mycoplasma szennyeződés kimutatására a leghatékonyabb módszerek a fluoreszcencia festés, az ELISA, a PCR, az immunfestés, a radiográfiai önfejlesztési vagy a mikrobiológiai meghatározási technikák a tenyészet időszakos tesztelésére.

Keresztszennyeződés:

Noha nem olyan gyakori, mint a mikrobiális szennyeződés, a sok sejtvonal és a gyorsan növekvő sejtvonalak, például a HeLa sejtek közötti széles körű keresztszennyezés egyértelmű probléma. A jó hírű sejtbankokból származó sejtvonalak beszerzése, a sejtvonalak tulajdonságainak rendszeres ellenőrzése és a jó aszeptikus technikák alkalmazása a hagyományos módszerek a keresztszennyezés elkerülésére.

Antibiotikumok használata:

Az antibiotikumokat nem szabad rutinszerűen használni a sejttenyészetben, mivel túlzott felhasználásuk elősegítheti az antibiotikum-rezisztens törzsek kialakulását, ami tartós alacsony szintű szennyeződéshez vezet. Miután az antibiotikumokat eltávolították, ez az alacsony szintű szennyeződés végül nagyszabású szennyeződésgé alakulhat, és az antibiotikumok folyamatos használata elfedheti a mycoplasma fertőzéseket és más típusú szennyeződést is. Ezért az antibiotikumok csak a szennyeződés elleni végső megoldásként használhatók, és csak rövid ideig használhatók, és a lehető leghamarabb el kell távolítani.