Cum să preveniți contaminarea în cultura celulară?

Acest articol introduce în principal tipuri comune de contaminare celulară.

Zona de lucru:

1. Hota de ventilație pentru cultura celulară este creată corect?

2. Există fluxuri de aer sau canale de intrare directă în zona în care se află capota de ventilație a culturii celulare?

3. Banca de lucru este curată?

4. Au fost plasate doar elementele necesare pentru experiment pe bancul de lucru?

5. 
   

6. Ați șters banca de lucru cu 70% etanol înainte de a începe munca?

7. Curățați și dezinfectați în mod regulat incubatorul, frigiderul, congelatorul și alte echipamente de laborator?

Igiena personală:

1. Ți -ai spălat mâinile?

2. Ați purtat echipamente de protecție personală?

3. Dacă aveți părul lung, este legat înapoi?

4. Folosiți o pipetă pentru a gestiona lichide?

5. Reactivi și mass -media de cultură

6. Ați sterilizat toți reactivii, media și soluțiile pregătite în laborator folosind metode adecvate?

7. Înainte de a plasa containere, sticle de cultură, plăci de cultură și vase de cultură pe suprafața muncii, le -ați șters exteriorul cu 70% etanol?

8. Ați strâns capacele sticlelor de reactiv, a sticlelor de cultură și a altor containere atunci când nu sunt utilizate?

9. Au fost plasate toate plăcile de cultură în pungi sterile, etanșe?

10. Există semne de contaminare în reactivi, cum ar fi tulbure, particule plutitoare, mirosuri neplăcute sau culori anormale? Dacă da, le -ați curățat sau i -ați aruncat?

Funcționare:

1. Funcționați încet, cu atenție și acordați atenție tehnicilor aseptice?

2. Ați șters suprafețele pipetelor, sticlelor de reactiv și a sticlelor de cultură cu 70% etanol înainte de a le plasa în capota de ventilație a culturii celulare?

3. Ați așezat capacele orientate în jos în zona de lucru?

4. Folosiți pipete de sticlă sterile sau pipete de plastic sterile de unică folosință pentru a gestiona lichide?

5. Folosiți pipete sterile o singură dată pentru a evita contaminarea încrucișată?

6. Ați evitat să atingeți vârful pipetei la orice articole care nu sunt sterile, inclusiv marginea exterioară a firelor de gât a sticlei?

7. Dacă apar vărsări de lichid, ați absorbit imediat și ați șters zona cu 70% etanol?

Trebuie menționat că plasarea și aranjarea articolelor de pe banca super curată, precum și igiena personală, cum ar fi părul lung, sunt ușor trecute cu vederea. Prea multe articole de pe banca super curată pot provoca interferențe la fluxul de aer și presiunea aerului, astfel încât toată lumea trebuie să acorde atenție.

'Cunoaște -te pe tine și pe dușmanul tău și nu vei fi niciodată învins într -o sută de bătălii. ' Știind cum să preveniți contaminarea, trebuie să știm să o identificăm. La urma urmei, celulele contaminate trebuie aruncate prompt, în caz contrar, dacă contaminanții colectează toate pietrele, va fi ...

Contaminarea culturii celulare este împărțită în principal în două categorii: contaminanți chimici, cum ar fi impuritățile în mediile de cultură, ser și apă, endotoxine, plastifianți și detergenți; și contaminanți biologici, cum ar fi bacterii, ciuperci, drojdie, viruși, micoplasma și contaminarea încrucișată a altor linii celulare.

Contaminare bacteriană:

Bacteriile au diferite forme, cum ar fi sferice, în formă de tijă și în formă de spirală. Bacteriile și ciupercile constituie împreună contaminanții biologici cel mai frecvent în cultura celulară. Când celulele sunt contaminate cu bacterii, acesta poate fi adesea detectat în una sau două zile printr -o observare simplă cu ochiul liber, iar valoarea pH -ului mediului de cultură poate scădea brusc. Imaginea de mai jos arată 293 de celule contaminate cu E. coli și în creștere ca celule aderente.

Contaminare fungică:

În stadiul inițial al contaminării fungice, pH -ul mediului de cultură rămâne stabil, dar pe măsură ce contaminarea se agravează, pH -ul crește rapid, determinând mediul să devină turbid. Sub microscop, hyphae -ul apar adesea ca pachete subțiri și, uneori, ca ciorchini densi de spori. Sporii pot rezista la medii extrem de dure și nefavorabile în timpul dormitorului. Prin urmare, atunci când are loc contaminarea fungică, este necesar să aruncați prompt celulele pentru a preveni contaminarea pe scară largă în incubator.

Contaminare cu drojdie:

Similar cu contaminarea bacteriană, mediul de cultură devine turbid atunci când este contaminat cu drojdie, în special în timpul contaminării în stadiu tardiv. PH -ul mediului de cultură se schimbă foarte puțin după contaminarea cu drojdie și crește numai atunci când contaminarea este severă. Sub microscop, drojdia apare ca particule ovale sau sferice individuale, dintre care unele pot fi înrădăcinate în celulele fiice. Imaginea de mai jos arată 293 de celule contaminate cu drojdie.

Contaminare virală:

Virusurile au dimensiuni extrem de mici, ceea ce face dificilă detectarea și eliminarea lor din reactivii folosiți în cultura celulară. Deoarece majoritatea virușilor au cerințe foarte stricte pentru gazdele lor, în general nu au efecte adverse asupra culturilor celulare de la speciile gazdă, altele decât ale lor. Cu toate acestea, utilizarea culturilor celulare infectate cu viruși poate reprezenta amenințări grave pentru sănătate pentru operatorii experimentali.

Mycoplasma contaminare:

Mycoplasma este considerată cel mai mic organism de auto-replicare. Datorită dimensiunilor sale extrem de mici, detectarea micoplasmei este foarte dificilă și de multe ori nu există semne evidente de infecție decât dacă densitatea este foarte mare. Unele micoplasme pot persista chiar în culturile celulare fără a provoca moartea celulelor, dar pot modifica comportamentul și metabolismul celulelor din sistemul de cultură. Manifestările posibile ale infecției cronice ale micoplasmei includ o scădere a ratei de proliferare a celulelor, o scădere a densității nucleare și agregarea celulară în cultura suspensiei. Cele mai eficiente metode pentru detectarea contaminării micoplasmei sunt colorarea fluorescenței, ELISA, PCR, imunostaining, auto-dezvoltare radiografică sau tehnici de determinare microbiologică pentru a testa periodic cultura.

Contaminare încrucișată:

Deși nu este la fel de frecventă ca contaminarea microbiană, contaminarea încrucișată pe scară largă între multe linii celulare și liniile celulare în creștere rapidă, cum ar fi celulele HeLa, este o problemă clară. Obținerea de linii celulare de la băncile de celule de renume, verificarea regulată a proprietăților liniilor celulare și utilizarea tehnicilor aseptice bune sunt metode convenționale pentru a ajuta la evitarea contaminării încrucișate.

Utilizarea antibioticelor:

Antibioticele nu trebuie utilizate în mod obișnuit în cultura celulară, deoarece utilizarea lor excesivă poate promova dezvoltarea tulpinilor rezistente la antibiotice, ceea ce duce la contaminarea persistentă la nivel scăzut. Odată ce antibioticele sunt eliminate, această contaminare la nivel scăzut se poate transforma în cele din urmă în contaminare la scară largă, iar utilizarea continuă a antibioticelor poate masca, de asemenea, infecțiile cu micoplasma și alte tipuri de contaminare. Prin urmare, antibioticele pot fi utilizate doar ca ultimă soluție împotriva contaminării și ar trebui utilizate doar pentru o perioadă scurtă de timp și ar trebui îndepărtate cât mai curând posibil.