Comment prévenir la contamination en culture cellulaire ?

Cet article présente principalement les types courants de contamination cellulaire.

Zone de travail :

1. La hotte de ventilation pour la culture cellulaire est-elle correctement installée ?

2. Y a-t-il des flux d’air ou des canaux d’entrée directe dans la zone où se trouve la hotte de ventilation pour culture cellulaire ?

3. L'établi est-il propre ?

4. Seuls les éléments nécessaires à l’expérience ont-ils été placés sur l’établi ?

5. 
   

6. Avez-vous essuyé l'établi avec de l'éthanol à 70 % avant de commencer le travail ?

7. Nettoyez-vous et désinfectez-vous régulièrement l'incubateur, le réfrigérateur, le congélateur et tout autre équipement de laboratoire ?

Hygiène personnelle :

1. Vous êtes-vous lavé les mains ?

2. Avez-vous porté un équipement de protection individuelle ?

3. Si vous avez les cheveux longs, sont-ils attachés ?

4. Utilisez-vous une pipette pour manipuler des liquides ?

5. Réactifs et milieux de culture

6. Avez-vous stérilisé tous les réactifs, milieux et solutions préparés en laboratoire en utilisant des méthodes appropriées ?

7. Avant de placer des récipients, des bouteilles de culture, des plaques de culture et des boîtes de culture sur la surface de travail, avez-vous essuyé leur extérieur avec de l'éthanol à 70 % ?

8. Avez-vous serré les couvercles des flacons de réactifs, des flacons de culture et autres récipients lorsqu'ils ne sont pas utilisés ?

9. Toutes les plaques de culture ont-elles été placées dans des sacs stériles et hermétiques ?

10. Y a-t-il des signes de contamination dans les réactifs, tels qu'un trouble, des particules flottantes, des odeurs désagréables ou des couleurs anormales ? Si oui, les avez-vous nettoyés ou jetés ?

Opération:

1. Travaillez-vous lentement, prudemment et faites-vous attention aux techniques aseptiques ?

2. Avez-vous essuyé les surfaces des pipettes, des flacons de réactifs et des flacons de culture avec de l'éthanol à 70 % avant de les placer dans la hotte de ventilation de culture cellulaire ?

3. Avez-vous placé les couvercles vers le bas dans la zone de travail ?

4. Utilisez-vous des pipettes stériles en verre ou des pipettes stériles jetables en plastique pour manipuler des liquides ?

5. Utilisez-vous des pipettes stériles une seule fois pour éviter toute contamination croisée ?

6. Avez-vous évité de toucher la pointe de la pipette avec des objets non stériles, y compris le bord extérieur des filetages du goulot de la bouteille ?

7. En cas de déversement de liquide, l'avez-vous immédiatement absorbé et essuyé la zone avec de l'éthanol à 70 % ?

Il convient de noter que le placement et la disposition des objets sur le banc super propre, ainsi que l'hygiène personnelle comme les cheveux longs, sont facilement négligés. Trop d'objets sur le banc super propre peuvent perturber le flux d'air et la pression de l'air, donc tout le monde doit y prêter attention.

'Connaissez-vous vous-même et votre ennemi, et vous ne serez jamais vaincu en cent batailles.' Pour savoir prévenir la contamination, il faut aussi savoir l'identifier. Après tout, les cellules contaminées doivent être jetées rapidement, sinon, si les contaminants collectent toutes les pierres précieuses, ce sera...

La contamination des cultures cellulaires est principalement divisée en deux catégories : les contaminants chimiques, tels que les impuretés présentes dans les milieux de culture, le sérum et l'eau, les endotoxines, les plastifiants et les détergents ; et les contaminants biologiques, tels que les bactéries, les champignons, les levures, les virus, les mycoplasmes et la contamination croisée d'autres lignées cellulaires.

Contamination bactérienne :

Les bactéries se présentent sous diverses formes, telles que sphériques, en forme de bâtonnet et en forme de spirale. Les bactéries et les champignons constituent ensemble les contaminants biologiques les plus couramment rencontrés dans la culture cellulaire. Lorsque des cellules sont contaminées par des bactéries, cela peut souvent être détecté en un ou deux jours par simple observation à l'œil nu, et la valeur du pH du milieu de culture peut diminuer soudainement. L'image ci-dessous montre 293 cellules contaminées par E. coli et se développant sous forme de cellules adhérentes.

Contamination fongique :

Au stade initial de la contamination fongique, le pH du milieu de culture reste stable, mais à mesure que la contamination s'aggrave, le pH augmente rapidement, rendant le milieu trouble. Au microscope, les hyphes apparaissent souvent sous forme de minces faisceaux, et parfois sous forme d'amas denses de spores. Les spores peuvent résister à des environnements extrêmement durs et défavorables pendant la dormance. Par conséquent, en cas de contamination fongique, il est nécessaire de jeter rapidement les cellules pour éviter une contamination à grande échelle dans l’incubateur.

Contamination par les levures :

Semblable à la contamination bactérienne, le milieu de culture devient trouble lorsqu’il est contaminé par de la levure, en particulier lors d’une contamination à un stade avancé. Le pH du milieu de culture évolue très peu après une contamination par la levure, et n'augmente que lorsque la contamination est sévère. Au microscope, la levure apparaît sous la forme de particules individuelles ovales ou sphériques, dont certaines peuvent donner naissance à des cellules filles. L'image ci-dessous montre 293 cellules contaminées par de la levure.

Contamination virale :

Les virus ont des tailles extrêmement petites, ce qui rend difficile leur détection et leur élimination des réactifs utilisés dans la culture cellulaire. Comme la plupart des virus ont des exigences très strictes envers leurs hôtes, ils n’ont généralement pas d’effets indésirables sur les cultures cellulaires provenant d’espèces hôtes autres que la leur. Cependant, l’utilisation de cultures cellulaires infectées par des virus peut constituer de graves menaces pour la santé des opérateurs expérimentaux.

Contamination par mycoplasmes :

Le mycoplasme est considéré comme le plus petit organisme auto-réplicant. En raison de leur taille extrêmement petite, la détection des mycoplasmes est très difficile et il n’y a souvent aucun signe évident d’infection, sauf si la densité est très élevée. Certains mycoplasmes peuvent même persister dans les cultures cellulaires sans provoquer la mort cellulaire, mais ils peuvent altérer le comportement et le métabolisme des cellules dans le système de culture. Les manifestations possibles d'une infection chronique à mycoplasmes comprennent une diminution du taux de prolifération cellulaire, une diminution de la densité nucléaire et une agrégation cellulaire dans une culture en suspension. Les méthodes les plus efficaces pour détecter la contamination par les mycoplasmes sont la coloration par fluorescence, l'ELISA, la PCR, l'immunocoloration, l'auto-développement radiographique ou les techniques de détermination microbiologique pour tester périodiquement la culture.

Contamination croisée :

Bien qu’elle ne soit pas aussi courante que la contamination microbienne, la contamination croisée généralisée entre de nombreuses lignées cellulaires et des lignées cellulaires à croissance rapide telles que les cellules HeLa constitue un problème évident. L’obtention de lignées cellulaires auprès de banques de cellules réputées, la vérification régulière des propriétés des lignées cellulaires et l’utilisation de bonnes techniques aseptiques sont des méthodes conventionnelles permettant d’éviter la contamination croisée.

Utilisation d'antibiotiques :

Les antibiotiques ne devraient pas être systématiquement utilisés en culture cellulaire, car leur surutilisation peut favoriser le développement de souches résistantes aux antibiotiques, conduisant à une contamination persistante de faible niveau. Une fois les antibiotiques éliminés, cette contamination de faible niveau peut éventuellement se transformer en contamination à grande échelle, et l’utilisation continue d’antibiotiques peut également masquer les infections à mycoplasmes et d’autres types de contamination. Par conséquent, les antibiotiques ne peuvent être utilisés qu’en dernier recours contre la contamination et ne doivent être utilisés que pendant une courte période et doivent être retirés dès que possible.