Comment empêcher la contamination de la culture cellulaire?

Cet article présente principalement des types communs de contamination cellulaire.

Zone de travail:

1. Le capot de ventilation pour la culture cellulaire est-il correctement installé?

2. Y a-t-il des flux d'air ou des canaux d'entrée directs dans la zone où se trouve le capot de ventilation de la culture cellulaire?

3. L'établissement est-il propre?

4. Seuls les éléments requis pour l'expérience ont-ils été placés sur l'ouchette?

5. 
   

6. Avez-vous essuyé le Workbench avec 70% d'éthanol avant de commencer le travail?

7. Vous nettoyez et désinfectez régulièrement l'incubateur, le réfrigérateur, le congélateur et d'autres équipements de laboratoire?

Hygiène personnelle:

1. Vous avez-vous lavé les mains?

2. Avez-vous porté des équipements de protection personnelle?

3. Si vous avez les cheveux longs, est-il lié?

4. Utilisez-vous une pipette pour gérer les liquides?

5. Réactifs et médias culturels

6. Avez-vous stérilisé tous les réactifs, médias et solutions préparés en laboratoire en utilisant des méthodes appropriées?

7. Avant de placer des conteneurs, des bouteilles de culture, des plaques de culture et des boîtes de culture sur la surface du travail, avez-vous essuyé leurs extérieurs avec de l'éthanol à 70%?

8. Avez-vous resserré les couvercles des bouteilles de réactifs, des bouteilles de culture et d'autres conteneurs lorsqu'ils ne sont pas utilisés?

9. Toutes les plaques de culture ont-elles été placées dans des sacs étanches stériles?

10. Y a-t-il des signes de contamination dans les réactifs, tels que la nébulosité, les particules flottantes, les odeurs désagréables ou les couleurs anormales? Si oui, les avez-vous nettoyés ou jetés?

Opération:

1. Offrez-vous lentement, soigneusement et faites-vous attention aux techniques aseptiques?

2. Avez-vous essuyé les surfaces des pipettes, des bouteilles de réactifs et des bouteilles de culture avec 70% d'éthanol avant de les placer dans le capot de ventilation de la culture cellulaire?

3. Avez-vous placé les couvercles face vers le bas dans la zone de travail?

4. Utilisez-vous des pipettes en verre stériles ou des pipettes en plastique stérile jetables pour gérer les liquides?

5. Utilisez-vous des pipettes stériles une seule fois pour éviter la contamination croisée?

6. Avez-vous évité de toucher la pointe de la pipette à des articles non stériles, y compris le bord extérieur des filetages de cou de bouteille?

7. Si des déversements de liquide se produisent, avez-vous immédiatement absorbé et essuyé la zone avec 70% d'éthanol?

Il convient de noter que le placement et la disposition des articles sur le banc super propre, ainsi que l'hygiène personnelle tels que les cheveux longs, sont facilement négligés. Trop d'articles sur le banc super propre peuvent provoquer des interférences au débit d'air et à la pression de l'air, donc tout le monde doit faire attention.

'Connaissez-vous et votre ennemi, et vous ne serez jamais vaincu dans une centaine de batailles. ' Sachant comment empêcher la contamination, nous devons également savoir comment l'identifier. Après tout, les cellules contaminées doivent être rejetées rapidement, sinon, si les contaminants recueillent tous les gemmes, ce sera ...

La contamination par la culture cellulaire est principalement divisée en deux catégories: les contaminants chimiques, tels que les impuretés dans les milieux de culture, le sérum et l'eau, les endotoxines, les plastifiants et les détergents; et les contaminants biologiques, tels que les bactéries, les champignons, la levure, les virus, les mycoplasmes et la contamination croisée d'autres lignées cellulaires.

Contamination bactérienne:

Les bactéries se présentent sous diverses formes, telles que sphériques, en forme de tige et en forme de spirale. Les bactéries et les champignons constituent ensemble les contaminants biologiques les plus couramment rencontrés dans la culture cellulaire. Lorsque les cellules sont contaminées par des bactéries, elle peut souvent être détectée en un ou deux jours par une simple observation à l'œil nu, et la valeur de pH du milieu de culture peut soudainement diminuer. L'image ci-dessous montre 293 cellules contaminées par E. coli et se développer sous forme de cellules adhérentes.

Contamination fongique:

Dans le stade initial de la contamination fongique, le pH du milieu de culture reste stable, mais à mesure que la contamination s'aggrave, le pH augmente rapidement, provoquant une trouble du milieu. Au microscope, les hyphes apparaissent souvent comme des faisceaux minces, et parfois comme des grappes denses de spores. Les spores peuvent résister aux environnements extrêmement durs et défavorables pendant la dormance. Par conséquent, lorsque la contamination fongique se produit, il est nécessaire de rejeter rapidement les cellules pour empêcher une contamination à grande échelle dans l'incubateur.

Contamination par levure:

Semblable à la contamination bactérienne, le milieu de culture devient trouble lorsqu'il est contaminé par la levure, en particulier lors de la contamination tardive. Le pH du milieu de culture change très peu après la contamination par la levure et n'augmente que lorsque la contamination est grave. Au microscope, la levure apparaît sous forme de particules ovales ou sphériques individuelles, dont certaines peuvent se fondre dans les cellules filles. L'image ci-dessous montre 293 cellules contaminées par la levure.

Contamination virale:

Les virus ont des tailles extrêmement petites, ce qui rend difficile la détection et les retirer des réactifs utilisés dans la culture cellulaire. Comme la plupart des virus ont des exigences très strictes pour leurs hôtes, ils n'ont généralement pas d'effets néfastes sur les cultures cellulaires d'espèces hôtes autres que les leurs. Cependant, l'utilisation de cultures cellulaires infectées par des virus peut constituer de graves menaces pour la santé des opérateurs expérimentaux.

Contamination des mycoplasmes:

Mycoplasma est considéré comme le plus petit organisme auto-reproduit. En raison de sa taille extrêmement petite, la détection du mycoplasma est très difficile, et il n'y a souvent aucun signe évident d'infection à moins que la densité ne soit très élevée. Certains mycoplasmes peuvent même persister dans les cultures cellulaires sans provoquer la mort cellulaire, mais ils peuvent modifier le comportement et le métabolisme des cellules dans le système de culture. Les manifestations possibles de l'infection chronique des mycoplasmes comprennent une diminution du taux de prolifération cellulaire, une diminution de la densité nucléaire et une agrégation cellulaire dans la culture de la suspension. Les méthodes les plus efficaces pour détecter la contamination des mycoplasmes sont la coloration de la fluorescence, l'ELISA, la PCR, l'immunocoloration, le développement auto-développement radiographique ou les techniques de détermination microbiologique pour tester périodiquement la culture.

Contamination croisée:

Bien qu'il ne soit pas aussi courant que la contamination microbienne, la contamination croisée généralisée entre de nombreuses lignées cellulaires et les lignées cellulaires en croissance rapide telles que les cellules HeLa est un problème clair. L'obtention de lignées cellulaires à partir de banques cellulaires réputées, la vérification régulière des propriétés des lignées cellulaires et l'utilisation de bonnes techniques aseptiques sont des méthodes conventionnelles pour éviter la contamination croisée.

Utilisation d'antibiotiques:

Les antibiotiques ne doivent pas être systématiquement utilisés dans la culture cellulaire car leur surutilisation peut favoriser le développement de souches résistantes aux antibiotiques, conduisant à une contamination persistante de bas niveau. Une fois les antibiotiques supprimés, cette contamination de bas niveau peut éventuellement se développer en contamination à grande échelle, et l'utilisation continue d'antibiotiques peut également masquer les infections des mycoplasmes et d'autres types de contamination. Par conséquent, les antibiotiques ne peuvent être utilisés que comme dernier recours contre la contamination et ne doivent être utilisés que pendant une courte période, et ne doivent être supprimés dès que possible.