نمایش ها: 0 نویسنده: ویرایشگر سایت زمان انتشار: 2023-07-04 مبدا: محل
این مقاله به طور عمده انواع متداول آلودگی سلول را معرفی می کند.
منطقه کار:
آیا هود تهویه برای کشت سلول به درستی تنظیم شده است؟
آیا در منطقه ای که هود تهویه کشت سلول در آن قرار دارد ، جریان هوا یا کانال های ورودی مستقیم وجود دارد؟
آیا میز کار تمیز است؟
آیا فقط موارد مورد نیاز برای آزمایش در میز کار قرار داده شده است؟
آیا قبل از شروع کار ، میز کار را با 70 ٪ اتانول پاک کرده اید؟
آیا به طور مرتب انکوباتور ، یخچال ، فریزر و سایر تجهیزات آزمایشگاهی را تمیز و ضد عفونی می کنید؟
بهداشت شخصی:
آیا دستان خود را شسته اید؟
آیا تجهیزات محافظ شخصی را پوشیده اید؟
اگر موهای بلند دارید ، آیا به آن گره خورده است؟
آیا از پیپت برای اداره مایعات استفاده می کنید؟
معرفها و رسانه های فرهنگی
آیا با استفاده از روشهای مناسب ، تمام معرفها ، رسانه ها و راه حل های تهیه شده در آزمایشگاه را استریل کرده اید؟
آیا قبل از قرار دادن ظروف ، بطری های کشت ، صفحات کشت و ظروف کشت بر روی سطح کار ، آیا بیرونی های آنها را با 70 ٪ اتانول پاک کرده اید؟
آیا در صورت عدم استفاده ، درب بطری های معرف ، بطری های کشت و سایر ظروف را محکم کرده اید؟
آیا تمام صفحات کشت در کیسه های استریل و هوایی قرار گرفته اند؟
آیا نشانه هایی از آلودگی در معرفها مانند ابر ، ذرات شناور ، بوهای ناخوشایند یا رنگهای غیر طبیعی وجود دارد؟ اگر چنین است ، آیا آنها را تمیز کرده یا دور ریخته اید؟
عملیات:
آیا شما به آرامی ، با دقت کار می کنید و به تکنیک های آسپتیک توجه می کنید؟
آیا قبل از قرار دادن آنها در هود تهویه کشت سلولی ، سطوح پیپت ، بطری های معرف و بطری های کشت را با 70 ٪ اتانول پاک کرده اید؟
آیا درب های رو به پایین را در محل کار قرار داده اید؟
آیا از پیپت های شیشه ای استریل یا پیپت های پلاستیکی استریل یکبار مصرف برای کنترل مایعات استفاده می کنید؟
آیا برای جلوگیری از آلودگی متقابل فقط یک بار از پیپت های استریل استفاده می کنید؟
آیا از لمس نوک پیپت به هر نوع غیر استریل ، از جمله لبه بیرونی نخ های گردن بطری جلوگیری کرده اید؟
اگر نشت مایع رخ می دهد ، آیا بلافاصله آن را جذب کرده اید و منطقه را با 70 ٪ اتانول پاک کرده اید؟
لازم به ذکر است که قرار دادن و ترتیب وسایل روی نیمکت فوق العاده تمیز و همچنین بهداشت شخصی مانند موهای بلند به راحتی نادیده گرفته می شود. بسیاری از موارد موجود در نیمکت فوق العاده تمیز می توانند باعث دخالت در جریان هوا و فشار هوا شوند ، بنابراین همه باید توجه کنند.
'خود و دشمن خود را بشناسید ، و هرگز در صد نبرد شکست نخواهید یافت. ' دانستن چگونگی جلوگیری از آلودگی ، ما همچنین باید بدانیم که چگونه آن را شناسایی کنیم. از این گذشته ، سلولهای آلوده باید سریعاً دور ریخته شوند ، در غیر این صورت ، اگر آلاینده ها تمام سنگهای قیمتی را جمع کنند ، ...
آلودگی کشت سلولی عمدتاً به دو دسته تقسیم می شود: آلاینده های شیمیایی مانند ناخالصی در محیط کشت ، سرم و آب ، اندوتوکسین ها ، پلاستیک سازها و مواد شوینده. و آلاینده های بیولوژیکی مانند باکتری ها ، قارچ ها ، مخمر ، ویروس ها ، مایکوپلاسما و آلودگی متقابل سایر رده های سلولی.
آلودگی باکتریایی:
باکتری ها به شکل های مختلفی مانند کروی ، میله شکل و مارپیچ شکل می گیرند. باکتری ها و قارچ ها در کنار هم رایج ترین آلاینده های بیولوژیکی در کشت سلولی را تشکیل می دهند. هنگامی که سلول ها به باکتری ها آلوده می شوند ، اغلب با مشاهده ساده با چشم غیر مسلح می توان طی یک یا دو روز تشخیص داد و مقدار pH محیط کشت ممکن است ناگهان کاهش یابد. تصویر زیر 293 سلول آلوده به E. coli را نشان می دهد و به عنوان سلولهای چسبنده رشد می کند.
آلودگی قارچی:
در مرحله اولیه آلودگی قارچی ، pH محیط کشت پایدار می ماند ، اما با بدتر شدن آلودگی ، pH به سرعت افزایش می یابد و باعث می شود محیط کبوتر شود. در زیر میکروسکوپ ، Hyphae اغلب به عنوان بسته های نازک و گاهی به عنوان خوشه های متراکم از اسپورها ظاهر می شود. اسپورها می توانند در طول خواب در محیط های بسیار سخت و نامطلوب مقاومت کنند. بنابراین ، هنگامی که آلودگی قارچی رخ می دهد ، لازم است که سریع سلول ها را دور بیندازید تا از آلودگی در مقیاس بزرگ در انکوباتور جلوگیری شود.
آلودگی مخمر:
مشابه آلودگی باکتریایی ، محیط کشت در هنگام آلوده شدن به مخمر ، به ویژه در دوران آلودگی در اواخر مرحله ، کرک می شود. pH محیط کشت پس از آلودگی با مخمر بسیار کم تغییر می کند و تنها در صورت شدید بودن آلودگی افزایش می یابد. در زیر میکروسکوپ ، مخمر به عنوان ذرات بیضی یا کروی فردی ظاهر می شود که برخی از آنها ممکن است در سلول های دختر جوانه بزنند. تصویر زیر 293 سلول آلوده به مخمر را نشان می دهد.
آلودگی ویروسی:
ویروس ها اندازه های بسیار کمی دارند و تشخیص و حذف آنها از معرفهای مورد استفاده در کشت سلولی را دشوار می کند. از آنجا که بیشتر ویروس ها برای میزبان خود نیازهای بسیار سختی دارند ، آنها به طور کلی عوارض جانبی بر کشت سلولی از گونه های میزبان غیر از خود ندارند. با این حال ، استفاده از کشت سلولی آلوده به ویروس ها می تواند تهدیدهای جدی برای سلامتی برای اپراتورهای آزمایشی ایجاد کند.
آلودگی مایکوپلاسما:
مایکوپلاسما کوچکترین ارگانیسم خود تکرار محسوب می شود. با توجه به اندازه بسیار کوچک ، تشخیص مایکوپلاسما بسیار دشوار است ، و اغلب علائم آشکار عفونت وجود ندارد مگر اینکه چگالی بسیار زیاد باشد. برخی از مایکوپلاسما حتی می توانند بدون ایجاد مرگ سلولی در کشت سلولی همچنان ادامه داشته باشند ، اما می توانند رفتار و متابولیسم سلول ها را در سیستم کشت تغییر دهند. تظاهرات احتمالی عفونت مایکوپلاسما مزمن شامل کاهش میزان تکثیر سلولی ، کاهش تراکم هسته ای و تجمع سلول در کشت تعلیق است. مؤثرترین روشها برای تشخیص آلودگی مایکوپلاسما رنگ آمیزی فلورسانس ، ELISA ، PCR ، ایمن سازی ، توسعه خود رادیوگرافی یا تکنیک های تعیین میکروبیولوژیکی برای آزمایش دوره ای کشت است.
آلودگی متقابل:
اگرچه به اندازه آلودگی میکروبی متداول نیست ، اما آلودگی گسترده بین بسیاری از رده های سلولی و رده های سلولی که به سرعت در حال رشد هستند مانند سلولهای HeLa یک مشکل واضح است. به دست آوردن خطوط سلولی از بانک های سلولی معتبر ، به طور مرتب بررسی خواص خطوط سلولی و استفاده از تکنیک های خوب آسپتیک روشهای معمولی برای جلوگیری از آلودگی متقابل است.
استفاده از آنتی بیوتیک ها:
آنتی بیوتیک ها نباید به طور معمول در کشت سلولی مورد استفاده قرار گیرند زیرا استفاده بیش از حد از آنها می تواند باعث توسعه سویه های مقاوم در برابر آنتی بیوتیک شود و منجر به آلودگی مداوم در سطح پایین شود. پس از برداشتن آنتی بیوتیک ها ، این آلودگی سطح پایین می تواند در نهایت به آلودگی در مقیاس بزرگ تبدیل شود و ادامه استفاده از آنتی بیوتیک ها همچنین می تواند عفونت های مایکوپلاسما و سایر انواع آلودگی را ماسک کند. بنابراین ، آنتی بیوتیک ها فقط می توانند به عنوان آخرین راه حل در برابر آلودگی مورد استفاده قرار گیرند و فقط باید برای مدت زمان کوتاهی مورد استفاده قرار گیرند و باید در اسرع وقت حذف شوند.
