Hücre kültüründe kontaminasyon nasıl önlenir?

Bu makale temel olarak yaygın hücre kontaminasyonu türlerini tanıtmaktadır.

Çalışma alanı:

1. Hücre kültürü havalandırma başlığı doğru şekilde kurulmuş mu?

2. Hücre kültürü havalandırma davlumbazının bulunduğu alanda herhangi bir hava akışı veya doğrudan giriş kanalı var mı?

3. Tezgah temiz mi?

4. Tezgahın üzerine sadece deney için gerekli olan eşyalar mı yerleştirildi?

5. 
   

6. Çalışmaya başlamadan önce tezgahınızı %70 etanolle sildiniz mi?

7. Küvöz, buzdolabı, dondurucu ve diğer laboratuvar ekipmanlarını düzenli olarak temizleyip dezenfekte ediyor musunuz?

Kişisel hijyen:

1. Ellerini yıkadın mı?

2. Kişisel koruyucu ekipman kullandınız mı?

3. Eğer saçınız uzunsa arkadan mı bağlı?

4. Sıvıları işlemek için pipet mi kullanıyorsunuz?

5. Reaktifler ve kültür ortamı

6. Laboratuvarda hazırlanan tüm reaktifleri, besiyerlerini ve solüsyonları uygun yöntemler kullanarak sterilize ettiniz mi?

7. Kapları, kültür şişelerini, kültür tabaklarını ve kültür kaplarını çalışma yüzeyine yerleştirmeden önce dış yüzeylerini %70 etanol ile sildiniz mi?

8. Kullanılmadığı zaman reaktif şişelerinin, kültür şişelerinin ve diğer kapların kapaklarını sıktınız mı?

9. Tüm kültür plakaları steril, hava geçirmez torbalara yerleştirildi mi?

10. Reaktiflerde bulanıklık, yüzen parçacıklar, hoş olmayan kokular veya anormal renkler gibi herhangi bir kontaminasyon belirtisi var mı? Eğer öyleyse, onları temizlediniz mi veya attınız mı?

Operasyon:

1. Yavaş mı, dikkatli mi çalışıyorsunuz ve aseptik tekniklere dikkat ediyor musunuz?

2. Pipetlerin, reaktif şişelerinin ve kültür şişelerinin yüzeylerini hücre kültürü havalandırma başlığına yerleştirmeden önce %70 etanolle sildiniz mi?

3. Çalışma alanında kapakları aşağıya bakacak şekilde yerleştirdiniz mi?

4. Sıvıları işlemek için steril cam pipetler mi yoksa tek kullanımlık steril plastik pipetler mi kullanıyorsunuz?

5. Çapraz kontaminasyonu önlemek için steril pipetleri yalnızca bir kez mi kullanıyorsunuz?

6. Pipetin ucunu, şişe boynu ipliklerinin dış kenarı da dahil olmak üzere, steril olmayan herhangi bir nesneye dokunmaktan kaçındınız mı?

7. Sıvı dökülmesi durumunda hemen emip bölgeyi %70 etanolle sildiniz mi?

Süper temiz tezgah üzerindeki eşyaların yerleştirilmesi ve düzenlenmesinin yanı sıra uzun saç gibi kişisel hijyenin de kolaylıkla gözden kaçırılabileceğine dikkat edilmelidir. Süper temiz tezgah üzerinde çok fazla eşya hava akışına ve hava basıncına müdahale edebilir, bu nedenle herkesin dikkat etmesi gerekir.

'Kendinizi ve düşmanınızı tanırsanız, yüz savaşta asla yenilemezsiniz.' Kirlenmeyi nasıl önleyeceğimizi bildiğimiz gibi, onu nasıl tanımlayacağımızı da bilmemiz gerekir. Sonuçta, kirlenmiş hücrelerin derhal atılması gerekiyor, aksi takdirde kirleticiler tüm mücevherleri toplarsa...

Hücre kültürü kontaminasyonu temel olarak iki kategoriye ayrılır: kültür ortamı, serum ve sudaki yabancı maddeler, endotoksinler, plastikleştiriciler ve deterjanlar gibi kimyasal kirleticiler; ve bakteri, mantar, maya, virüs, mikoplazma gibi biyolojik kirleticiler ve diğer hücre dizilerinin çapraz kontaminasyonu.

Bakteriyel kirlenme:

Bakteriler küresel, çubuk şekilli ve spiral şekilli gibi çeşitli şekillerde olabilir. Bakteriler ve mantarlar birlikte hücre kültüründe en sık karşılaşılan biyolojik kirleticileri oluşturur. Hücreler bakterilerle kontamine olduğunda, genellikle bir veya iki gün içinde çıplak gözle basit bir gözlemle tespit edilebilir ve kültür ortamının pH değeri aniden düşebilir. Aşağıdaki görüntü E. coli ile kontamine olmuş ve yapışık hücreler olarak büyüyen 293 hücreyi göstermektedir.

Mantar kirliliği:

Mantar kontaminasyonunun ilk aşamasında, kültür ortamının pH'ı sabit kalır, ancak kontaminasyon kötüleştikçe pH hızla artar ve ortamın bulanıklaşmasına neden olur. Mikroskop altında hifler sıklıkla ince demetler halinde, bazen de yoğun spor kümeleri halinde görünür. Sporlar dinlenme sırasında son derece sert ve elverişsiz ortamlara dayanabilir. Bu nedenle, mantar kontaminasyonu meydana geldiğinde, inkübatörde büyük ölçekli kontaminasyonu önlemek için hücrelerin derhal atılması gerekir.

Maya kirliliği:

Bakteriyel kontaminasyona benzer şekilde kültür ortamı, özellikle geç evre kontaminasyon sırasında maya ile kontamine olduğunda bulanık hale gelir. Kültür ortamının pH'ı maya ile kontaminasyondan sonra çok az değişir ve sadece kontaminasyon şiddetli olduğunda artar. Mikroskop altında maya, bireysel oval veya küresel parçacıklar olarak görünür; bunlardan bazıları yavru hücrelere dönüşebilir. Aşağıdaki resimde maya ile kontamine olmuş 293 hücre gösterilmektedir.

Viral kirlenme:

Virüsler son derece küçük boyutlara sahiptir, bu da onları tespit etmeyi ve hücre kültüründe kullanılan reaktiflerden uzaklaştırmayı zorlaştırır. Çoğu virüsün konakçıları için çok katı gereksinimleri olduğundan, genellikle kendilerinin dışındaki konakçı türlerin hücre kültürleri üzerinde olumsuz etkileri yoktur. Ancak virüs bulaşmış hücre kültürlerinin kullanımı deney operatörleri için ciddi sağlık tehditleri oluşturabilir.

Mikoplazma kontaminasyonu:

Mikoplazma, kendi kendini kopyalayan en küçük organizma olarak kabul edilir. Son derece küçük boyutundan dolayı mikoplazmanın saptanması çok zordur ve yoğunluk çok yüksek olmadığı sürece genellikle belirgin bir enfeksiyon belirtisi görülmez. Bazı mikoplazmalar, hücre ölümüne neden olmadan hücre kültürlerinde bile varlığını sürdürebilir, ancak kültür sistemindeki hücrelerin davranışını ve metabolizmasını değiştirebilirler. Kronik mikoplazma enfeksiyonunun olası belirtileri arasında hücre çoğalma oranında bir azalma, nükleer yoğunlukta bir azalma ve süspansiyon kültüründe hücre toplanması yer alır. Mikoplazma kontaminasyonunu tespit etmek için en etkili yöntemler floresan boyama, ELISA, PCR, immün boyama, radyografik kişisel gelişim veya kültürü periyodik olarak test etmek için mikrobiyolojik belirleme teknikleridir.

Çapraz bulaşma:

Mikrobiyal kontaminasyon kadar yaygın olmasa da, birçok hücre dizisi arasındaki yaygın çapraz kontaminasyon ve HeLa hücreleri gibi hızla büyüyen hücre dizileri açık bir sorundur. Saygın hücre bankalarından hücre dizileri elde etmek, hücre dizilerinin özelliklerini düzenli olarak kontrol etmek ve iyi aseptik teknikler kullanmak, çapraz kontaminasyonu önlemeye yardımcı olan geleneksel yöntemlerdir.

Antibiyotik kullanımı:

Antibiyotikler hücre kültüründe rutin olarak kullanılmamalıdır çünkü bunların aşırı kullanımı antibiyotiğe dirençli suşların gelişimini teşvik edebilir ve bu da kalıcı düşük seviyeli kontaminasyona yol açabilir. Antibiyotikler ortadan kaldırıldığında, bu düşük seviyeli kontaminasyon sonunda büyük ölçekli kontaminasyona dönüşebilir ve antibiyotiklerin sürekli kullanımı aynı zamanda mikoplazma enfeksiyonlarını ve diğer kontaminasyon türlerini de maskeleyebilir. Bu nedenle antibiyotikler enfeksiyona karşı ancak son çare olarak kullanılmalı ve kısa süreliğine kullanılmalı, en kısa sürede ortadan kaldırılmalıdır.