Cum să preveniți contaminarea în cultura celulară?

Acest articol prezintă în principal tipuri comune de contaminare celulară.

Zona de lucru:

1. Hota de ventilație pentru cultura celulară este configurată corect?

2. Există fluxuri de aer sau canale de intrare directă în zona în care se află hota de ventilație a culturii celulare?

3. Bancul de lucru este curat?

4. Au fost plasate pe bancul de lucru doar elementele necesare pentru experiment?

5. 
   

6. Ați șters masa de lucru cu 70% etanol înainte de a începe lucrul?

7. Curățați și dezinfectați în mod regulat incubatorul, frigiderul, congelatorul și alte echipamente de laborator?

Igiena personala:

1. Te-ai spălat pe mâini?

2. Ați purtat echipament individual de protecție?

3. Dacă ai părul lung, este legat la spate?

4. Folosiți o pipetă pentru a manipula lichide?

5. Reactivi și medii de cultură

6. Ați sterilizat toți reactivii, mediile și soluțiile preparate în laborator folosind metode adecvate?

7. Înainte de a pune recipiente, sticle de cultură, plăci de cultură și vase de cultură pe suprafața de lucru, le-ați șters exteriorul cu 70% etanol?

8. Ați strâns capacele sticlelor de reactivi, sticlelor de cultură și altor recipiente atunci când nu sunt utilizate?

9. Au fost plasate toate plăcile de cultură în pungi sterile, etanșe?

10. Există semne de contaminare în reactivi, cum ar fi tulbureală, particule plutitoare, mirosuri neplăcute sau culori anormale? Dacă da, le-ați curățat sau aruncat?

Operare:

1. Operați încet, cu atenție și acordați atenție tehnicilor aseptice?

2. Ați șters suprafețele pipetelor, sticlelor de reactivi și sticlelor de cultură cu 70% etanol înainte de a le plasa în hota de ventilație a culturii celulare?

3. Ați așezat capacele cu fața în jos în zona de lucru?

4. Folosiți pipete sterile din sticlă sau pipete sterile din plastic de unică folosință pentru a manipula lichide?

5. Folosiți pipete sterile o singură dată pentru a evita contaminarea încrucișată?

6. Ați evitat să atingeți vârful pipetei de articole nesterile, inclusiv de marginea exterioară a firelor gâtului sticlei?

7. Dacă apar scurgeri de lichid, l-ați absorbit imediat și ați șters zona cu 70% etanol?

Trebuie remarcat faptul că așezarea și aranjarea articolelor pe banca super curată, precum și igiena personală, cum ar fi părul lung, sunt ușor trecute cu vederea. Prea multe articole pe banca super curată pot provoca interferențe cu fluxul de aer și presiunea aerului, așa că toată lumea trebuie să fie atentă.

„Cunoaște-te pe tine și inamicul tău și nu vei fi niciodată învins într-o sută de bătălii.” Știind cum să prevenim contaminarea, trebuie să știm și cum să o identificăm. La urma urmei, celulele contaminate trebuie aruncate prompt, altfel, dacă contaminanții colectează toate pietrele, va fi...

Contaminarea culturilor celulare este împărțită în principal în două categorii: contaminanți chimici, cum ar fi impuritățile din mediile de cultură, ser și apă, endotoxine, plastifianți și detergenți; și contaminanți biologici, cum ar fi bacterii, ciuperci, drojdie, viruși, micoplasme și contaminare încrucișată a altor linii celulare.

Contaminare bacteriană:

Bacteriile vin în diferite forme, cum ar fi sferice, în formă de tijă și în formă de spirală. Bacteriile și ciupercile alcătuiesc împreună contaminanții biologici cei mai frecvent întâlniți în cultura celulară. Când celulele sunt contaminate cu bacterii, aceasta poate fi adesea detectată în decurs de una sau două zile prin simpla observare cu ochiul liber, iar valoarea pH-ului mediului de cultură poate scădea brusc. Imaginea de mai jos prezintă 293 de celule contaminate cu E. coli și cresc ca celule aderente.

Contaminare fungică:

În stadiul inițial al contaminării fungice, pH-ul mediului de cultură rămâne stabil, dar pe măsură ce contaminarea se înrăutățește, pH-ul crește rapid, determinând tulburarea mediului. La microscop, hifele apar adesea ca mănunchiuri subțiri și uneori ca grupuri dense de spori. Sporii pot rezista în medii extrem de dure și nefavorabile în timpul repausului. Prin urmare, atunci când are loc contaminarea fungică, este necesar să se arunce rapid celulele pentru a preveni contaminarea pe scară largă în incubator.

Contaminarea cu drojdie:

Similar cu contaminarea bacteriană, mediul de cultură devine tulbure atunci când este contaminat cu drojdie, în special în timpul contaminării în stadiu avansat. pH-ul mediului de cultură se modifică foarte puțin după contaminarea cu drojdie și crește doar atunci când contaminarea este severă. La microscop, drojdia apare ca particule individuale ovale sau sferice, dintre care unele pot înmuguri în celulele fiice. Imaginea de mai jos prezintă 293 de celule contaminate cu drojdie.

Contaminare virală:

Virușii au dimensiuni extrem de mici, ceea ce face dificilă detectarea și îndepărtarea acestora din reactivii utilizați în cultura celulară. Deoarece majoritatea virusurilor au cerințe foarte stricte pentru gazdele lor, ei nu au, în general, efecte adverse asupra culturilor de celule de la alte specii gazdă decât a lor. Cu toate acestea, utilizarea culturilor celulare infectate cu viruși poate reprezenta amenințări grave pentru sănătatea operatorilor experimentali.

Contaminarea cu micoplasmă:

Mycoplasma este considerată cel mai mic organism auto-replicator. Datorită dimensiunilor sale extrem de mici, detectarea micoplasmei este foarte dificilă și adesea nu există semne evidente de infecție decât dacă densitatea este foarte mare. Unele micoplasme pot persista chiar și în culturile celulare fără a provoca moartea celulelor, dar pot modifica comportamentul și metabolismul celulelor din sistemul de cultură. Manifestările posibile ale infecției cronice cu micoplasmă includ o scădere a ratei de proliferare celulară, o scădere a densității nucleare și agregarea celulară în cultura suspensiei. Cele mai eficiente metode pentru detectarea contaminării cu micoplasmă sunt colorarea prin fluorescență, ELISA, PCR, imunocolorarea, auto-dezvoltarea radiografică sau tehnicile de determinare microbiologică pentru a testa periodic cultura.

Contaminare încrucișată:

Deși nu este la fel de comună ca contaminarea microbiană, contaminarea încrucișată pe scară largă între multe linii celulare și linii celulare cu creștere rapidă, cum ar fi celulele HeLa, este o problemă clară. Obținerea liniilor celulare de la bănci de celule reputate, verificarea în mod regulat a proprietăților liniilor celulare și utilizarea unor tehnici aseptice bune sunt metode convenționale pentru a ajuta la evitarea contaminării încrucișate.

Utilizarea antibioticelor:

Antibioticele nu trebuie utilizate în mod obișnuit în cultura celulară, deoarece utilizarea lor excesivă poate promova dezvoltarea tulpinilor rezistente la antibiotice, ceea ce duce la o contaminare persistentă la nivel scăzut. Odată ce antibioticele sunt îndepărtate, această contaminare la nivel scăzut se poate dezvolta în cele din urmă într-o contaminare la scară largă, iar utilizarea continuă a antibioticelor poate, de asemenea, masca infecțiile cu micoplasmă și alte tipuri de contaminare. Prin urmare, antibioticele pot fi folosite doar ca ultimă soluție împotriva contaminării și trebuie utilizate doar pentru o perioadă scurtă de timp și trebuie îndepărtate cât mai curând posibil.