Görünümler: 0 Yazar: Site Editor Yayınlanma Zamanı: 2023-07-04 Köken: Alan
Bu makale esas olarak ortak hücre kontaminasyonu türlerini tanıtmaktadır.
Çalışma alanı:
Hücre kültürü için havalandırma davlumbazı doğru mı kuruluyor?
Hücre kültürü havalandırma kaputunun bulunduğu alanda hava akışları veya doğrudan giriş kanalı var mı?
Çalışma tezgahı temiz mi?
Sadece deney için gerekli öğeler çalışma tezgahına yerleştirildi mi?
İşe başlamadan önce çalışma tezgahını% 70 etanol ile sildiniz mi?
İnkübatör, buzdolabı, dondurucu ve diğer laboratuvar ekipmanlarını düzenli olarak temizliyor ve dezenfekte ediyor musunuz?
Kişisel Hijyen:
Ellerini yıkadın mı?
Kişisel koruyucu ekipman giydiniz mi?
Uzun saçlarınız varsa, geri bağlı mı?
Sıvıları idare etmek için bir pipet mi kullanıyorsunuz?
Reaktifler ve kültür medyası
Uygun yöntemleri kullanarak laboratuvarda hazırlanan tüm reaktifleri, medya ve çözümleri sterilize ettiniz mi?
Kaplar, kültür şişeleri, kültür plakaları ve kültür yemeklerini çalışma yüzeyine yerleştirmeden önce, dışlarını% 70 etanol ile sildiniz mi?
Kullanılmadığında reaktif şişelerinin, kültür şişelerinin ve diğer kapların kapaklarını sıkttınız mı?
Tüm kültür plakaları steril, hava geçirmez torbalara yerleştirildi mi?
Reaktiflerde bulutluluk, yüzen parçacıklar, hoş olmayan kokular veya anormal renkler gibi kontaminasyon belirtileri var mı? Eğer öyleyse, onları temizlediniz veya attınız mı?
Operasyon:
Yavaş, dikkatli mi çalışıyor ve aseptik tekniklere dikkat ediyor musunuz?
Hücre kültürü havalandırma kaputuna yerleştirmeden önce% 70 etanol ile pipet, reaktif şişeleri ve kültür şişelerinin yüzeylerini sildiniz mi?
Kapakları çalışma alanına aşağı bakacak şekilde yerleştirdiniz mi?
Sıvıları işlemek için steril cam pipetler mi yoksa tek kullanımlık steril plastik pipetler mi kullanıyorsunuz?
Çapraz kontaminasyondan kaçınmak için steril pipetler sadece bir kez mi kullanıyorsunuz?
Şişe boyun ipliklerinin dış kenarı da dahil olmak üzere steril olmayan ürünlere pipetin ucuna dokunmaktan kaçındınız mı?
Sıvı dökülmeleri meydana gelirse, hemen emdiniz ve alanı% 70 etanol ile sildiniz mi?
Süper temiz tezgah üzerine öğelerin yerleştirilmesinin ve düzenlenmesinin ve uzun saçlar gibi kişisel hijyenlerin kolayca göz ardı edildiğine dikkat edilmelidir. Süper temiz tezgahtaki çok fazla ürün hava akışı ve hava basıncına parazit yaratabilir, bu nedenle herkesin dikkat etmesi gerekir.
'Kendinizi ve düşmanınızı tanıyın ve asla yüz savaşta yenilmeyeceksiniz. Sonuçta, kontamine hücrelerin derhal atılması gerekir, aksi takdirde, kirleticiler tüm mücevherleri toplarsa, ...
Hücre kültürü kontaminasyonu esas olarak iki kategoriye ayrılır: kültür ortamındaki safsızlıklar, serum ve su, endotoksinler, plastikleştiriciler ve deterjanlar gibi kimyasal kirleticiler; ve bakteriler, mantarlar, maya, virüsler, mikoplazma ve diğer hücre çizgilerinin çapraz kontaminasyonu gibi biyolojik kirleticiler.
Bakteriyel kontaminasyon:
Bakteriler küresel, çubuk şeklindeki ve spiral şekilli gibi çeşitli şekillerde gelir. Bakteriler ve mantarlar birlikte, hücre kültüründe en sık karşılaşılan biyolojik kirleticileri oluşturur. Hücreler bakterilerle kontamine edildiğinde, genellikle çıplak gözle basit bir gözlemle bir veya iki gün içinde tespit edilebilir ve kültür ortamının pH değeri aniden azalabilir. Aşağıdaki görüntü, E. coli ile kontamine edilmiş ve yapışan hücreler olarak büyüyen 293 hücreyi göstermektedir.
Mantar kontaminasyonu:
Mantar kontaminasyonunun ilk aşamasında, kültür ortamının pH'ı stabil kalır, ancak kontaminasyon kötüleştikçe pH hızla artar ve ortamın bulanık olmasına neden olur. Mikroskop altında, hiphalar genellikle ince demetler ve bazen yoğun spor kümeleri olarak görünür. Sporlar, dinlenme sırasında son derece sert ve olumsuz ortamlara dayanabilir. Bu nedenle, mantar kontaminasyonu meydana geldiğinde, inkübatörde büyük ölçekli kontaminasyonu önlemek için hücreleri derhal atılması gerekir.
Maya kontaminasyonu:
Bakteriyel kontaminasyona benzer şekilde, özellikle geç evre kontaminasyonu sırasında maya ile kirlendiğinde kültür ortamı bulanıklaşır. Kültür ortamının pH'sı maya ile kontaminasyondan sonra çok az değişir ve sadece kontaminasyon şiddetli olduğunda artar. Mikroskop altında maya, bazıları kız hücrelerine tomurcuk edebilecek bireysel oval veya küresel parçacıklar olarak ortaya çıkar. Aşağıdaki görüntü maya ile kontamine 293 hücreyi göstermektedir.
Viral kontaminasyon:
Virüsler son derece küçük boyutlara sahiptir, bu da bunları hücre kültüründe kullanılan reaktiflerden tespit etmeyi ve çıkarmayı zorlaştırır. Çoğu virüs, konakçıları için çok katı gereksinimlere sahip olduğundan, genellikle hücre kültürleri üzerinde konakçı türlerden kendileri dışında olumsuz etkileri yoktur. Bununla birlikte, virüslerle enfekte olmuş hücre kültürlerinin kullanılması, deneysel operatörlere ciddi sağlık tehditleri oluşturabilir.
Mikoplazma kontaminasyonu:
Mycoplasma, kendi kendini kopyalayan en küçük organizma olarak kabul edilir. Son derece küçük boyutu nedeniyle, mikoplazma tespiti çok zordur ve yoğunluk çok yüksek olmadığı sürece genellikle belirgin bir enfeksiyon belirtisi yoktur. Bazı mikoplazma, hücre ölümüne neden olmadan hücre kültürlerinde bile devam edebilir, ancak kültür sistemindeki hücrelerin davranışını ve metabolizmasını değiştirebilirler. Kronik mikoplazma enfeksiyonunun olası belirtileri arasında hücre proliferasyon oranında bir azalma, nükleer yoğunlukta bir azalma ve süspansiyon kültüründe hücre agregasyonu bulunur. Mikoplazma kontaminasyonunu tespit etmek için en etkili yöntemler, kültürü periyodik olarak test etmek için floresan boyama, ELISA, PCR, immün boyama, radyografik kendini geliştirme veya mikrobiyolojik belirleme teknikleridir.
Çapraz kontaminasyon:
Mikrobiyal kontaminasyon kadar yaygın olmasa da, birçok hücre çizgisi arasındaki yaygın çapraz kontaminasyon ve HeLa hücreleri gibi hızla büyüyen hücre dizileri açık bir sorundur. Saygın hücre bankalarından hücre hatları elde etmek, hücre hatlarının özelliklerini düzenli olarak kontrol etmek ve iyi aseptik teknikler kullanmak, çapraz kontaminasyondan kaçınmaya yardımcı olmak için geleneksel yöntemlerdir.
Antibiyotik kullanımı:
Antibiyotikler hücre kültüründe rutin olarak kullanılmamalıdır, çünkü aşırı kullanımları antibiyotiğe dirençli suşların gelişimini teşvik edebilir ve bu da kalıcı düşük seviyeli kontaminasyona yol açar. Antibiyotikler çıkarıldıktan sonra, bu düşük seviyeli kontaminasyon sonunda büyük ölçekli kontaminasyona dönüşebilir ve antibiyotiklerin sürekli kullanımı mikoplazma enfeksiyonlarını ve diğer kontaminasyon türlerini de maskeleyebilir. Bu nedenle, antibiyotikler sadece kontaminasyona karşı son çare olarak kullanılabilir ve sadece kısa bir süre için kullanılmalı ve mümkün olan en kısa sürede çıkarılmalıdır.
